丝裂霉素灭活细胞，急求破解。。。。。。。

qiushuiwuhen

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请教各位家友，最近新分装一批丝裂霉素，2mg溶解20mlPBS中，吹打促溶解30min呈现浅蓝色，0.2um滤器过滤后分装，配成100ug/ml的储液冻于-20冰箱，用时用培养基稀释10ug/ml灭活mef细胞2.5hour后，铺细胞第二天发现1/3的细胞都死掉，并且剩下的细胞状态不是很好，换成hes的培养基后不怎么拉丝变长，关键是原来都是这么操作的，铺出来的feeder都很好，这次分装后怎么就成这个样子了，做了个时间梯度1.5h./2h./2.5h,发现1.5h死的少些，但是好像灭活不全的样子，请教各位战友是什么原因，急求改进，不胜感激。。。。。。. f. W' X( |2 l9 |) S6 F  K. h7 C

hsu86

可以考虑用辐照处理，把细胞集中在50ml的离心管里，省时方便

qiushuiwuhen

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- K6 D5 o6 t! @- o1 S嗯，原来也试过，不知道为什么照完把细胞动起来后，复苏就没有活的了，后来就老用丝裂霉素，现用现灭活了

qiushuiwuhen

回复 hsu86 的帖子; f* @3 u: M7 r. h2 t
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嗯，原来也试过，不知道为什么照完把细胞动起来后，复苏就没有活的了，后来就老用丝裂霉素，现用现灭活了

chenlin080102

我们用的30ug/ml，2小时孵育

吃呆猫

回复 qiushuiwuhen 的帖子4 g- l. @5 X% d; J+ A3 x- l
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楼主，你好，我现在也遇到你这样的问题，2.5小时，feeder状态特别不好，但原来都没问题。你的问题解决了吗？

sj842563

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你用的是什么品牌的丝裂霉素啊，这个产品现在禁止生产了，如果你用的是原料药的话，是不是纯度不够呢，所以产生的效果也不一样