间充干流式

花饶然

请教大侠们，最近两个月做了比较多种类的MSC流式表型检测，细胞都是培养过好几代的了，CD105总是不稳定，最低的时候都低于10%，最高的时候也有99%的，是细胞本身的问题？操作都是一致的。另外追问下，各位有没有发现细胞冻存过后，表面抗原会丢失的，我觉得下降一点是正常的，但是有的从强阳变为弱阳就太奇怪了

baby00000003

经验上传代特别频繁的CD105低。
! d. ~4 {0 n+ }/ b% C) N至于冻存过后，一般没有立刻用来FACS的吧，好歹贴壁个48h再测？3 l/ e3 H8 s. {' X7 B3 R0 ?
个人经历：延长孵育时间，比例会高一点～

花饶然

回复 baby00000003 的帖子) r. W7 P) B$ U+ s, X+ J+ V9 L, K

( g$ i* f" J* B感谢赐教！我们冻存过的有复苏后立即做的，也有培养了再做的，都挺低的。您是说的代次高，还是指传代间隔短 的，我们一直都是差不多的，细胞增殖情况快慢悬殊到也不大
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baby00000003

回复 花饶然 的帖子6 Y3 f) H' ]9 \2 }$ L* |

# n3 ~/ z3 g) @表用“您”，伦家会不好意思
2 a; f  v3 x/ ]% G偶说的是传代间隔短，比如3天传一次的可能CD105低，5天传一次的可能好点～
+ `! ?% l$ D, A5 G9 V1 a2 K不过低说的是不足95%哈，90%还是有的～

花饶然

回复 baby00000003 的帖子* M) _* O2 V  ^
/ ~; j3 _3 r: Q. N. n/ K! \
但是我说的低是跌到50%以下了，好奇怪的说，传代间隔我到还真没关注，谢谢交流。。。+ v' b& J) ]5 P1 W+ ?. N
“您”是尊称，不表示年龄哈
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wzs1985

你是用什么培养方法？以及用什么冻存试剂？1 |0 k! ~5 i  X0 q& g, P( ]

花饶然

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: ]4 X1 N% l2 R/ ?0 ^& u. S% ^5 q% r  V. U3 Z
冻存液就是完全培养基和10%DMSO，几年来都这样

Ivan0108

10%，是不是抗体孵育出现过程中有问题？一般都不会出现这样的啊

花饶然

回复 Ivan0108 的帖子1 p# J+ B0 [$ {. z1 Z

2 V6 ^1 ?6 C0 L' y" y: j- h% l木有什么问题呢，我流式虽然做的不多，但这几年都会做一些，应该是木有特殊的
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wzs1985

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! H/ K' w; J2 P0 p% l  c0 O4 K6 w4 c; {  S/ D& S9 w( {
有没有考虑过，现在的血清质量下降了？   你用90%血清加10%DMSO试一试？