骨髓间充质干细胞的培养和提取

hhxxattxs123

在选择大鼠的过程中，我选择4周龄的雄性大鼠，用全骨髓直接贴壁法，取完原代加入培养瓶后，用显微镜看都是细胞，24小时后换液，有少量成簇梭形细胞可以看到，但是杂细胞较多，7天后传代的时候，细胞都是扁平的，形状不规则，等到长满的时候，也不是像他们所说的呈现出细长形，就是在原代前几天的时候，是梭形的，这样的细胞状态是不是不好啊，还有就是，选择差额贴壁纯化会不会使原来的干细胞减少呢？请求高手指点，细胞传代后能不能变成细长形的呢

orchard

原代刚接种的时候杂细胞就是很多，多换几次液漂浮的杂细胞就会被洗去。你首次传代选择的是7天，我觉得可能早点了，原代的骨髓间充质干细胞最好在首次传代的时候让它长得特别满特别挤再传代，我问过几个有经验的老师都说这个细胞是越密越长，甚至说首次传代可以一比一，就是说换个瓶子再养一遍，等他长得满满的再传代。如果密度不够大的时候就传代，很有可能细胞会长得很慢，像你说的成扁平状，就是细胞老化的迹象，我之前也遇到过这种情况，后来我把几瓶传代后的细胞又汇合到一个瓶子里了。

hhxxattxs123

哦，谢谢哦，有的人长的密的时候再传的话，会加速老化，看别人养的好的，长的密的时候，应该是梭形的对吗？你的是不是梭形的呢
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xiaojunhu1985

我们一般是72小时换液体，如果过早的换液体，MSC可能会因为贴壁不牢会丢掉一部分

hhxxattxs123

我有做过哦，就是先让细胞贴壁30分钟后，再把培养液转移到另外2号培养瓶内，结果2号培养瓶的贴壁细胞就非常少了，损失的话，也是很少一部分的

hhxxattxs123

原代细胞杂细胞较多，但是细胞的形态很好，传代了以后就变的有些扁平，无规则的形态，

orchard

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' Z% H. m. q, r我的长得不太均匀啊 有的地方是梭形的 有的地方是扁平的 之前发过讨论帖啊 大家都有给过一些建议 你可以找来看看

细胞海洋

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8 J. R& A+ w( m- w+ g3 t2 c
6 R( q' _  w' f! L7 R- B2 h5 |) g你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样+ i  C6 T2 Z( C

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hhxxattxs123

回复 orchard 的帖子) ~' V) b+ N7 }

4 ~. S' }; o0 l9 D# W5 k* p' N' h一般传代了以后就基本上均匀了啊，只有原代的时候不均匀的，我一般传代的时候都吹打细胞，加到另外一个培养瓶里面很快就贴壁长均匀了，你的问题可能是没有吹打均匀，然后是细胞培养液不好，生长较慢，一部分细胞死掉了，

hhxxattxs123

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0 {; l1 _3 Q& ^# v" {8 f, D1 k# w* d
还有就是，我的细胞传代以后贴壁后就变的扁平了，原代的时候长的很好，都是细长的梭形的啊，最近买了GIBCO 澳洲的血清和GIBCO培养基，再培养下看看什么情况