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1 冷冻管应如何解冻？: D. T8 N0 t% Y: A" U0 X7 ~+ m
取出冷冻管后， 须立即放入37 °C 水槽中快速解冻， 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时， 必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。
' M! b$ ~3 e5 X3 T! ]# c, u- _5 d* @2 细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO？6 _# Y: h' P$ o$ I7 p
除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞）， 在解冻之后， 应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中， 待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。( m( l8 V2 R4 K7 ^3 u7 l# a$ l
3 可否使用与原先培养条件不同之培养基？: c7 c/ a4 U/ s) G9 F O6 b
不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基， 若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基， 细胞大都无法立即适应， 造成细胞无法存活。; X \0 m, X9 y4 d
4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类？
5 p/ a7 X6 A$ o: w不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源， 所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清， 在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
/ }( t/ k( i9 b5 何谓FBS, FCS, CS, HS ?8 ^. F1 U& ~. o, X+ Y3 k5 \( e
FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思， 两者都是指胎牛血清， FCS 乃错误的使用字眼， 请不要再使用。CS (calf serum) 则是指小牛血清。HS (horseserum) 则是指马血清。. m) f4 [( L. ]1 q
6 培养细胞时应使用5 % 或10% CO2？或根本没有影响？# a5 C. c* P& ?7 |! Z8 w
一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统， 而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g 时，细胞培养时应使用10 % CO2；当培养基中NaHCO3 为每公升1.5 g 时， 则应使用5 % CO2 培养细胞。1 G/ p- m7 Z: W5 T4 E# Z$ V" G' a
7 何时须更换培养基？9 _, F( d u' t7 x
视细胞生长密度而定， 或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。* K; V1 v+ c5 D
8 培养基中是否须添加抗生素？& t2 s* _* f! F- F1 s! R
除于特殊筛选系统中外， 一般正常培养状态下， 培养基中不应添加任何抗生素。
# G- `/ ^/ b3 ~- s- f$ B9 附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA 浓度？应如何处理？9 K" `" @9 u8 G4 `5 t0 r
一般使用之trypsin-EDTA 浓度为0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中， 保存于–20 °C，避免反复冷冻解冻造成trypsin 之活性降低， 并可减少污染之机会。 |
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发表于 2017-10-12 14:24
