脐血中的造血干细胞和单个核细胞PBMC是一个东西吗？

jiuxuya

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明白，您说羟乙基初步去除红细胞，您之前说然后再用红细胞裂解液这个是主要去除红细胞的吧，效果好吗？按照您的做法，一般您的细胞回收率达到多少呢？

fenglinzhu

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) N  N9 m+ x) d/ }* C5 |, l! ?可以多次羟乙基处理，但我没试过，觉得太费时间，所以我用羟乙基一次处理后离心，然后收集沉淀用红细胞裂解液裂解后，总体来说平均能收到2*108个有核细胞吧，回收率没算过，近期准备跑一下流式看看CD34+含量，到时候看看含量到底有多少。用FIOCOLL分离大概能分离到1-2*107个细胞。
6 d, V$ w( m/ g4 B% c红细胞裂解液裂解效果还是挺好的，但是还是会影响活率，但是我觉得这样会省时省料。

随时准备下线

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用外周血分离造血干细胞才需要用药物动员，免疫细胞的话，不用动员

jiuxuya

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" S$ q: [2 O; F" Y4 b明白了，就是外周血中造血干细胞太低了，所以需要动员来刺激，免疫细胞因为是要的CIK,或者NK，所以不需要。

jiuxuya

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- F/ ]8 I8 ~* r6 {2 ~" C明白，您用的羟乙基淀粉和细胞裂解这套方法，是否也是包含了自然沉降法呢？是不是您用羟乙基后自然沉降个半个小时左右，然后离心，然后再像您所讲的用红细胞沉淀用红细胞裂解？裂解之后也会有白膜层吗？

jiuxuya

回复 fenglinzhu 的帖子8 d3 L: U" n0 g# B" k9 s; A

2 Q3 w  R  v3 M& _* }* N9 B您这里所说的CD34+造血干细胞一般占据有核细胞总数的百分30吗？这个是通常占有率吗？

fenglinzhu

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- k: u  u, w: @( _, R* `4 \( R- `& S2 a9 n
骨髓移植所需要的CD34+（造血干）细胞量为2*106/kg，这是治疗标准。而脐血一般情况下只能满足10岁以下，体重不超过30kg的患者使用，按30kg算的话，也就是说一般情况下CD34+细胞大概有6*107个（这个数据是我根据治疗标准推算出来的），而我收到的细胞总数平均是2*108个，也就是理论上CD34+细胞应该占我收集到的有核细胞数的30%左右，实际的话要等跑了流式才能知道，近期我会做一些流式数据出来。

fenglinzhu

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/ I# ^5 c' I& o7 {0 T" L- z其实你细心观察的话沉降完离心结束后能够看到红细胞上面有一层薄薄的白色细胞层，那一层就是有核细胞。我就吸去那一层，尽量不吸去下面的红细胞，然后再用红细胞裂解液裂解，裂解完离心沉淀就是白色的细胞。

随时准备下线

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( f( U! r" T8 q9 `1 C* F* o# C8 N( B
正解

jiuxuya

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是这样的，我看了一篇2011年的文献，上面写移至标准是2*10的7次方/KG，他们分离出的有核细胞总数为1.52+-0.89*10的9次方，血液量应该为100ml，您这边总数是2*10的8次方，差距是不是有些大了文献里的数据？