请教各位老师有关流式检测CIK细胞成熟程度

baby00000003

CIK培养第六天，按照常规方法，2.5小时分离，加IFN-gamma，大约26小时加anti-CD3、IL-2、IL-1a，最长3天换液1/2，培养基变色立即换液，保持细胞密度不超过2*10^6/ml
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6 Q6 U5 `' s$ L5 `今天取细胞样本跑了个流式，但是CD3，CD56阳性率很低的说) g# T" n" e( w& u
下面是这次跑流式的图，
1 q4 ~, h) b9 ^因为前辈遗留了一部分抗体，都是PE的，没法做双标，不过第一次实验，当作是趟地雷省着凑合用了
& b! H( i, ]. k/ N  k" S* |
# ^) a0 D3 y# ^想请教各位老师，
& s0 Q3 X1 A* f( b  F, @  z" j- M有可能导致CD3、CD56阳性率低的原因？$ N1 p/ g  K, t# n$ q7 G* [
有关FSC和SSC画门，像图上这样画是正确的画法么？
' r7 p( l- T* g8 J; v) L7 n我觉得如果靠诱导单核细胞成熟而生成CD8，是不是应该像这样把单核和淋巴都画进去呢？
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dollar007

1确定下你的试剂有否过期；
0 ]3 b& m2 V  L; c3 [, v6 B  C2对照FS/SS分析图中，碎片和死细胞过多，设的门框了部分碎片和死细胞；可以通过调高FS域值屏蔽掉部分无关数据信号；
! Z* y% |& n  h! c. J" P3对照直方图中，单线门设的过右，就把它设定在右边锋和X轴交叉的地方，拖尾的部分可以容忍，一般对照不会出现，细胞养不好，制样差就易出现；
) S! C$ ]8 _  u0 u" f4然后再看看你的样本数据分析，是否双阳提拔起来了？

baby00000003

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9 r! ]% L6 E2 [5 @6 P: N, ~+ o  R: O  J* T
您说的门框内的死细胞和碎片指的是哪一部分呢？1 N# `: t; {/ {! S. ~! P- [! t
是说70/70范围之内的都算么？
& L# e; c: H0 G7 @# \+ m% E# P- t我还以为最角落里的是碎片，临近角落的那一群是淋巴细胞......

dollar007

左下方的是碎片；目标细胞在你的图中靠下方一点；左边的是死细胞。

dollar007

你培养过程中，要更换培养瓶，这样贴壁细胞就去除了；分离后红细胞残留不多，在培养中不增殖，很快就会成为劣势群，比例不高。

lyj-0017

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# z" D2 [9 r1 X+ F
: o% A: E1 ~5 V5 n1 y% N从你的同型对照来看，阈值可以设的再大点，去除更多无关信号，圈门没啥问题，CD3单阳结果还凑合，CD56单阳的结果我认为可能与你培养没多大关系，估计跟你的抗体有关。你用的CD56-PE是哪个公司的，克隆号是多少？是抗人CD56抗体吗？

baby00000003

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是BD的....555516,包装上说2016年才过期.......

lyj-0017

回复 baby00000003 的帖子( |3 n# V. N2 A6 q* L- d2 W3 r9 P
5 X5 ~0 [$ m3 n1 q8 r
一般常用于检测人CD56的克隆号为NCAM16.2

hyg5481655

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  N6 M: H0 {0 z0 |, p9 z' v( \& P- z5 u) _4 y/ j" S4 }) k
请教，调高FSC阈值，比如到50，000左右，除去部分碎片和死细胞，圈中的CIK那一群细胞的比例大概有多少？

细胞海洋

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