关于脐带消化的问题

柏林小杨

回复 9# 157238360jwj
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& R0 q7 ]3 U7 ?7 ~' D  [) ~( v
    请问你们消化之后细胞悬液还粘稠吗？细胞得率能到多少？

西瓜太郎

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( R8 L* Z  y; r( T1 x. V: a" ]/ b. x8 U3 T
你好，你的试验中提到“加入 4ml 的消化液（含 0.25%胰酶，200~400U2 p# i7 k1 O( [& i
胶原酶Ⅱ/ml的PBS 液） ，混匀，37℃中消化1 小时，每隔10 分钟振
: i: O/ c# z+ {; b* S摇一次”。我想问一下，你的4ml消化液具体是怎么配置的？因为我是才做实验的，也许这个问题很简单，但是。。。/ F' d: X7 G+ [9 O/ T( h; x+ S8 F
谢谢你赐教啊

wuxiao101325

回复 西瓜太郎 的帖子9 q. Y: n. J3 G- Z( u
9 b+ y* |( f* H9 W, S
分别用PBS配置2*的胰酶及胶原酶，用时等体积混合即可

西瓜太郎

回复 wuxiao101325 的帖子* k) ]. T& }0 e7 o# ^5 O

3 h3 J+ [2 Z3 Y* R% O+ e9 E就是4ml=0.25%的胰酶2ml+200/400U 胶原酶II 2ml？是么 ？2 _* K1 \# G: f9 ]5 }! b

文武庙

好东东，mark一下！

清影

最近做脐带间充质干细胞收率不高，而且细胞很杂，原代贴壁不好。各位有没有做的比较成熟的哈，指导一下。

wuxiao101325

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9 r, ?8 I, ~0 O$ R) ^: `: O2 Q0 a, [3 h4 P( E- F
0.5%胰酶2ml+400~800U/ml胶原酶2ml

西瓜太郎

回复 wuxiao101325 的帖子% n8 M+ h$ T; }( Q( A+ u# d

( ?8 o" x" b3 S0 p1 v: W4 将含组织块的消化液，转移到25cm2细胞培养瓶中，加入DMEM/F12(Gibco,cat no 12400-024)培养基（含15%胎牛血清Gibco, Ref 10099-141），37℃、5%CO2孵箱培养； ' J4 I, X2 C) M- u2 T4 h
弱弱的问下，你的组织块怎么从培养瓶中去除啊？

sign_huhu

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$ U- K, n3 J% ~- i6 Q5 d9 f
你可以把移液管掰断 用大口吸
/ C: R. q4 w, Q

xuehu20

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( i+ q  ?! |8 A: P' o* t0 Z* o9 I' ~9 |
把移液管细头一侧掰断，酒精灯前灼烧使管口圆润，然后吸取组织块，第一次换液要轻柔点，等细胞长出来后就可以拍打培养瓶，把剩余组织块去除了