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泡沫清风

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2 n( c* K6 G9 ]我先说一点：培养过程中，我没提到换液，说明就没有换液！一般细胞种上后我就放在那里不怎么去管他，等他长满了消化5 y" p( L1 a: t  C) e
因为有人问我这个问题，所以我先回答下，呵呵！

泡沫清风

# S9 ^2 t, p, s, Q" l. w
& e, ?3 g8 f7 X/ Mhave-a-rest 的问题：( P4 q; y) @$ u+ A5 t; S
1、我们的培养基买的是GIBCO的粉末，含丙酮酸钠5 F+ i' @) C" Q% k1 H) Z+ E
2、双抗加不加依个人习惯，我培养不会污染，所以就不加了！而且包装病毒和感染的时候最好不要加双抗
# `+ i1 w& m. P! @& j% T  Z3、我们以前也用过胰酶+EDTA，感觉太强烈，不利于细胞下次贴壁，293T细胞本来就是贴壁不牢的细胞系，0.25%的胰酶消化已经够快了，有些protocol还建议用0.05%的胰酶。还有专家建议胰酶都不用，直接吹就行，我们也试过，吹完了细胞碎片很多，背景很脏。吹打时间长是因为293T比较粘连，容易抱团，充分吹打成单细胞！

泡沫清风

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  S' `/ Q$ |. h3 z* p+ ]. k8 O
hualin840518 的问题：  l( ~4 K; o, o  a% n* k# i
nikon的荧光显微镜自带的成像系统

泡沫清风

5 R9 S: {7 E9 S2 V* x/ K$ P; y5 }8 R% D2 Q( n
mvirus008 的问题：2 K: n) a% y% A* b4 ?- w
可以不离心，确实也有人这么做，虽然是中和了，但是仍有残留，我觉得不好！
& a2 z# o* R( @/ @而且不离心细胞碎片可能会多，背景比较脏% t8 Q3 V+ L4 Z9 d9 T
美国那边的老师都推荐离心。

泡沫清风

难得胡涂-1的问题
$ N0 I% T# m! b/ B, Z293T贴壁本身就不牢固，你很难把握，稍微消化一会细胞就起来了！倒胰酶，容易倒掉细胞

gemstone

建议将0.25%的胰酶用PBS稀释1：4，然后对细胞的损伤会小很多，这个细胞很容易消化。转染也要特别小心，不小心就会漂的。

泡沫清风

6# gemstone - E% Q2 ]9 I- j; S
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呵呵，我上面说了，也可以用0.05%的胰酶！
5 G- z7 Z: e* f" ~  M# |转染我后面会说的，我铺了poly-L-lysine,所以不太会飘。而且就算不铺poly-L-lysine，我们的细胞还是比较牢固的，细胞比较好

wangming

比较过铺明胶和poly-L-lysine的效果吗？我用的是明胶，经常出现很多白色颗粒。

泡沫清风

8# wangming # I' |! A- B3 w
我没有用过GELATIN，GELATIN一般都是在培养ES时用于铺Feeder的吧。

sajia

我想问一个巨弱的问题：第一天和第二天的图片上黄色的圆圈是啥啊？还有怎么判断宝宝长的好呢？光看触角么？