大家帮助看看，是什么污染，可能原因，如何避免

qiushuiwuhen

求助大家：上面所传的照片为未贴壁污染的ES（有feeder的，但是ES也是两天前从外地带来的，应该排除路上的可能污染，因为封闭很严实），像这种情况可能的原因是什么，有没有有人曾经经历过的，应该如何避免，谢谢！

chuanbaozang

我觉得像培养过程引起的，像一些链球菌$ a) j" B) a/ I! k( h4 h; ~
空气湿度大，操作不慎就能引起这样的情况

小冬子

这是10倍镜下的吧？如果放大40倍的话，是一连串的小圆亮点，外观培养皿内培养基颜色是金黄色，晃动时可见液体混着，应该是酵母菌污染。如果遇到有污染的皿，立即扔掉，不要费力挽救了，救不过来不说，还可能污染到别的皿。操作中注意一些，培养箱定期消毒，应该可以避免污染。仅供参考，相互学习。

qiushuiwuhen

十分感谢
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yangcy-smile

我感觉跟我们实验室一次的污染状况很像，看着有些图上像是酵母污染，但是看不太清楚污染的菌的形态，有没有更大倍数小视野的图

qiushuiwuhen

回复 yangcy-smile 的帖子
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3 N/ [1 R% R1 d" w, d" khttp://www.stemcell8.cn/forum.ph ... mp;page=1#pid859009% @8 D9 s3 k: @! k1 W
您好，请看我之前做的mef，就出现过类似小葡萄串的异物，如果两天不换液就会出现更多，但是培养基不浑浊也不变黄，我之前没有注意到，因为每天换液，就觉得是死细胞之类的（那时的小葡萄串特别小，看着也就像几个细胞串一起的样子，）就用这类细胞灭火做饲养层，结果两次都完全污染

yangcy-smile

回复 qiushuiwuhen 的帖子1 _% [3 u2 h9 k& ]. G
& W) \6 ]4 q6 ]* h9 u" P0 v
恩  我看到你以前的那个帖子了 也回复了。我还是觉得是污染问题。我们也偶尔会出现这种成串的类似酵母似的情况，基本上从发现到第二天就会泛滥。我们用含15%血清的完全培养基，基本上是三四天传一代，不会每天都换液，只有干细胞是每天都换液的。而且我想问一下你培养的是第几代的MEFs？我们实验室养的基本上第四代之后状态就不好了，会出现存活率低，细胞变大，变透明那个样子。

qiushuiwuhen

回复 yangcy-smile 的帖子
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  W, [1 X: \: a; |3 t9 L是1-2代的mef，我今天上午就观察了下3皿有将近48小时未换液的mef（分别是0代，两皿的1代），比这24进行观察的时候葡萄串杨的东西多了很多，尤其是原代的那皿更甚，但是培养基依然没有浑浊变色，像你说的，你们原来出现过类似的情况，那根源在哪里，是分离mef的时候就出现了，还是后期培养出问题的（我现在用的培养基全是过滤后，包括ＦＢＳ都是过滤的），谢谢

yangcy-smile

回复 qiushuiwuhen 的帖子: j/ w$ A) P( E3 j+ z3 k

8 ~& V4 G+ `* Z" B. u3 m# y现在照你说的情况，我觉得可能是当时你取原代细胞的时候就污染了，我想问你当时冻存的时候是在培养皿中培养了几天后开始冻存原代细胞的，后续在冻存P1或者P2的时候有出现这种类似的状况么，要是当时冻存原代或者后续代数时就有葡萄样的东西存在，那就是取的时候就污染了。我们一共取过四次，每次三只老鼠，就有一次出现这种状况，就是从根上就污染了，第一天会比较少，一般24小时就全是漂的这些串串，但是培养基不会像污染细菌那样浑浊，只有镜下才可见，时间久了泛滥的多了会能看出来点。

qiushuiwuhen

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, X, E; P. y8 L& }6 I做完原代后的3-4天开始冷冻的，后来后续冷冻时候因为每天换液也没有仔细观察是否存在有异物，是近期才注意到的这个问题，我今天解了一管P0，准备明天观察，不换液，一直养下去看会不会出现那种情况，另外我想请教下：假如是培养箱污染了，而我的细胞是好的，我应该怎么区分排除可能的因素呢