关于脐带消化的问题

柏林小杨

回复 9# 157238360jwj 7 @" f2 d" Z8 v& w% `4 x; y4 d

( D1 U& U5 w! x) _/ ~- ^& `% i1 G2 t) b5 k2 G: A
    请问你们消化之后细胞悬液还粘稠吗？细胞得率能到多少？

西瓜太郎

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4 t' K' N: G4 e6 S" H( k5 t3 `7 n& u* q0 l9 W- Y
你好，你的试验中提到“加入 4ml 的消化液（含 0.25%胰酶，200~400U
( t. d3 {+ z  J+ j7 x- h9 {胶原酶Ⅱ/ml的PBS 液） ，混匀，37℃中消化1 小时，每隔10 分钟振
. q3 V0 p, ]% M! J. Z0 n摇一次”。我想问一下，你的4ml消化液具体是怎么配置的？因为我是才做实验的，也许这个问题很简单，但是。。。
% E  \$ e$ v( f* {- `* B 谢谢你赐教啊

wuxiao101325

回复 西瓜太郎 的帖子! q6 Z. G$ P- ?+ `$ G4 a& _7 W, x; J

) g3 E" s- i, u+ S  X9 P- f分别用PBS配置2*的胰酶及胶原酶，用时等体积混合即可

西瓜太郎

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% G, p, E8 U4 A3 C5 ]* M5 O" A! w) A7 ]# W; c& G
就是4ml=0.25%的胰酶2ml+200/400U 胶原酶II 2ml？是么 ？
* c6 Q7 p  x4 h

文武庙

好东东，mark一下！

清影

最近做脐带间充质干细胞收率不高，而且细胞很杂，原代贴壁不好。各位有没有做的比较成熟的哈，指导一下。

wuxiao101325

回复 西瓜太郎 的帖子" c# j) r2 s* a: [3 C
$ o9 V- c* V8 {8 w$ d
0.5%胰酶2ml+400~800U/ml胶原酶2ml

西瓜太郎

回复 wuxiao101325 的帖子0 \: ]. K% s5 y+ q4 |1 S$ T

# D3 X' ]# B# W0 B8 n4 f: P( P$ f4 将含组织块的消化液，转移到25cm2细胞培养瓶中，加入DMEM/F12(Gibco,cat no 12400-024)培养基（含15%胎牛血清Gibco, Ref 10099-141），37℃、5%CO2孵箱培养； / ]: Y! F3 M& y/ T1 w
弱弱的问下，你的组织块怎么从培养瓶中去除啊？

sign_huhu

回复 西瓜太郎 的帖子5 ^4 ?0 m- L6 Y) d, n* m

% h; @& P7 n3 R# O: v5 j你可以把移液管掰断 用大口吸 6 H8 y8 _, h. s& m/ B- M8 w

xuehu20

回复 西瓜太郎 的帖子% I# {2 \$ A, t" d6 I

: S# M! I/ [1 N6 Q% o把移液管细头一侧掰断，酒精灯前灼烧使管口圆润，然后吸取组织块，第一次换液要轻柔点，等细胞长出来后就可以拍打培养瓶，把剩余组织块去除了