MSC消化不下来，怎么回事？

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$ N/ U/ r, @% r; ~用PBS洗两次，应该没有残余的培养液了，胰酶只是放在室温就用了，加上胰酶后放回培养箱里，过几分钟拿出来，也消化的效果不理想，而且还是成片的脱落

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回复 草胞 的帖子2 J0 K; Q: J1 w; s1 }! z! P
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无血清培养

月_幻影

回复 309208770 的帖子2 }, ~- S) q4 p8 v6 L

0 X4 T) W5 L! F; U细胞密度过大、消化时间过长也会发生这种情况，一般细胞传代最好控制在80%~90%左右即可，LZ也说了前面消化传代都很正常，但这一代的生长密度≥100%，所以不排除是密度过高，且胰酶消化过度会导致细胞粘连成片脱落……
; _. e4 r$ L8 o0 I3 }8 dPS.我们平时做MSC传代都是培养箱内消化一分钟，消化效果很好，且每一代都会注意其生长密度。

Natalie

可能是胰酶没有预先拿出来，使其的温度达到室温

晗晗

可能是胰酶的浓度比较低吧，应该在37℃里消化，这样应该会好一点

veda327

PBS洗涤一次，少量胰酶浸润一次，把握时间浸润消化一会儿弃胰酶，放37度消化直至大部分细胞开始脱落即可加培养基终止消化，这种方法最好用无EDTA的胰酶，对绝大多数贴壁细胞适用，且对细胞伤害小！

Natalie

胰酶最好提前从冰箱中取出来至室温。消化的时候可以放回二氧化碳培养箱，37℃的情况下消化，2-3分钟，在显微镜下观察大部分消化下来了之后再加终止液

Natalie

胰蛋白酶/EDTA(0.04%/0.03%)，胰蛋白酶/EDTA 2(0.025%/0.01%)这两种浓度你可以都尝试一下

田甜

亲，看了你的帖子，我还纳闷呢：“lonza培养，汇合度100%，居然消化不下来“，在我的经验中，应该是不用消化，细胞都会成片脱落的。这个好像是这款培养基的特性。其实你应该在汇合度是80%就传代，再放一天，细胞特定长过，成片脱落或是成团聚集，然后脱落。我到现在都没有解决办法，只能将就这款培养基，毕竟养好了，细胞收获量和细胞状态都还是有保障的。建议你摸一下细胞传代密度，保证3天汇合度90%，以后你传代就按这个密度来，基本上问题就不大了。

444352110@qq

我觉得是不是你的胰酶出了问题：
# e8 z; O3 W+ ]& j( d. V$ |7 D第一、胰酶时间长了，活性达不到！: w, u5 T1 g: y
第二就是胰酶保存温度不合适！
' w$ c+ Y( S* r4 W! |+ O/ |6 b第三就是没有把胰酶预温，大部分酶的最适温度是37℃。/ I8 U1 P( H! `9 U5 ~* ~
我原来用国产的胰酶，消化细胞大概要10几分钟，而且对细胞有损害，后来用GIBCO的温和消化液，就很好消化，4、5分钟就可以了