冻存细胞时，还在坚持缓冻原则？
发布日期： 2019-03-28 发布者： 友康生物
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一、我们先来说说何为缓冻：
缓冻即为冻存细胞时，要程序降温——4℃ 30min，-20℃ 1h ，-80℃ 过夜，次日投入液氮内。
缓冻即为冻存细胞时，要程序降温——4℃ 30min，-20℃ 1h ，-80℃ 过夜，次日投入液氮内。
二、那为什么要进行缓冻呢？
其实所谓的缓冻是一般使用传统冻存液冻存过程中需要程序降温。
传统的冻存液，一般由胎牛血清、DMSO及基础培养基等组分组成。冻存保护的DMSO组分，在进入细胞后结合细胞内部的水份，降低冰点，防止细胞在冷冻过程中形成冰晶对细胞造成损害。
但是DMSO只能在细胞内部保护细胞，细胞外部没有保护，水结冰晶会在细胞膜外部受到损伤，为了防止冰晶过大，使用时必须采用程序降温的方式，才可保证细胞复苏的成功率（80%以上）。
若不采用程序降温的形式，有些冻存的细胞，甚至复苏成功率为0。
其实所谓的缓冻是一般使用传统冻存液冻存过程中需要程序降温。
传统的冻存液，一般由胎牛血清、DMSO及基础培养基等组分组成。冻存保护的DMSO组分，在进入细胞后结合细胞内部的水份，降低冰点，防止细胞在冷冻过程中形成冰晶对细胞造成损害。
但是DMSO只能在细胞内部保护细胞，细胞外部没有保护，水结冰晶会在细胞膜外部受到损伤，为了防止冰晶过大，使用时必须采用程序降温的方式，才可保证细胞复苏的成功率（80%以上）。
若不采用程序降温的形式，有些冻存的细胞，甚至复苏成功率为0。
友康无血清细胞冻存液作用原理：
我公司无血清细胞冻存液，为多种保护剂组合，在细胞内外进行双重保护，大大提高了细胞复苏存活率。无血清细胞冻存液，含多种保护剂成分。
一些保护剂，易于穿透细胞，避免细胞内部水分子形成冰晶损伤细胞，同时另一些保护剂不能穿透细胞，但可以在冰晶形成之前，优先结合细胞外的水分子，降低细胞外溶液的电解质浓度，减少阳离子进入细胞的数量，我公司无血清细胞冻存液，为多种保护剂组合，在细胞内外进行双重保护，大大提高了细胞复苏存活率。
附：
1.传统细胞冻存液与无血清细胞冻存液使用方法对比
| 使用步骤 | 传统冻存液 | 无血清冻存液 |
| 产品保存条件 | 分装成小管,-20度（避免反复冻融） | 2-8度保存,无需分装 |
| 冻存过程 | 程序降温（4度30min， -20度1h ,-80度过夜,次日投入液氮内） | 直投-80度冰箱过夜,次日入液氮 |
| 复苏过程 | 快复苏,加新鲜培养液,离心取出保护液 | 快复苏,加新鲜培养液,离心取出保护液 |
2.冻存后细胞复苏数据对比
细胞系名称 | 传统冻存液 | YOCON冻存液 |
A549(肺癌) | 85% | 95% |
MDCK(犬肾细胞) | 90% | 95% |
3T3(小鼠胚胎成纤维细胞) | 90% | 93% |
hepG2(肝癌细胞) | 86% | 93% |
MK2 (恒河猴肾细胞) | 88% | 95% |
杂交瘤细胞 | 80% | 90% |
MSC(间充质干细胞) | 80% | 95% |
单个核细胞(原代分离) | 50% | 90% |
