分离单核细胞时，如何吸取白膜层？

lxy07

如题，请问Ficoll分离全血单核细胞时，首先，如何才能准确吸取到白膜层，其次，我们用的是国产分离液，离心后试管内没有形成明显的白膜层，白膜层和分离液层界限不明显，这种情况应该如何改善？

yuanyecat

我推荐用GE的ficoll，15ml离心管离心。管直径越细，分离效果越好

luckyliu

个人感觉分离白膜层，关键点有四：首先，血液是否新鲜；其次，是加液，在将血加入分离液中时，是否操作到位，血与分离液有明显的分界；第三，离心速度，离心速度不够的话，白膜层也会不显著；第四，是离心机的制动速度，一定要调至最低

孙帅帅

分离人外周血单个核细胞，理论上1ml血能够得到1-2×106个单个核细胞，每次分离都可以得到106个/ml细胞。另外，分离时一定要注意血液稀释是等体积稀释，稀释后血液与分离液的比例是2：1，书上说是10ml稀释血用3－5ml分离液，但通过我的经验是2：1分离效果比较好；再有就是离心速度和时间，一定是20℃  2000rpm，20min。

孙帅帅

离心后管内分为三层，上层为血浆和Hank's液，下层主要为红细胞和粒细胞。中层为淋巴细胞分离液，在上、中层界面处有一以单个核细胞为主的白色云雾层狭窄带，即单个核细胞（包括淋巴细胞和单核细胞和低比例的干细胞，此外还含有血小板）

wanglinling

回复 lxy07 的帖子
* g; |( Q. k+ f: L1 D) g) z/ x; l& R9 [0 q# ]) U- k6 z
那还是梯度没有弄好，换一种分离液试试吧，不知道你们用的哪种？

lxy07

回复 wanglinling 的帖子3 y; E3 E' F( H4 I% }- k( M& T

3 M+ X9 ]" {( g/ E9 t离心管平视的话，白膜层和分离液层基本分不清楚，混在一起了，从离心管上面俯视看的话，能看见白色云雾。

wanglinling

回复 lxy07 的帖子
, v' ^8 w4 Q) B9 a0 H1 F
/ f3 q% E6 g0 M5 l你是白膜层一点都看不到还是只是细胞少而已

lxy07

回复 wanglinling 的帖子
. n+ s" T$ E3 A9 S
9 k4 z5 r( l, L/ C. q( ^. Y9 o全血加入50ml离心管，2000rpm，15min，离心后会分层，然后把最上层的血浆吸掉。

wanglinling

回复 lxy07 的帖子
3 K- S- F( y2 H/ M0 e. d6 U5 K3 p0 A- m
去血浆是什么意思？怎么去的哦？