小鼠胚胎成纤维细胞的制备及处理(饲养层)

majing217

我通常取13.5天的，也是去头去尾去内脏去四肢，也是用胰酶消化15分钟左右，然后用含FBS的培养液终止，一般酶与培养液的比例为1:2.之后一只胎鼠接种到一个大皿中。

褚cell

不知道大哥验证过没啊！建议谁能把做的MEF细胞照片展示一下，这样大家交流一下怎么才能做得好看并纯化MEF细胞。

dongxin

7 y" i( N8 c5 p; A
" l. E, L2 Y0 \* \. {5 y取12.5d—13.5d的小鼠胚胎，将孕鼠断颈处死；取出子宫，将含有胚胎的子宫置于干净的100-mm培养皿中，将子宫用PBS清洗三次，去除血迹；分离胚胎，去掉小鼠的头部、肝部、四肢；剪碎，0.05%胰酶消化；用 MEF培液终止并吹打组织块；用70um滤器过滤；离心，一般1个胚可培养一个35-mm培养皿。供参考，祝好运！
: S& e4 X6 [% Y' q) G  I- Q

irise1006

ppcl2 发表于 2010-5-8 01:07 , B5 P- u; a6 R% r. C
回复 6# qgjin
! w9 f- x* A* U  TFeeder一般用E12.5或E13.5，最迟不超过E14.5，俺取的MEF都是去头，掐尾，去四肢，内脏全去 ...

1 I9 |8 P! K4 V0 k! D! c9 }
是这样，但胰酶消化时间要根据你买的厂家，这个掌握好，别消化过！

irise1006

13.5较好！

qwch1988

回复 w1986725 的帖子
; I  w: u9 ^( k1 ~' L9 r& m' d" @; }8 Z4 }; k
好像一般都用胶原酶Ⅳ