间充质干细胞消化不下来

漂泊的风

各位大侠好，我现在在培养小鼠的间充质干细胞，但是比较郁闷的是细胞消化不下来，一开始用的是碧云天的配制好的胰酶，下不来；后来买了sigma的胰酶粉末，自己配制的，最初是0.25%的浓度，外加0.02%的EDTA，效果稍微好了一些，但是消化5分钟还是有好多细胞下不来，后来逐步加大浓度。现在都到了0.5%的浓度了，但是还是不行，大部分下不来，导致细胞越传越少，细胞状态也是越来越差，甚是郁闷，不知各位是否遇到过这种情况，有什么解决的办法吗？灵位在消化之前都是拿PBS充分把细胞冲洗过的，胰酶也是用PBS溶解的。

deshenglll

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我们做人的间充质干细胞，用的是sigma的成品胰酶。回来还稀释了不少。效果还可以啊。你消化个3-4分钟，然后用手（培养瓶）拍打侧壁或是移液管（皿或培养板）吹打。! U! t9 l9 |: r6 p: E" O/ {: I, K, j
细胞大部分没消化下来，细胞密度低了，自然就长得不太好了。祝你好运。

aochongyu

我们用sigma的胰酶，500ml分装成的小管，那个比较好用，消化时间要自己摸索，一般T75加4ml需要2分钟就能95%下来，稍微吹打一下就好了，你的要消化时间久了肯定对细胞损伤很大啊，建议你买成品

fm001982

消化间充质干细胞0.25%的胰酶已经足够了，即使T225瓶，消化时间也很短。6 ~/ A4 b- b7 _
是不是你酶保存的问题，或是反应温度的问题？

chimo100

自己配的有问题的话可以买成品的，最好买进口的，一般是没有问题的。

流泪的鱼

是整瓶细胞都消化不下来，还是部分细胞消化不下来。如果是前者，是你胰酶的问题，买Gibco配好的胰酶，没有任何问题。如果是后者，那么那部分细胞就不是间充质干细胞，是成纤维细胞，弃之不用，防止细胞不纯！

wf78365421

0.5%的浓度太大了！对细胞损伤大！, E! ]  {$ n$ L1 V5 g. `
0.25%或者0.125%浓度即可！

sun_happone

你在消化之前是否用PBS充分清洗了以确保没有残留的血清了呢？要知道，血清对胰酶有终止作用哦；另外就可能如楼上各位说的，是你的胰酶的配置或储存有问题，一般间充质细胞还是很好消化的，建议你重新配置一下胰酶再试试。

luyue6453

回复 漂泊的风 的帖子! n$ b* _% X- W1 p: ~$ E5 ?$ A( ^

  E' C) i" d3 @' L7 R; S你用gibco的试试，我买的10X的，拿回来还需要稀释一下用，消化3-5min很好下来的，实在下不来你就用细胞刮刀刮吧，在刮的时候加一些培养液，别硬刮！

倔强的投手

弃去培养基之后，要用PBS洗两遍，因为残留的FBS会影响胰酶的消化效果
7 @0 I) |. X, |8 P- M还有，在细胞消化两三分钟的时候，可以将培养板在桌子上轻拍几下，细胞很快就下来了