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楼主: 六弦七品
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CAR-T细胞培养中慢病毒转染的问题  

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包包
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发表于 2016-3-30 16:44 |显示全部帖子
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包包
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发表于 2016-3-30 16:56 |显示全部帖子
回复 riverdtang 的帖子
- i! B$ G/ v9 [. @; m9 J, f; S& i$ o  T, [6 |8 Q8 @6 c
是的,感觉自己还是操作有问题。
$ @) \# J8 [  e" H是别人给的培养第九天的Tcell,我每孔取了3×105接的。因为以前慢病毒转染时候一般都是在转染时细胞汇合度达30~50%,所以这回转Tcell也想当然的沿用这个规律。
( m6 d% d0 q& n5 Q( [. q3 n
. O. C  y2 D& `- ^请问你是在Tcell初始分离后就开始用抗体刺激吗?是不是这个时期的Tcell活力比较高呢?(我之前用的Tcell是不是有点老了?): U1 M% L/ U: Z2 H6 z" Q

8 W# v1 f9 Z0 g& @2 [铺板密度如果是10^6/ml,6孔板铺1ml就可以的吧?接种第二天做转染,然后24h后再换液?4 g- [& B3 i& F' D6 e% \/ \) ]7 \
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包包
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发表于 2016-3-30 17:55 |显示全部帖子
希瑞干细胞
回复 木子小王令 的帖子! H5 V/ e8 [* n0 t% \( s( v9 B
) V" ^. t! ^/ K/ A  o
是的,第九天转那效率肯定不会很高的,我们分离就刺激,浓度看你们所需的细胞种类和抗体质量了,这个需要摸索一下,不过你们可以长到第九天还有10%转染率,那刺激可能不是最大的问题,你可以试下分离2-3天转,可能会好些。悬浮细胞不需要铺板啊,直接转就是了,第二天换液。
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发表于 2016-3-31 09:13 |显示全部帖子
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回复 riverdtang 的帖子
5 q& }: a0 t5 r: F. `/ c/ ~; e6 C$ g; k4 [* x0 F7 N4 P
恩恩!谢谢大神!( n& u" X" U+ r6 O
我下次试着做个梯度,有问题还请多多指教!!!

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发表于 2016-3-31 09:35 |显示全部帖子
回复 riverdtang 的帖子5 }+ m2 X3 F/ j: y
0 h1 X: g! p3 q/ X
你们是用什么培养液的??怎么转染率这么高,我们感染效率一直都很不稳定。
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发表于 2016-3-31 10:16 |显示全部帖子
回复 riverdtang 的帖子5 A* l8 H8 ~8 }4 W) T
3 R  m4 ?& @0 ]4 ?/ s2 ~' b
你们转染效率这么高,我们都用了RetroeNection加polybrene,还是没多少,应该是载体有问题,你们用的那种载体?
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发表于 2016-3-31 10:18 |显示全部帖子
回复 winqi 的帖子  }9 b2 t: _: z  ?/ p  n+ S  ]( `

" ~2 Z, z! ~, K% r$ w用的CMV,最近准备换ef-1a
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发表于 2016-4-1 10:52 |显示全部帖子
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% W1 {' X3 F% x5 s9 Q
8 p4 O/ C/ L' a0 ?: k! q# K启动子试过没有什么明显的差别,还是转染时机影响吧,分离激活后尽早转会好些
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发表于 2019-1-11 14:06 |显示全部帖子
回复 riverdtang 的帖子0 T( K& I$ ^. H) L

9 `0 W# z! ^1 y请问你们用聚凝胺了吗
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