CAR-T细胞培养中慢病毒转染的问题

yanxm920

没有遇到过呢

木子小王令

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5 o0 f. i, e' T% R是的，感觉自己还是操作有问题。% H) N2 v5 g( k3 N
是别人给的培养第九天的Tcell，我每孔取了3×105接的。因为以前慢病毒转染时候一般都是在转染时细胞汇合度达30~50%，所以这回转Tcell也想当然的沿用这个规律。1 L% P+ Z* }) j9 M1 ?

/ g" v8 j0 v+ \9 P* R7 z3 j3 I请问你是在Tcell初始分离后就开始用抗体刺激吗？是不是这个时期的Tcell活力比较高呢？（我之前用的Tcell是不是有点老了？）( ]- d) A% v/ V* }' y" @6 `

: v/ E" G1 k8 U. k& u7 e; ?7 G' P铺板密度如果是10^6/ml，6孔板铺1ml就可以的吧？接种第二天做转染，然后24h后再换液？
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riverdtang

回复 木子小王令 的帖子  x* d$ B4 W5 c% J5 S
1 O2 e; n' @3 w; N3 f% r! ^
是的，第九天转那效率肯定不会很高的，我们分离就刺激，浓度看你们所需的细胞种类和抗体质量了，这个需要摸索一下，不过你们可以长到第九天还有10%转染率，那刺激可能不是最大的问题，你可以试下分离2-3天转，可能会好些。悬浮细胞不需要铺板啊，直接转就是了，第二天换液。

木子小王令

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4 k2 Y! z7 E5 ~0 @) j
8 H" B0 Q2 X- _( h& s8 ~1 U恩恩！谢谢大神！2 j2 B7 y( @  Z$ |
我下次试着做个梯度，有问题还请多多指教！！！

ET生物人

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& W4 {* i. J3 r1 i8 ~. Q
7 i. v+ }* L* ^- o$ D( l' a你们是用什么培养液的？？怎么转染率这么高，我们感染效率一直都很不稳定。

六弦七品

回复 riverdtang 的帖子9 I9 k% R& r& h3 \% U
: z/ w8 f; a' G( U. U! Q
你们转染效率这么高，我们都用了RetroeNection加polybrene，还是没多少，应该是载体有问题，你们用的那种载体？

六弦七品

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" E* w+ G# m/ U2 B" v% _$ d# c/ F, E6 e5 F
用的CMV，最近准备换ef-1a

riverdtang

回复 六弦七品 的帖子1 c3 ~9 @! K4 L, r  x/ d. X
# o8 k8 B2 M4 @2 v* ^/ o
启动子试过没有什么明显的差别，还是转染时机影响吧，分离激活后尽早转会好些

jinhaifeng

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  g1 j; ~. L4 @5 P: X! z2 y请问你们用聚凝胺了吗

只因偶然

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) P% Y' a4 T- x' ^+ \$ M; `' _! f: M1 t# @" Q
你们测转染率是什么时候测的？为什么我们养的CAR-T，转染第5天后（转染第2天换液），细胞增殖速度变慢，活性下降了呢