为什么细胞传代后莫名其妙的不贴壁

fenglinzhu

同事培养的骨髓干细胞，传代之前长得好好的，传代后第二天观察细胞贴壁量少，大量细胞悬浮，而且形态状态不佳。换液后无漂浮细胞，等第二次换液前观察又有大量漂浮细胞，同时贴壁细胞缓慢减少。一开始以为是他消化过头导致细胞活力差，换人操作后还是会出现这样的状况。不知有没有大神遇到过这样的情况，求帮忙！
* R7 `& G' t, V! E注：1、培养基清澈，且无菌检测阴性，不像污染。
( L8 P3 n: X/ \       2、胰酶0.05%，消化时长30s-2min，细胞变圆皱缩时终止消化。

qinchuanniu

培养液原因：你用的是是无血清还是有血清培养液，这次是否更换过，如果你的细胞不用于人体内治疗，可适当提高培养液血清浓度；培养皿（瓶）的原因：有些品牌的质量不稳定，会影响细胞贴壁，可以用多聚赖氨酸、白蛋白溶液或适当浓度的血清处理一下。

理科小文艺

1.培养液成分是否有变动？9 b# H* s; m- p$ e+ ~& M
2.培养箱参数监测是否有问题？' m: T- C+ S/ i# z0 }6 e
3.是否进行了支原体检测？; v9 _( W# r9 I4 ?# e* C
4.培养瓶确定是贴壁细胞用？

rzghc

建议你测一下支原体。

baby00000003

% Z& d, w% O2 o1 }6 R# |8 h0 |

' E; l0 M$ _! Q2 ]- Z  i; p从试剂到设备，整个流程查一遍
5 Q) X8 \- {+ a/ P+ z4 @比如，配液配方、耗材货号、离心机参数、培养箱参数......  }" N7 {/ ?; l& v4 A
1 }- y4 b7 Y+ h1 a1 ?& Q
如果连续培养几天都有漂浮的细胞，直觉上是培养基配方的问题

fenglinzhu

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' q! M0 u0 _% O- J7 v/ \
. O$ O( \" r; q# Z2 |+ ]只有少数一两皿传代前生长良好，传代后不贴壁。大部分细胞传代后都是正常生长的。

fenglinzhu

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. s- a7 ]3 u2 U" d" u1 \' }
- b+ p( t1 i1 [9 F* ], ^只有少数一两皿传代前生长良好，传代后不贴壁。大部分细胞传代后都是正常生长的。如果是支原体污染，那不应该大部分会是这样吗？

fenglinzhu

回复 理科小文艺 的帖子0 R1 C# S7 ~0 b& M
2 C  s/ P  e5 s3 S
只有少数一两皿传代前生长良好，传代后不贴壁。大部分细胞传代后都是正常生长的。培养基也没有变动。

fenglinzhu

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+ m1 [& g0 o% n. H  X- f( ~  [2 L
只有少数一两皿传代前生长良好，传代后不贴壁。大部分细胞传代后都是正常生长的。10%的FBS个人觉得不低了，而且我感觉细胞还是在增长，只是不贴壁了。

baby00000003

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6 ]4 k6 K4 F7 c! I& ~$ o# B) \: {2 a
( k+ q$ e3 U8 c5 g$ h1 E那就不好猜了，是不是放在了培养箱里特殊的位置......要不就是不小心被紫外照了之类的....