急求如何从病人的尿液样本中分离，提取尿液上皮细胞的protocol

innatestem

各位大侠们，小弟急需如何从病人的尿液样本分离，提取尿液上皮细胞额实验流程。感激不尽哈~~~* @& L4 W" b% h  [

lchanlon

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, h! Q! R2 W3 V* n3 z0 X8 _1 p7 _3 o
This paper is talking about how to isolate epithelial cells from urine samples and to generate iPSCs from these epithelial cells. Hope it can help.

innatestem

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6 E2 E/ |7 R0 }( m: C* k3 k0 {6 Z3 b( f$ T
谢谢你的分享~

niliu730323143

1.     收集尿液，1000ml左右，当天收集当天离心收集。
/ z. r/ v+ ^  I4 Y4 ?; o2.        1010g离心4min；用多支50ml离心管离心。* _9 D. A% W: D  H3 @7 G4 @
3.        小心吸掉上清，剩约0.3-0.5ml液体。所有离心管合并一管。
- t/ [' h* s6 ^6 G" p+ O4.     1010g离心4min，用包含PS的PBS洗2次。
3 H: Q' ~; G$ `: ~, u0 @5.     加培养基重悬，种到0.1%gelatin包被的48孔板上。
' g2 q% X1 i7 B重点是培养基！！！（纯技术交流，参考着看）

时一清

1、在无菌 250ml 离心瓶内加双抗 5ml,  4℃。 $ c$ u' I. s2 }, s
2、中段尿液 150-500ml,  4℃。
- R" r+ Y+ h9 v/ W, t3、将尿液分装于 50ml 离心管中，400g 离心 10 min; 弃上清，底部预留约 2-3ml液体; 将上述尿液细胞液体合并为 1 管。 & o: K1 Q: a' k
4、加入 PBS 至 50ml (双抗, 2x)，400 g 离心 10 min , 用 PBS 洗涤 1 次；用 3ml 尿液细胞培养基 (双抗)，重悬细胞接种于预先明胶铺被的 6 孔板。
0 k* B# k' q0 y, _. ^" Z5、静置 3 天后观察是否有尿液细胞克隆形成（克隆 3~6 天可形成，也可能超过 6天。克隆形成后 1 周~10 天可长满培养皿，根据细胞状态也可能需要更长时间）。当克 隆形成较多后，每两天更换培养基 1 次；根据实验需要培养、冻存及传代（0.25% 胰酶消化 2~3 分钟，37℃，加入饲养层细胞培养基终止消化）。
, j1 A. J4 R" K/ t5 G% g

时一清

健康人尿液中细胞很少~成功率不高

淘知路遥

正常尿液中经过尿道排出来带有各种菌，成功率低，何况是病人，特别是尿道感染的。

淘知路遥

医院有种方法可以暂时使保持私处保持干净无菌，然后再取尿液应该更好些

innatestem

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5 ]$ `+ K' w4 _; Y" ~5 g- N7 A, Y$ B
. f1 t$ ]7 b5 X( m& ~; J. }你好。谢谢你的分享，培养基的成分有哪些？你能分享一下吗

innatestem

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8 Y3 m- l1 o& d2 d* N- L7 F7 Q) P, \2 _+ z, V, y6 i7 q# O- e
你好。谢谢你的分享，培养基的成分有哪些？你能分享一下吗1 a5 ]8 [4 h, M! R+ v7 o/ }5 g