细胞复苏失败原因？

lvyananwyb

前两天复苏细胞，完全没长，并且没有污染，是什么原因呢？是不是由于复苏动作慢，DMSO对细胞损伤太大而死亡的？请各位给分析一下，谢谢

sxlxw2012

我不知道

afei198520

什么细胞？复苏条件？用了多长时间？接种密度有没有问题？什么都不清楚就什么也没法分析

晴斗斗

影响因素太多了，细胞冻存的时候状态,细胞冻存条件，复苏条件，培养条件……

zxmflying

是不是冻存的时候细胞状态就不好了？还是复苏的时候在水浴中的时间太长？还是培养基有问题？是不是有支原体污染导致细胞状态很差？还是CO2培养箱有问题？所以建议楼主一一排除原因。最快的方法是复苏一支别人已证明OK的细胞试试。

dollar007

影响因素太多：收获时消化可能过渡；冷冻时过程控制不佳；复苏时解冻温度、解冻速度太慢，都会影响到细胞的活性。

tsk0909

首先确定细胞冻存前状态，冻存过程无差错；冻存液各项液体是否都加；冻存时冻存管是否拧紧；复苏时水浴温度是否合适；复苏速度和离心转速是否合适；复苏细胞分装问题，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞贴壁存活。

yaolinzhang

回复 lvyananwyb 的帖子' \; ]5 d5 T2 H! G  [
6 H% A% Z% U1 a- n' I% Z- I+ w
坚持“慢冻快融”原则，复苏时要尽可能快；培养基提前预热；鉴于楼主情况，估计：冻存液有问题；复苏时间太长。

tess1029

原因太多了，有可能有以下几种：
# `7 u& s7 M/ k" X  P6 p1冻存前细胞状态就不好；) G  q1 D- U) ?& q( C' R$ C
2冻存液的问题，配置比例不对；5 U* L/ Y% ~+ L  o7 L  _" i- j6 x$ J
3复苏时时间过长；6 u2 |, y& b5 M2 G( e7 o9 c
4培养基问题，培养条件等

张钰0206

除了以上几位说的，我再说几点：7 S+ J7 y5 M: Y* d$ b/ y: Y. E
1.复苏时如果离心洗涤，可以用冰浴的生理盐水，减少细胞损伤。
/ {& ^5 d5 w* ?% D% y2.离心转速不宜过高，不超过1500rpm，如果离心对细胞损伤大，则可以先种瓶，24h后离心换液。. V) d0 n5 _6 D. L/ r9 P+ e2 u( N
3.如果冰冻的细胞需要过长的时间送达实验区，则可以事先准备一个泡沫盒，在泡沫盒中装液氮，把细胞放入其中，到实验区再把细胞拿出。: Z$ i, \9 P1 c0 J+ u. Q
4.复苏时加大细胞的密度，可适量添加血清增加营养。