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楼主: luoye1986
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干细胞培养怎样做到无菌   [复制链接]

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发表于 2010-5-26 23:03 |只看该作者
说来话长了,核心的一点,每一步操作都要有无菌意识,尽量把污染的风险控制在最小。
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发表于 2010-7-28 16:46 |只看该作者
首先要严格遵照细胞培养操作规范,前人的经验是实践得出来的,绝大部分是没有问题的;然后就是自己要细心了,注意每一处细节,从头养成好习惯,久而久之,无菌操作就不会有大问题了。
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发表于 2010-7-28 16:53 |只看该作者
我感觉还是和普通细胞培养非常一致的,主要超净台、个人、实验操作过程中所有仪器设备的无菌,一般情况都不会染菌吧,我感觉养不养得好主要还是个人的问题!
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发表于 2010-7-28 19:11 |只看该作者
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我们细胞间还算正规吧。。缓冲间,然后细胞间,装备白大褂口罩帽子手套,进去就双手消毒,要少说话,少运动,以免支原体污染。。。每天下班紫外线照射整晚,连带缓冲间。8 |, q0 R! ~& _! z' ^
还有什么。。。温箱要经常灭菌,比如今天我换水的时候,看见水都变成粘稠的了。。。
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发表于 2010-7-29 00:07 |只看该作者
细心一点 特别是取材及细胞换液等操作时尽量做到无菌操作 要有无菌观念 就像做外科手术一样 细胞换液时滴管一定要记清 不能混着用 仪器该消毒的要定期消毒 多和有经验的师兄师姐交流 可以在培养基中加入抗生素灭菌 但是还有很多的细节 要自己实验过程中注意 还要不多总结经验教训
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发表于 2010-7-30 15:13 |只看该作者
特别注意你革命的双手,所有污染基本都是这双手惹得祸,其它直接接触的耗材和环境只要检测合格就OK。
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发表于 2010-8-1 22:55 |只看该作者
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发表于 2010-8-8 19:40 |只看该作者
操作时的工作环境很重要;规范操作;注意细节;最好用进口试剂;试验前准备工作要充分。
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发表于 2010-8-8 21:27 |只看该作者
本帖最后由 懵懂干细胞 于 2010-8-8 21:29 编辑 ) E- C9 V% R0 [; g' x1 j7 J
2 Y. n) e! y2 I1 T- M! L; N
细胞培养所用物品清洗、消毒要彻底,各种溶液灭菌除菌要仔细,并在无菌试验阴性后才能使用。
* f2 D$ D' _0 i5 {6 \; S: o- ~  操作室及剩余的无菌器材要定期清洁消毒灭菌。
; o* N+ X" i# \0 _8 B( D/ k4 e  从操作者做起
9 d! p8 o  [% g; N0 j( \  (1)进无菌室前要用肥皂洗手,按规定穿隔离衣。工作开始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。 ) ]% u4 N2 e" p( w4 x; ?
  (2)操作者动作要轻,必须在火焰周围无菌区内打开瓶口,并将瓶口转动烧灼。操作时尽量不要谈话,若打喷嚏或咳嗽应转向背面。 : _" o1 @$ [9 Y2 A: c5 j% j& E
  (3)操作时要常更换吸管,一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去。实验完毕用消毒水浸泡的纱布擦台面。
& p" D6 |+ G+ \% V5 g  防止细胞交叉污染 3 V5 I. y0 M9 m$ m$ Y. n
  在进行多种细胞培养操作时,所用器具要严格区分。
* B2 h& Q/ z$ T4 e  在进行换液或传代操作时,注射器和滴管不要触及细胞培养瓶瓶口,以免把细胞带到培养液中污染其他细胞。
# D* c9 Y. @5 g, I( a7 D  细胞一旦购置或从别处引入,均应及早留种冻存,一旦发生污染可重新复苏培养
# v1 ]1 U  ?( O2 \* w- r" s移液管不要碰到瓶口,碰到就不能用,不要在开口仪器上方操作。
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发表于 2010-8-8 21:34 |只看该作者
细胞培养所用物品清洗、消毒要彻底,各种溶液灭菌除菌要仔细,并在无菌试验阴性后才能使用。 ' ~4 F5 y) C9 `/ y: W7 H' K/ x
  操作室及剩余的无菌器材要定期清洁消毒灭菌。 8 S( t! [" _+ q& A( d* m/ _0 E
  从操作者做起
0 C" k% T3 `) A8 Q+ V7 d  (1)进无菌室前要用肥皂洗手,按规定穿隔离衣。工作开始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。 : @6 j+ B/ K9 O$ r- Z- d! ?
  (2)操作者动作要轻,必须在火焰周围无菌区内打开瓶口,并将瓶口转动烧灼。操作时尽量不要谈话,若打喷嚏或咳嗽应转向背面。
) I6 w' l3 C, ?1 ^, J8 R# o  (3)操作时要常更换吸管,一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去。实验完毕用消毒水浸泡的纱布擦台面。
# q; I8 n& F4 S. E! T- H( g# i; ]  防止细胞交叉污染
% P' ^, @  l- z4 E  在进行多种细胞培养操作时,所用器具要严格区分。 ( E* \( N& U  e! Y2 I9 G
  在进行换液或传代操作时,注射器和滴管不要触及细胞培养瓶瓶口,以免把细胞带到培养液中污染其他细胞。
" U& z: C5 U6 k; G6 B; v( e5 E  细胞一旦购置或从别处引入,均应及早留种冻存,一旦发生污染可重新复苏培养
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