求助：脂肪消毒灭菌问题

cxs

回复 dollar007 的帖子2 w) d' z+ g) v4 X8 ~

. {% |  |6 b9 N, R; X3 W0 P我们一般控制在10秒内，涮一涮，然后立即过生理盐水或者PBS，我们比较常用的是生理盐水，PBS也用过，但是因为那时是自己配，嫌麻烦，就用现成的生理盐水。我们取其他细胞也都是这么处理的，并没有什么问题。另外，我们是在医院取的样，条件各方面应该都会比美容院好，所以这个关系应该也挺大。建议培养基里也最好加一下双抗。另外的另外，你师兄说的尝试过酒精处理不长，有做对照吗？未必就是酒精处理的问题，也有可能是原材料不行。这个我们前期也走过一些完路。祝好

wzm123hzy

) r+ Y3 b- X: C% k

& {: R; I; C% X# \0 s* a我没有做过人的脂肪干细胞原代提取，但我觉得大部分还是相同的。我们做大鼠的脂肪干细胞原代培养时：1.剪去组织浸泡在含10%双抗的PBS中 5min, c) y' o5 o1 p9 J
2、吸弃含双抗的PBS，用PBS冲洗3-5次
; d8 H5 r7 p3 B3、剪碎组织
; j& [# q. J( P4、胶原酶消化，离心, O5 G/ @% m# Y% c
5、用滤网过滤，用含1%双抗的培养液培养。
+ @% Z9 F2 F/ R: C9 |8 g刚开始会有很多脂滴漂浮在上层，你不用担心。细胞3天后再看，换液。不要急的观察，晃动它。如果但心细胞提取的不多，贴壁性不好，可以先铺1%的明胶，促进细胞贴壁。
$ ]( c9 {6 L2 b0 S) `2 l, W含有，你可以多查一下博士，硕士论文文献，那里实验步骤很细，希望能帮到你，祝你成功！

dollar007

5 A- R5 c7 v, J- x. N  R

. a: L! P  s  ^  `回复 cxs 的帖子- @' V# Q$ l" I  C
+ @5 I1 v' S0 [
谢谢。找机会尝试下你的方法。生理盐水我们以前也用，后来合作的一个实验室测试国产注射级生理盐水PH, 发现太不稳定，最低可以到PH5.5。洗样本，漂洗细胞，就改为PBS了。

cxs

回复 dollar007 的帖子
) y4 x1 A' {  Z6 l% `; Y0 {  J5 Q6 i
1 J) U) \1 M, ^' C不客气，相互交流，你也给我们提供了一个比较好的信息，我们一直用的就是医院里注射用生理盐水，以后我们万一实验过程中出现一些问题，PH上也要考虑一下了

woshibotao_01

我们之前从美容院采的乳糜可能会有污染，医院手术室采的脂肪块一般不会污染，乳糜只能用PBS洗涤然后再过滤网反复几次

zhoushuiguan123

我之前也做过脂肪细胞培养，培养到P2代才出现杆状菌污染，所以不排除是菌的潜伏期长) E* p% ]- ?' a! B8 A" I

zhangjianqi0206

回复 田甜 的帖子
1 {+ {, w/ X: j( o  ]  O2 m& @3 k9 P" \. ]1 M7 ]6 D
运输用什么保存液呢？多少时间之内送到实验室 能保证活性  

田甜

回复 zhangjianqi0206 的帖子
0 G$ k) s3 Z  H7 L- G( ]8 s8 @
: u0 }. n: X3 {  e9 `+ R我用了PBS加双抗。好像活性还行。
8 s8 G7 S# w+ t, i