精原干细胞建系后marker验证

20111109

2 b# Z9 C* U5 h5 R( `6 B, B
4 w- h2 R5 p* p& q2 J4 c

, m- T3 }1 j: B3 d- T  w如上图显示的，我验证了PLAF  OCT4 stra8 C-kit SSEA1等. ^) t/ t. ?) Y# H0 h+ E7 q
我想问的是
3 A4 Z1 ?' t4 w3 f7 h& @* |, [1、理论上，这些marker分别应该定位在哪里（核或质）/ J, W$ d! r1 A0 n1 m+ |/ r( W
2、这些marker分别在什么情况下表达（即哪些是未分化SSC表达的，哪些是分化SSC表达的）) h4 Y) Y4 X6 K( y  i) ^
3、有没有关于SSEA1的文献，比较新的，我对SSEA1了解很少。
3 V* S2 m0 \! Z: F6 ?4、C-kit 的抗体哪个公司的比较好？有没有人做过的。
$ k9 E0 x6 B2 D5 j' S刚接的课题，刚建的细胞系，各种懵懂，先谢过各位了~~0 m5 S, t% c) N  _/ k3 J8 m" w

% Q9 b& H% G" }/ k$ X) A
' U/ E" X' ]* e8 r3 r

jialiyang

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* V2 P; Q) x7 J* Y3 ?7 Q/ a6 N! i+ e5 J0 ~6 p$ A" t- I
1、对于你所选用的marker所在的部位你可以把你选用marker的说明说下载下来，里面会说明是膜蛋白还是核蛋白
4 k1 `2 _0 t2 f# c4、C-kit 也称CD117，我们实验室用的是Dako ,CODE A4502

bj123

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1 w* [& e) }6 O& E0 u
: \3 T  Y- K- d1 e: n3 j, T3 |你染得ssea-1好奇怪啊。应该是一个膜表达的marker。

20111109

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0 H2 T. A" X6 i0 b( ^6 y0 q7 T+ e1 l2 n) H% ?! V$ `8 \
抗体说明书里面做的荧光许多都是在非干细胞里面做的，不知道有没有参考价值。。。

20111109

回复 bj123 的帖子' D& V7 E5 e0 n

6 n: p7 _9 ~5 H* \* ?2 o" A+ r嗯 C-KIT也是一个膜表达的蛋白，我做的这个结果是在核的。所以我觉得也许是因为C-kit 和SSEA1的抗体不行，而且本来我做的这个验证预期结果也是C-kit和SSEA1不表达的

moluxingke

照片不能再照的大一点了吗？那样是核定位还是胞质或是膜定位也好看一些呀。

20111109

: V5 R4 v* B$ ~

20111109

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4 H# x$ _) V" C# S9 X; j- y& o- w) w7 b6 l- j. q9 o
抱歉 我把40X的图原图放上了~~

zhangyan813

首先我想问一下，你做的是什么物种的SSCs，大鼠、小鼠还是大动物？不同的物种现在已经有研究的很清楚的特异标记基因，建议用特异的基因做鉴定。3 L/ k4 N, P' t. |4 S& s7 ^* g
其次，你的SSCs，通过形成clony的样子感觉还是蛮好的，长得很好。但是我建议你做染色的时候，不要做这么大细胞浓度的，这样的话，一大团是看不清楚，到底是在膜上还是在细胞核里。打算做染色的wells，最好是接种的时候少一些细胞进去，或者是生长了两三天的时候就固定来做，细胞浓度低一些，会好很多。) X. n8 ]8 s; p7 L
再次，PLZF, OCT4都是核定为的，这些都是要做通透才能够得到很好地结果的，你不知道在哪里定位，不知道染色是怎么做的，没有通透得到的结构是否可信？另外，c-kit建议你最好不要用来做鉴定，这个基因被认为是分化的标志，但是在SSC里也还是有表达的。

20111109

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% _: p* R5 n$ R8 N
! y( z1 \$ x7 R. r9 R感谢您的答复~~
; i# c; @/ z5 E( q' w6 O- _3 J1 q我做的是小鼠的SSCs，因为我是第一次建系，第一次做milicell，所以什么都不知道的情况下就做了，(⊙o⊙)…实验还是应该了解全面再做的。
7 I' t5 W- D9 h" C3 r% v您的建议很对，核定位要做个triton打孔。
! H! Z4 G# V1 k4 M& z4 Z3 k- S但是，之所以染C-kit就是想判断培养的SSCs是否发生了分化。。。文献里说未分化的SSCs是不表达C-kit的，因此做了。