求助原代肿瘤干细胞培养实验技术

青云之上

没有结果具体是怎么讲？细胞培养不出来？我们实验室弄过乳腺肿瘤干和肺癌干，都不是很好弄，基本都是常规方法，组织分离，机械剪碎，消化，过细胞筛，培养，这方面的文章比较多，你可以参考一下，中文的外文的都有，重要的是你要确定好你要用的培养基，和鉴定标志~~~

青云之上

我们实验室有个研究生之前她是贴壁养的乳腺肿瘤干，看文献报道鉴定CD44和CD24，结果也和文献相符，但是肯定有问题，没有克隆球，之后我是悬浮养的，原代的时候克隆球特别多，但是就是增殖慢，传一两代克隆球就越来越少了，论坛里有个哥们，那天聊了一下，说他们传代没事，但是文章还没发，不说是怎么弄的，所以，这个问题我们也还没有彻底解决。消化过筛之后直接无血清，有血清肯定就分化了，我研究生时养神经干，无血清长得极好的，一加血清就分化~·

青云之上

回复 nyming2008 的帖子& L. ?2 U: A, \+ A

3 @& x% A, J$ N* s; H0 B4 I四型胶原酶，DNA酶，透明质酸酶，四个小时，有时候也四度过夜~~~

青云之上

回复 tiramisu 的帖子
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请问他是悬浮培养还是贴壁培养的？~~~

青云之上

回复 nyming2008 的帖子9 @8 }$ a- e8 _8 i1 z" T
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总共是10毫升的消化体系，按照说明书配好酶的储液浓度，具体用量看你消化的实际效果，我们是1毫升胶原酶，100微升透明质酸酶，50微升DNase，剩下的加培养基，37摄氏度水浴消化4小时，每20分钟振荡混匀一下~~~

青云之上

回复 nyming2008 的帖子1 Z5 R, b% x7 V  d" F
4 r) C% s: ^9 S" `( V
呵呵，不应该啊，你这是“化骨绵基”吗？不能用是个什么状态？没有细胞还是培养不起来？组织不同消化的力度和时间也就不太一样，你调整下酶的浓度和消化时间分别看看，或者你4度过夜再试试，这是大部分的组织消化常规方法，比较成熟的，应该不会有那么大的问题~~~

青云之上

回复 tiramisu 的帖子0 q1 ]  _( [; }! R  l0 t

+ a6 L1 O' r8 ?7 }0 n$ P  M1 H我们实验室用的我也找了好几次，失传了，你可以看看这个，应该可以~~
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http://www.sigmaaldrich.com/cata ... ng=zh&region=CN

青云之上

回复 tiramisu 的帖子. M' |" b) c# R4 V
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关于透明质酸酶的配制，可参考胶原酶，
( t. L8 i6 ^4 J% @注意透明质酸酶临用前配制，否则活性迅速下降。
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青云之上

回复 lxn90219 的帖子
5 c; X- J/ _! w: C# O6 [# H+ f( [0 R+ J1 p2 e
皿和瓶我们用的都是康宁的，就常用的那种，因子批号，透明质酸我上面也说了，我们实验室的失传了，网上我看到的上边有链接和货号~~~

青云之上

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3 U! [* [+ ?# m/ E7 V: a
0 [0 B" @- l2 \0 C; T, ~+ }呵呵，这个好像还真没有，细胞系不好整~~~