脐带间充质干细胞酶消化相关问题讨论

小飞雪2300

回复 伊诺强 的帖子9 A- q1 p5 v8 }1 J0 @

$ X& Z2 w1 m0 d$ O4 V! a6 ]! X4 W之前用过II型胶原酶，特别粘稠。离心时10倍稀释都不好离心。你消化液与组织块的体积比一般是多少？

小飞雪2300

回复 淘知路遥 的帖子3 }- A/ s' M9 C

+ w  `$ S  b4 O' N浓度是多少？胶原酶的浓度又是多少？消化多长时间？细胞得率高吗？

小飞雪2300

我用II型胶原酶消化半个小时，离心，收集细胞，显微镜下可以看到细胞，培养5天，细胞都不贴壁，后丢弃没有在继续培养。半小时消化，组织块并没有完成消化，剩余的组织块放培养箱继续培养，第二天发现组织块全消化不见了，目前是5天，也没见有细胞爬出。

huqiao1649

贴壁和消化法均可以的，贴壁爬出来的细胞形态上更好，单周期比较长，酶消化可以用胶原酶，一半消化2h，3-4次洗涤离心后及部会粘稠了，获得 的细胞比较多，正常的话5- 6天可以传代，但形态上个人觉得没那么好

小飞雪2300

关于酶消化的问题，我提出自己的看法，很多文献上说用胶原酶消化，有说是II型，有说是IIII，也有说用胶原酶消化能得到高的细胞产率，可多高，又有谁去解释呢？之前有听说从国外的一种混合酶，消化脐带比一般胶原酶长得好很多，Po代就可以收到108级细胞，我在想，国内做这个的有很多人，为什么就不能把经验细节分享出来，我们也不能只止步于用现有的胶原酶消化，在论坛中能看出来，按文献做，很多人都做不出来的。做出来的人讲的又不够详细。希望有经验的人还是多出来帮助解决下论坛提供的问题。-我可不是论坛管理人员，只是想在论坛中学习更多的东西。

wisent维森特

剥离Warton胶后，采取组织块贴壁方法，比较传统，加入蛋白酶消化后会影响细胞形态。组织块贴壁法能在7-10天内有细胞爬出，待融合度达到70%以上可以消化传代，过个细胞筛，去掉杂质，提纯细胞。这样细胞生长形态会好一些。
+ U  x2 c# a* ?3 ^) y) b而且，组织块贴壁法，也能使细胞适应培养体系

伊诺强

回复 小飞雪2300 的帖子9 t1 L9 \1 R  I6 o8 b" ]4 t# ?) _

$ ?' S! r7 c, a1 b) d0 g3 f: x# u一比一到一比二，但是当时最重要的酶浓度给忘记了。。。。。。。。。