今天养MEF过程中发现的问题，请教大家

cony

奇怪，过了一天，它又长汇合了。。郁闷。

afei198520

回复 11# cony % o( u! j5 h( T* D7 f2 Y

6 w) P5 r6 }  d' t0 I呵呵 MEF长的很快的 0 Q5 }9 L6 B. y8 |9 r+ E4 X3 }# ?
是不是加液的时候蹭掉的呢？

是鸟就要去飞

看来上面有的人好像没明白楼主的意思，楼主上个实图大家就明白了，也好分析

fespysok

我觉得MEF状态不好，部分细胞发生凋亡，粘附力下降了

supergama

从示意图看，细胞状态不会太好所以丝裂霉素处理后会有细胞死亡，且因为细胞状态不好，处理后铺好的饲养层容易卷边，明胶包板会好一点，但用这样状态的MEF养ES不好！

iseeyou1210

你们都是在复苏细胞的当天做用mmc处理MEF呀?

iseeyou1210

feeder should be prepared in batch and frozen down.
3 g6 X! }2 \4 pin this way, you can control the quality., r2 m" F6 Q8 w4 F$ ^0 ?
if you do the feeder everything before the thawing the ES cells, I am not sure you can keep the consistency of your experiment.

cony

谢谢大家。首先MEF出现这种情况现在觉得是细胞状态不好，加上没有铺明胶易在MMC处理时发生收缩脱落。现在养ES有了很大的进步，一是feeder先MMC处理后冻存，二是复苏ESC的前一天才复苏MEF，且明胶包被30分钟，当前处理当天接种确实不太好，三是ESC最好隔天传代，每天换液，现在ESC长得还满意。
  G/ E# p2 l# ]1 J; X大家互相交流学习