我培养的小鼠ES细胞出现图中的情况，不知是怎么回事？

llecstem

染菌了吧

dilal

问一下楼主是否是自己提取的原代MEF，是否做过支原体污染检测？我们最近的mESC也出现了差不多一样的问题。我们接种的MEF比你上传的图片要密的多，铺满培养皿约80%，也出现了图片中的黑色颗粒状物质。当初怀疑是黑胶虫污染，上网查了相关资料后觉得也可能是细胞碎片造成的。我们的mESC在细胞传代后细胞大量成团漂浮，feeder状态在接种mESC后明显变差。综合考虑后认为可能是MEF支原体污染造成的，细胞生长缓慢，且逐渐死亡，大量的细胞碎片形成类似于楼主图片，细胞传代后贴壁性明显降低。

随风的天使

看了这个图片，首先感觉饲养层做的太稀了，并且形态不好，这样对干细胞的生长时绝对不利的。适当的饲养密度有利于干细胞的生长。这样稀的密度建议楼主提高饲养层密度。细胞的形态很关键，形态好的细胞，细胞生长的较旺盛，适合于分泌因子。/ i* w! _1 v/ u8 z! K
其次，上面的点点很多，应该不是细胞碎片，细胞碎片在换液时是可以清洗掉的，在显微镜下也可以分辨出来。如果这些点点是动的，那就是污染了。但看样子不是很像。很有可能是支原体污染。最好放弃这样的饲养层细胞。对于一些基本的细胞试验操作，建议楼主可以看看动物细胞培养或者精编细胞生物学实验指南。7 A6 b, p; l5 n1 f

cochongg

这饲养层不行啊，密度怎么可以这么低，ES需要细胞密度生长才会好的。feeder不仅仅提供一个外在环境给ES，同时也提供一些未知的因子，和细胞间的信息交换的。

cochongg

饲养层密度太低了

YYQ6301

这个帖子已经好久了，不知道后来这位实验人员是怎么处理的，呵呵！这个问题我们养别的细胞的时候也出现过，怀疑是支原体污染，初期并不影响细胞的生长，但是时间长了，细胞长得慢，开始死亡，如果少的话，很容易长不起来。

irise1006

我最近一直被这个问题困扰，怎么解决阿？MEF只要养上ES就死亡，出现碎片

YYQ6301

回复 irise1006 的帖子- x/ n) u8 r, m, Q+ q4 ^/ K. b/ ^
2 @7 A0 O+ z/ e
你是说你的MEF在没有上ES的时候很正常，而接种了MEF之后就有碎片了？是否考虑过你的ES有问题呢？

lsjj619

很像霉菌污染啊

yylhxylong

1. Feeder太稀了，你考虑多铺点feeder 兴许能让细胞长回来
6 a7 S5 w% f' G  l4 w2.圆形的colony如果是你的细胞的话 有些太小了
2 a' c; ~. S/ T, k3.那些小碎片什么的会不会是你污染了 出现的细菌