求助原代肿瘤干细胞培养实验技术

青云之上

没有结果具体是怎么讲？细胞培养不出来？我们实验室弄过乳腺肿瘤干和肺癌干，都不是很好弄，基本都是常规方法，组织分离，机械剪碎，消化，过细胞筛，培养，这方面的文章比较多，你可以参考一下，中文的外文的都有，重要的是你要确定好你要用的培养基，和鉴定标志~~~

青云之上

我们实验室有个研究生之前她是贴壁养的乳腺肿瘤干，看文献报道鉴定CD44和CD24，结果也和文献相符，但是肯定有问题，没有克隆球，之后我是悬浮养的，原代的时候克隆球特别多，但是就是增殖慢，传一两代克隆球就越来越少了，论坛里有个哥们，那天聊了一下，说他们传代没事，但是文章还没发，不说是怎么弄的，所以，这个问题我们也还没有彻底解决。消化过筛之后直接无血清，有血清肯定就分化了，我研究生时养神经干，无血清长得极好的，一加血清就分化~·

青云之上

回复 nyming2008 的帖子5 ~$ v# u. ?5 @! c2 c& ^
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四型胶原酶，DNA酶，透明质酸酶，四个小时，有时候也四度过夜~~~

青云之上

回复 tiramisu 的帖子
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: Z. W, _) ]! f5 v& k请问他是悬浮培养还是贴壁培养的？~~~

青云之上

回复 nyming2008 的帖子
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总共是10毫升的消化体系，按照说明书配好酶的储液浓度，具体用量看你消化的实际效果，我们是1毫升胶原酶，100微升透明质酸酶，50微升DNase，剩下的加培养基，37摄氏度水浴消化4小时，每20分钟振荡混匀一下~~~

青云之上

回复 nyming2008 的帖子  w# w5 [* o) |- u# V
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呵呵，不应该啊，你这是“化骨绵基”吗？不能用是个什么状态？没有细胞还是培养不起来？组织不同消化的力度和时间也就不太一样，你调整下酶的浓度和消化时间分别看看，或者你4度过夜再试试，这是大部分的组织消化常规方法，比较成熟的，应该不会有那么大的问题~~~

青云之上

回复 tiramisu 的帖子% T$ m+ x* Y7 ^$ d/ x6 p
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我们实验室用的我也找了好几次，失传了，你可以看看这个，应该可以~~1 q9 M% N) F2 Y

: a: \" V/ I9 M% GSigma   H3506
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8 P6 e$ U( U, nhttp://www.sigmaaldrich.com/cata ... ng=zh&region=CN

青云之上

回复 tiramisu 的帖子4 w1 @  W2 S8 T& }( [' ]( `2 v0 F/ @
+ {3 j$ F: p1 j2 X9 R" |$ U6 q
关于透明质酸酶的配制，可参考胶原酶，
7 E% U9 [6 x9 f6 D4 x注意透明质酸酶临用前配制，否则活性迅速下降。5 T) w6 F* z( Z$ q6 C  F4 R3 \; o) i2 [

青云之上

回复 lxn90219 的帖子- G. c, N( Z' H0 Z8 |& G

2 c: p5 L9 Z; ]5 l( A- l- B皿和瓶我们用的都是康宁的，就常用的那种，因子批号，透明质酸我上面也说了，我们实验室的失传了，网上我看到的上边有链接和货号~~~

青云之上

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. O: Q5 ~/ u7 R  R) ~& F, F呵呵，这个好像还真没有，细胞系不好整~~~