培养大鼠MSC有一个多月了，遇到些问题，希望高手能帮着看看（附图）

illidancui

谢谢大家，估计是老化了。5 H$ F: n) V( J# W
做次percoll离心的看看效果。呵呵。
8 w6 g/ j& i# b期待 茶水 帅哥的总结。

meirongwan

最好用DMEMF12作培养基,胰酶消化时间五分钟左右时间快是细胞原代贴的不紧培养5-7天弃去上清用PBS洗二三遍再用新鲜培养根据融合达80才可传代

wsrz

楼上是说首次换洗时间太短了么？有文献里说是三天再换的，不过我做的密度挺大的（一只老鼠做2瓶），这样会不 ...
! N" _8 j3 ^. [# lillidancui 发表于 2010-6-1 09:05

  j* G$ b# c7 a. i
  m% ]8 u, I# X- [4 _2 r0 N$ m2 M1 ]7 M1 J5 @  O
    我看过别人讨论的，一侧股骨(大鼠)可装一瓶（50ml），以2×10^5/cm2的密度培养。

zx19851985

回复 12# 君子兰 # y1 w! Y3 @+ j! r+ @. \
# _/ [5 w7 j8 b3 C
* ~; Y3 f* f. \4 N
    变胖变圆是老化的一种，我的就这样了，还不晓得什么原因

feifei105

你好，我培养兔子的骨髓干有段时间了，但一直用密度梯度离心，效果很好。我不建议你用全贴壁法，不纯。经验就是细胞密度很关键，要不很容易老化。还有你一定要诱导鉴定其分化能力，不能只看染色。再有就是血清问题，要用进口的。

stefan

看各位大虾很头疼啊，我也准备养细胞了，头疼啊

yzc820215

我现在养的大鼠的MSC也是这个情况，都是在消化后出现的细胞变大变粗的情况，我感觉主要还是细胞接种的密度如果过低就会出现细胞摊开的情况，还有就是有没有可能是大鼠来源的问题（这个是我猜测的情况）。

tingwuyu

应该是细胞老化了，我也发生过这种情况，可以尝试换个批号的血清看看。

illidancui

本来以为这个帖子沉了呢。+ i4 c  E6 ]- e
之后我做过percoll离心的，同样的血清，效果好多了。可能全骨髓法获得好看的MSC确实有些困难，还望能做出来的高手指教。还有就是密度，有文献说mMSC低密度下会向RS-1或2型转变，但低密度细胞又会铺的很开，那形态上又如何区分这两个亚型细胞也很难说清，个人一直感觉很矛盾。也许可能大鼠种属根本就没有这些亚型的分类，还望见教。