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做流式鉴定的抗体可以做免疫荧光??? [复制链接]

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楼主
发表于 2012-11-29 22:09 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
今天看一篇文献,第一次看到居然用CD105-PE做了荧光,用的直接标记法,图还挺好看,想问一下大侠,做流式的抗体可以做免疫荧光吗?查了BD的网站,有的既可以做流式又可以做荧光,我买的抗体上面只写了流式,这样是不是说明不能做了呢?做流式的抗体和做荧光的抗体有什么区别吗???在此请教!
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沙发
发表于 2012-11-29 22:26 |只看该作者
流式抗体比较容易淬灭。做免疫荧光的话,在同等条件下,当然选择做荧光抗体啦,但实在没有,流式抗体还是可以用的,不过最好马上去荧光显微镜下看结果,时间长了不是很好。我用过流式抗体做荧光染色,效果还可以。
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藤椅
发表于 2012-11-29 23:30 |只看该作者
回复 sun_happone 的帖子& G4 g  D! ~6 B9 `, M# r

" ~  r0 P' m" F3 b# T7 @" @请教具体步骤怎样?
0 Z3 P1 F8 L) {/ X% N9 S0 L0 D% i2 N

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板凳
发表于 2012-11-29 23:32 |只看该作者
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回复 huajie881026 的帖子- a- j. O* [: j3 y7 T! a
* E; E! f8 S, w* v# |  U
用4%PFA固定细胞10min,PBS洗3次,然后1%BSA封闭1h,再用抗体标记可以吗?4 `" u; K8 e) H" M
如果我需要用DAPI染核岂不是要用Triton-X100破膜处理?
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报纸
发表于 2012-11-30 15:37 |只看该作者
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& @5 M9 }. ~) j8 V1 ]
% L3 R* [' ?: l0 t" w7 R7 \当然可以了, 不过荧光抗体不一定能做流式
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地板
发表于 2012-11-30 15:37 |只看该作者
回复 huajie881026 的帖子! d5 x, j; h& V# n) }+ Y# s

3 `1 [' q# ^3 t+ B/ b; o7 N; YPFA固定,都要破膜处理
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发表于 2012-11-30 16:33 |只看该作者
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* i1 J( o) A. K) i$ U6 Q
# ^4 [1 f! _* h) n) f' w0 `1 p是否要破膜,要看你在膜上表达还是在核内,如果在膜上,就不需要破膜,染DAPI不需要破膜的,另外,封闭的话做好用3%BSA,有血清BLOCK更好。
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发表于 2012-11-30 16:38 |只看该作者
回复 sun_happone 的帖子
0 |3 F3 ~( t; e3 Y, q
8 ]! {1 |( W. [) u' R4 e那抗体稀释比例多少较好呢?

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发表于 2012-11-30 16:39 |只看该作者
回复 huajie881026 的帖子% A  `* h# w3 Q

/ F/ s5 g* U; H3 @+ M7 l, R- A  X这个看说明书就好了,没有特定的稀释比例的,每个抗体不一定一样。
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发表于 2012-11-30 23:14 |只看该作者
流式和免疫荧光的原理是相同的,做流式的抗体一般可以用于免疫荧光。但由于流式抗体很多都是直标的,抗体直接带标记,因此容易淬灭。而普通抗体选用二抗,实际上有一定的信号放大作用,信号相对较强。当然如果流式抗体不是直标而是选用二抗的话,那就一样了。我一般不用直标的抗体,而是自己根据流式细胞仪的信号通道选用抗体,因为有的时候需要同时用几种抗体,间标(用二抗)的选择起来灵活些。
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