干细胞计数活性低

yingfeixiang

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这个是需要实验确定下

yingfeixiang

回复 yanwu_1 的帖子: @6 A: w/ u& ]/ Q

$ ]9 x+ M" `" m焦距自动的

yingfeixiang

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2 j, s  j" t3 M* J# @6 G( n- \4 G
只能对比一下了

阳光正暖

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" m$ I9 W! A! D1 D
胰酶是一种蛋白酶。通过在特定位置上降解蛋白，使细胞间结合处蛋白降解，这时细胞由于自身内部细胞骨架的张力作用下成为球形，从而使细胞分开。
" v/ v$ N7 C/ g8 @$ R) y' o" F      不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在pH为8.0、温度为37℃时，胰酶溶液的作用能力最强。使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。因Ca2 、Mg2 和血清、蛋白质克降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2 、Mg2 的BSS，如：D-Hanks液。终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。# O. k/ n; L: ~2 N) g3 U

2357710447

细胞计数仪是全自动计数的  一般不会有什么大问题   有可能是你姨酶消化过度    还有就是如果你的细胞密度过大   是会有一定的影响   另外一个就是胎盘蓝   计数的时候有个稀释倍数和细胞模式    看你选择的是那个稀释倍数   是标准细胞还是小细胞模式这些计数出来都是有影响的     最后一个是胎盘蓝    有些胎盘蓝差一点的是会有细小的颗粒       用的时候需要过滤  使用的时候尽量不要用力摇动    防止吸到颗粒杂质    细胞计数仪会把那些小颗粒默认为是死细胞     希望对你有用    个人经验

yingfeixiang

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9 a/ i6 |0 b7 F  u谢谢

2357710447

1、可能是消化过度，导致细胞死亡，计数默认为死细胞   ! ^. t4 O* Q' t- y
2、细胞量太大，没有吹散均匀，聚团或者过大计数仪不能识别3 X2 p4 O; N$ a: Y. o8 b4 ~6 I6 H
3、计数仪的计数模式有小细胞和标准细胞，稀释比例有不同，需要调整正确
" k6 g4 m: p* n6 Z* B4、有些胎盘蓝有小颗粒沉淀，用时需要过滤，静止后用，在细胞计数仪下默认为死细胞，影响活率
4 R% [+ O- P0 H: a0 K/ L" h* K5、你可以重复几次做对比，取平均值看一哈  a! `) R% L* P2 b- @2 t6 X
个人经验，希望对你有用

LVXUEYAN1101

我自己手动计过活率，差不多也是这个数，估计跟胰酶消化过程中对细胞的损害有关。

独自等待

调countstar程序参数，alive dead 参数重设至0.5 ，原因就是电脑把稍微染上台盼蓝的细胞当作死细胞了。建议镜下手动计数和活力，手动是最准确的，如果活力正常就说明细胞没问题，还是countstar的问题。

saliai2016

Counstar焦距一般是固定的，除非仪器移动过造成焦距变化，看不清细胞，不用动焦距的参数。如果第一次看新类型的细胞，尤其是特别小的细胞，可能是因为放大倍数的关系，视野里的小细胞全都是蓝色的小黑点，但是其实在更大倍数的光镜下看是光亮透明的活细胞，这就是细胞大小超出了counstar检测的大小范围，不能用这台仪器检测。1 D: P& d& T6 [/ h* E; w7 J
用counstar计数发现活率太低，先观察视野中是否出现大量的台盼蓝杂质；然后再看counstar配套的软件圈门是否恰当：
' ]5 A3 {3 y% Y9 u" C1.        看细胞大小的参数设置是否合适，参数不合适，软件会把过小或过大的细胞判定为死细胞；
9 m/ k: X% F' H0 _3 J8 B/ O2.        是否把活细胞判定为死细胞，这一步只能靠操作者本人的主观判断，细胞内部染色多深才算死细胞，细胞的蓝色边缘多粗算死细胞，调alive dead参数直至合适为止. Z  W7 a( I% C* `