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楼主: 六弦七品
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CAR-T细胞培养中慢病毒转染的问题  

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包包
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发表于 2016-3-30 16:44 |显示全部帖子
没有遇到过呢

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包包
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发表于 2016-3-30 16:56 |显示全部帖子
回复 riverdtang 的帖子* q; C# T6 G! b3 d' d: o8 V
% K, Y9 ]% m% v4 S
是的,感觉自己还是操作有问题。
$ C( O: s* S) w) E是别人给的培养第九天的Tcell,我每孔取了3×105接的。因为以前慢病毒转染时候一般都是在转染时细胞汇合度达30~50%,所以这回转Tcell也想当然的沿用这个规律。
* N4 c, g. y( t" A
; v  c$ v5 f2 |5 ~请问你是在Tcell初始分离后就开始用抗体刺激吗?是不是这个时期的Tcell活力比较高呢?(我之前用的Tcell是不是有点老了?)
6 B% f" b2 t4 n4 x% O
! _2 [1 H0 y3 ]' ~铺板密度如果是10^6/ml,6孔板铺1ml就可以的吧?接种第二天做转染,然后24h后再换液?
( X2 t% \7 m- S+ I
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发表于 2016-3-30 17:55 |显示全部帖子
希瑞干细胞
回复 木子小王令 的帖子
; k; F9 H/ O2 B# H, }3 A
0 ~5 t7 c; f& i5 n( _# J( j1 B是的,第九天转那效率肯定不会很高的,我们分离就刺激,浓度看你们所需的细胞种类和抗体质量了,这个需要摸索一下,不过你们可以长到第九天还有10%转染率,那刺激可能不是最大的问题,你可以试下分离2-3天转,可能会好些。悬浮细胞不需要铺板啊,直接转就是了,第二天换液。
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发表于 2016-3-31 09:13 |显示全部帖子
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回复 riverdtang 的帖子
2 i5 _7 F  U$ h& Q" H: `+ [% \& @1 c
恩恩!谢谢大神!0 z1 L1 P9 z% {
我下次试着做个梯度,有问题还请多多指教!!!

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发表于 2016-3-31 09:35 |显示全部帖子
回复 riverdtang 的帖子4 B- o+ S1 V  z6 w' o. F- S6 V

. I" w$ R% s* f4 v  M# @7 V你们是用什么培养液的??怎么转染率这么高,我们感染效率一直都很不稳定。
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发表于 2016-3-31 10:16 |显示全部帖子
回复 riverdtang 的帖子8 W* ]' _0 o! U5 k* k* ~& c! \
. P. S% i( _  m7 K2 Y
你们转染效率这么高,我们都用了RetroeNection加polybrene,还是没多少,应该是载体有问题,你们用的那种载体?
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发表于 2016-3-31 10:18 |显示全部帖子
回复 winqi 的帖子1 u0 F* M! W; `% Y& I; u7 |
" L4 x4 j: d" N! n
用的CMV,最近准备换ef-1a
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发表于 2016-4-1 10:52 |显示全部帖子
回复 六弦七品 的帖子
. k. t0 A& F! y0 z* R% `; ^/ }4 w( {- |' \% I; A
启动子试过没有什么明显的差别,还是转染时机影响吧,分离激活后尽早转会好些
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发表于 2019-1-11 14:06 |显示全部帖子
回复 riverdtang 的帖子/ _" A# A# W& |6 v, S# \

  G/ {! \9 ^) x' Y% L+ k: ]% d( e/ z请问你们用聚凝胺了吗
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