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楼主: ccfc
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[请教] 细胞计数问题   [复制链接]

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发表于 2016-11-2 16:58 |只看该作者
计数最关键的步骤就是吹散、混匀细胞。对于计数板和计数仪来说,原理都是一样的,如果技术熟练的,计数板可能会更快,更准。对于计数仪来说,更多的是便捷,不用你再镜下一个一个的数,同时还能直接给你计算出想要的结果,一目了然,方便。计数是细胞培养中需要掌握的基本技能,无论是否拥有计数仪,计数板的使用和操作都要掌握,而这个技能的掌握别无它法,唯有多加练习。练得多了,准确性也就提高了。
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发表于 2016-11-2 17:04 |只看该作者
计数前一定要将细胞吹散混匀,计数不稳定有差异是正常的,但是如果相差较大可能就是计数过程中有问题了,可以多计几次数,取平均值。细胞计数多练练就好了
/ L& W0 Z- j, b9 G: L
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发表于 2016-11-9 21:40 |只看该作者
详细操作,以T25为例,消化离心后,一般加3-4ml培养基重悬吹打均匀,然后吸50ul,加入450ul培养基混匀稀释,计数时,每个16格以20-50个为宜,这个范围是最准的,建议数三次,如果两次之间的相差不超过20,亦可以。平均数除以4,再乘以10^5 ,这就是细胞密度。
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发表于 2016-11-18 14:46 |只看该作者
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我们这边一般都是数细胞,不用计数器,计数器第一,使用的计数板一般不可重复利用,浪费大,第二假阳性多。自己数简单一点,需要的时间长一点,数的不稳定的原因是你没数够,数多了自然就准了,数细胞是要练的
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发表于 2016-12-9 14:28 |只看该作者
如果你是新手的话可以用计数仪计数,可以多计几次看一下重复性。如果人工计数,也要多重复几次,要不然会有偶然性,还有就是无论怎样计数都要把细胞混匀,如果几次计数结果相差大的话一定要重新计数,多练几次就好了,还有一种可能就是人工计数的时候查数查的不对,没遵循计数原则导致两个结果相差得多
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发表于 2016-12-9 16:29 |只看该作者
计数之前要混匀,取样非常关键,个人觉的人工计数就是比较费劲,而且计数一般会比计数仪低一些,要是做系统实验要不就一只人工计数,要不就计数仪计数,只是不同的人计出来的数相差很大,所以要最好是一个人计数
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发表于 2016-12-15 11:47 |只看该作者
回复 ccfc 的帖子, r, `9 A) y9 C2 k3 I1 s+ v
7 P' l9 ^8 d4 k' s8 a+ W7 A
我们也遇到过同样的问题,计数仪有个测定范围,如果细胞数量较少,测出来的数值就不准确。
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发表于 2016-12-16 08:13 |只看该作者
我们实验室经常用2种方法计数,细胞首先要混匀,简单的用计数仪计数,有时还用流式细胞仪计数,这个非常准确。
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发表于 2016-12-21 20:12 |只看该作者
细胞大小均一,杂质较少,可以用计数仪计。计数仪计数还是蛮准的,而且特别稳定,计好多次都是一样的。
- p( a$ M  Q& w$ `7 U  O8 k9 o如果细胞大小不均一,成团多,建议计数板计。否则计数仪计数结果误差较大。
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发表于 2017-2-17 13:45 |只看该作者
取样误差影响较大,不管是机器还是人工。只能在取样时多混匀了。
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