求助原代肿瘤干细胞培养实验技术

青云之上

没有结果具体是怎么讲？细胞培养不出来？我们实验室弄过乳腺肿瘤干和肺癌干，都不是很好弄，基本都是常规方法，组织分离，机械剪碎，消化，过细胞筛，培养，这方面的文章比较多，你可以参考一下，中文的外文的都有，重要的是你要确定好你要用的培养基，和鉴定标志~~~

青云之上

我们实验室有个研究生之前她是贴壁养的乳腺肿瘤干，看文献报道鉴定CD44和CD24，结果也和文献相符，但是肯定有问题，没有克隆球，之后我是悬浮养的，原代的时候克隆球特别多，但是就是增殖慢，传一两代克隆球就越来越少了，论坛里有个哥们，那天聊了一下，说他们传代没事，但是文章还没发，不说是怎么弄的，所以，这个问题我们也还没有彻底解决。消化过筛之后直接无血清，有血清肯定就分化了，我研究生时养神经干，无血清长得极好的，一加血清就分化~·

青云之上

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4 p  m( w2 G$ _  v, z1 E; u! z2 L3 R9 N2 Z
四型胶原酶，DNA酶，透明质酸酶，四个小时，有时候也四度过夜~~~

青云之上

回复 tiramisu 的帖子) n- A* S1 J# ~. v8 N4 R
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请问他是悬浮培养还是贴壁培养的？~~~

青云之上

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" N8 I  f% M( a# w' [/ P% v
* y5 Y$ n7 _6 K0 S! Q) E6 H总共是10毫升的消化体系，按照说明书配好酶的储液浓度，具体用量看你消化的实际效果，我们是1毫升胶原酶，100微升透明质酸酶，50微升DNase，剩下的加培养基，37摄氏度水浴消化4小时，每20分钟振荡混匀一下~~~

青云之上

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8 T' i" B+ E- Q' M2 U& A( D* w! g* P4 W" a/ d5 ]# }$ n6 \; z5 j7 o
呵呵，不应该啊，你这是“化骨绵基”吗？不能用是个什么状态？没有细胞还是培养不起来？组织不同消化的力度和时间也就不太一样，你调整下酶的浓度和消化时间分别看看，或者你4度过夜再试试，这是大部分的组织消化常规方法，比较成熟的，应该不会有那么大的问题~~~

青云之上

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我们实验室用的我也找了好几次，失传了，你可以看看这个，应该可以~~1 g: e' ]) v. j6 Y' R
# e7 H2 o: m: P0 o, l; z& v
Sigma   H3506* Y' E# u, _3 g, F4 r

- E6 Z( s0 {6 Z5 N, ~1 E6 Nhttp://www.sigmaaldrich.com/cata ... ng=zh&region=CN

青云之上

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: D# Q9 F& p# l, m! h! d0 k: k9 j6 Y* r
关于透明质酸酶的配制，可参考胶原酶，  K& I) K$ A8 l# s$ j! j! `
注意透明质酸酶临用前配制，否则活性迅速下降。
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青云之上

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3 Z( }% y* ~6 b. Y
0 n$ v& {. z3 _5 u: g$ Y  y# E皿和瓶我们用的都是康宁的，就常用的那种，因子批号，透明质酸我上面也说了，我们实验室的失传了，网上我看到的上边有链接和货号~~~

青云之上

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& S& F; u! W* T呵呵，这个好像还真没有，细胞系不好整~~~