神经干细胞越养越来越少怎么回事

sunyandong

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细胞海洋

请详细叙述实验过程 并上图

sunyandong

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一是细胞总是贴壁，不能形成球状3 e* l0 V$ R2 r& ^& d. B: w
二是传代过程中，细胞计数数出来的细胞比上一代会少

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回复 细胞海洋 的帖子! ~5 C) k, \7 O  A$ T9 Y, O

8 A7 `) O3 Z: s传代的时候你们都用什么酶消化？我用的TryplE，但是感觉消化的时间把握不好，还有消化不充分，

zb_ming

神经干细胞培养过程中，要保证营养因子按时足量补给到位（及时换液，还要杜绝污染）。再者，神经球如果长得过大，越靠近中央区域的细胞越是营养缺乏营养；还要注意，培养过程中，细胞要分布均匀，平时观察时要轻拿轻放，尽量减少晃动等细节。最后，传代时要使用温和的消化液或者不用消化液（尤其是前几代可以不用）；另外就是注意吹打的力度和次数，这个需要自己在实验过程中去摸索经验，不可死板照搬。以上几个方面就是常见的导致神经干细胞分化甚至死亡（导致你的细胞减少）原因。PS：注意原代取材的每个步骤，这是首要且必须要谨慎的！希望对你有用。

zb_ming

再次提醒楼主一下，日后如此类问题，除了描述最好能上几张图。大家能更好更客观的去分析和回答问题。以上只是我的一些经验之谈，难免宽泛，缺乏针对性。再者，现在实验室条件普遍较好，拍个照应该不是问题，这也是养成好的试验习惯的必经之路，好的坏的结果都要记录，记录除了文字还有图片，而图片更胜于文字的记载。顺便啰嗦两句，见谅！

winstonsee

神经干细胞对培养的温度和营养要求比较高。培养过程中，要实时观察，如果神经球如果长得，越靠近中央区域的细胞越是营养缺乏营养，神经球中央区就会变暗，处以中央的得不到充分的营养而出现老化；另外，在传代培养过程中，要及时除去那些老化的细胞以及贴壁分化的细胞，平时观察时要轻拿轻放，减少晃动等细节，尽量使细胞分布均匀。传代时要使用对培养基预热，控制吹打的力度，尽量减少或者避免外界因素对培养体系的干扰，避免细胞老化和分化。