脐带血如何分离干细胞？

ruofan1982

最近刚接触脐带血干细胞，想分离了试试，就是参照淋巴细胞分离的方法吗？

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我们是，基本和淋巴细胞分离一样

suning5

确切的讲是脐带血单个核细胞，用淋巴细胞分离液分离。

yuanyecat

是的就是先分离PBMC，然后再用细胞标记分选，或者用选择培养基分选

cloudycity

淋巴细胞分离方法分出来的还只是单个核细胞，还要经过筛选的，比如流式或磁珠分选表面抗原，像cd34阳性的造血干~

野猪

我们用羟乙基淀粉去红细胞

蜗牛爱贝贝

主要还是看看你想做什么了，如果想培养的话，采用先分离单个核细胞（PBMC），然后再选择用培养基分选分离出需要的干细胞或者采用羟乙基淀粉去红细胞，在选择合适培养基培养就可以了，你可以根据自己经费，作出合理的方法，羟乙基淀粉去红细胞相对简单一些，不过要是培养的话，都涉及到筛选   如果想单单保存，就没必要筛选了，直接用羟乙基淀粉去红细胞分离出来的细胞，直接冻存就可以了

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脐带血造血干细胞的分离方法:  _2 \$ ?* v/ a; H, P
1.将冻存的脐带血样品至于37℃的水浴中溶解，然后进行细胞计数；
& [9 W2 Y- H& \2 d' U6 Z# [& `2.使用4倍体积的溶解液将脐带血进行缓冲，缓冲完毕后将其置入4℃的环境下1500r/min离心；6 l1 _- }9 T' U8 g
3.带离心结束后用裂解缓冲液把红细胞裂解，然后再用DNase进行消化；
6 H; i2 m/ i$ A5 z" w4.消化完成后使用Ficoll-Hypaque将单个核细胞进行分离，洗涤后将其放入PBS/1%HSA中，进行细胞计数。

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我一般先用天津灏洋的羟乙基淀粉去除红细胞，去除红细胞后，体积就可以压缩很多（节省分离液），再用GE healthcare的单个核细胞分离液分离PBMC（不要用国产分离液，很差劲），最后用美天妮的CD34磁珠富集。最后纯度99%以上。

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分离脐带血单个核细胞，可以用试剂盒磁珠分离