试做胎盘干细胞 求助

孙帅帅

胎盘中贴壁细胞的分离与培养  无菌取胎盘胎儿面中心区域，0.1mol/L PBS液 (pH 7.4)冲洗去残血：① 酶消化培养法  剪碎后先使用胶原酶IV 37℃消化30min，再用胰蛋白酶消化10min，反复吹打使成单细胞悬液和外植块混合物，200目滤网过滤收集单细胞，小心置于淋巴细胞分离液上，2200r/min 离心15min获得单个核细胞，以1×106个/ml的密度悬浮于低糖DMEM培养基中（含15% FBS，100U/ml 青－链霉素），置37℃、 5% CO2和100％湿度培养箱培养，随后每3~4d换液1次，经3~4周可见成纤维细胞在瓶底汇合成片。 约到80％汇合时用0.25%胰蛋白酶消化，以细胞密度5×104个/cm2传代培养；② 采用组织微块贴壁培养法  将胎盘组织剪碎成<1mm3的微块后，37℃倒置培养4h使其贴壁，然后小心翻转培养瓶使培养基浸过组织块，随后每3~4d换液1次，约2d后可见有细胞从组织块中游离出来，约10d可围绕组织块长成一片片细胞群，此时可加大冲洗力度将组织块去除，经0.25%胰蛋白酶消化，以细胞密度5×104个/cm2传代培养。; L# n6 N  S/ t- w/ t1 y0 M5 [! f

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孙帅帅

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有影响     清洗的时候尽量把组织清洗干净！不要带血！