CIK加液后产生絮状物，大家来分析一下原因！！！

sunny.yc

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# v! Z# E6 M8 s如果实验室有HH-1的水浴锅，那1L的培养基瓶子正好可以放进去，培养箱不太好，因为培养基瓶子也不一定干净，你不能保证你的冰箱就完全无菌吧，如果带进培养箱反而不好，弄不好污染了培养箱里的细胞，而且水浴锅水导热也比空气快，所以还是水浴锅吧。. o  z) Z" }8 C( r
培养基变紫这个问题，在培养箱或水浴锅都是一样的，因为你都是瓶盖拧上的，所以，没啥区别，再说培养基也是个缓冲体系，酸碱度变化不会很大的。- x* o; ?5 k4 t1 O5 d
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还有，我觉得，有可能是IL-2，最近翻了一下Rosenberg主编的《癌症生物治疗——原理与实践》，里面有几句话对IL-2的描述是这样的——鼠剔除IL-2后，可使T细胞过度且无法控制地增值，因而提示IL-2不是T细胞在体内生长的必须因子，而是T细胞凋亡所必需。

lyj-0017

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8 h0 h9 [1 P# c% D4 Y5 b, ]# q" i4 Y预热这个问题，我发现水浴应该是比放在培养箱中要好一些，至少培养基pH值没发现有什么明显变化。你说的培养基瓶也可能将细菌带入培养箱中不是没有可能，应该注意！
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对于CIK的扩增来讲，anti-CD3单抗和IL-2是必需的，IFN-r和IL-1可增强CIK的细胞裂解毒性。所以我认为出问题的可能是前二者，不知道你们用的终浓度是多少呢，我们的分别是100ng/ml和2000U/ml，你觉得浓度高吗？

sunny.yc

回复 lyj-0017 的帖子6 s3 A, q% J# \1 e# i- g& l1 n, X5 [! q
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你试一下100ng/ml和1000U/ml吧，2000U/ml的IL-2实在是有点高了，大多都是300U到1000U，2000U我也是第一次听说
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不过，如果你现在才更改浓度，对于这份细胞来说，我觉得意义已经不大了，不过在对以后的实验肯定是有帮助的，2000U/ml，有点太高了

sunny.yc

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: ]8 Y9 Z% O9 e  x) S还有就是，CD3单抗也只是前期才用到，所以，对于之后的扩增影响不是太大，而且单抗一般都是作为前期一次刺激就可以了$ ]& w$ I  P) @7 Y7 W
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你不会一直在添加单抗吧，呵呵

lyj-0017

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1 K# E( M' T( T$ r! s/ a. r: O+ S! o  F) e3 f- j3 ]
我们用的IL-2是国产的临床注射级别的，国产的一般效价一般都比较低一些吧，你们用的是国产还是进口的IL-2呢？国产的用2000也算高的了吗？
" z$ E: D( V/ Tanti-CD3单抗只是前期加，后期也是不加的。
& {* k8 n0 G6 K2 C0 s目前来看，可能就是这两种因子的浓度过高吧

sunny.yc

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3 O. F, `* g% S  Y/ y8 t
! C- p  y$ f( oIL-2基本上都是用临床级的，试剂级的太贵了& X5 [5 H' y2 m$ q; F
IL-2你先试一下1000吧，基本上都是这个使用量的8 h0 X" y  I2 E7 b0 O# c! W* ?

% @& k; C) j% B) ECD3单抗也不算高，如果你只是前期加，100ng/ml 应该问题不大，我做的培养体系也是这个浓度，基本上没有什么问题

刘艳85

请问你用的是什么培养基？这个不是细菌污染，是不是细胞密度过高得不到营养而死亡导致的问题呢？

lyj-0017

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! R" s* d+ P7 C2 N2 y9 @' ]9 A/ J另外一个就是IFN-r，这个应该如何加呢？是在加抗CD3抗体前24小时加，还是制备当天与抗CD3抗体一同加入呢？加入的浓度应该多少呢？2000U/ml算高还是低呢？

lyj-0017

回复 刘艳85 的帖子' h% T+ g& l; Q) G6 [
4 a+ |9 o+ `* Z) A( R- D
用的是AIM-V ，如果是细胞密度过高的话，你认为培养袋中的细胞密度应该为多少比较合适呢？现在就是一直在找集落聚团的原因，你们以前遇到过这种情况吗？是如何解决的呢？

sunny.yc

回复 lyj-0017 的帖子. {% l7 v& i5 f. C; T' I* p

& c  ^3 F7 y' Z1 u* \你的量是从哪看到的，都太高了吧，试试1000单位的干扰素γ，D0天一般只加干扰素