请教：有关神经干细胞条件培养基的问题

dingyx2009

刚开始做干细胞的实验，看了一些文献，培养神经干细胞的无血清培养基，有人用：DF12+N2 1%+BFGF20ng/ml+EGF20ng/ml；1 x, e' i2 S. {: S7 U
或DF12+ B27 2%+BFGF20ng/ml+EGF20ng/ml；
; \' k+ F0 f- C8 F4 e0 X! j或DF12+N2 1%＋B27 1%+BFGF20ng/ml+EGF20ng/ml。
, m1 e* H' v9 Q( S9 K) X. E. G3 Q1 q2 @$ o
就特别想知道对N2和或B27的选择依据是什么？它们在神经干细胞的生长发育过程中所扮演的角色有什么异同？

待鹤

参考这篇文献 该文献比较了几种不同的基础培养基和辅剂的组合。发现在Neuralbasal+B27或者DMEM/F12+BIT9500中细胞扩增最好。# j7 q. d: j% t

xfyang2007123

有文献说，B27包含N2的所有成分，所以只用B27即可。而还有文献说原代培养用B27，传代用N2较好。

dingyx2009

回复 2# 待鹤 # r8 r7 u; k1 J: o# l

5 Q' ?1 F5 j" e万分感谢，很不错的一篇文献。

dingyx2009

回复 3# xfyang2007123 & M1 q$ |4 L3 Q1 @- J; o" v2 o( u

3 p% r' C$ \  ^9 N' A2 L6 T* q当时N2和B27都订了，试试你说的方法。学习了。

cortex

B27成份比N2复杂，B27包括：Biotin，L-Carnitine，Cholesterol，Corticosterone，Ethanolamine，D(+)-Galactose，Glutathione (reduced)，Lecithin，Linoleic Acid，nolenic Acid，Phosphatidylcholin，Progesterone，Putrescine，Retinol，Retinyl Acetate，Sodium Selenite，T3 (Triodo-I-Thyronine)，DL-α-Trocopherol (Vitamin E)，DL-α-Trocopherol Acetate，Proteins:Albumin, bovine，Catalase，Insulin，Superoxide Dismutase，Transferrin。7 x2 u% a' x. f; P. y1 h# e9 K( l& m
主要用途：血清替代品；海马神经元生长；多种CNS神经元；神经细胞基础培养基的添加剂。添加后，神经干细胞主要向脊髓神经细胞方向分化。
) S. j" A# `" ?% |- F. \- K2 nN2成份相对简单，Human Transferrin (holo)  500.00, f8 ^! a5 G+ n* x7 k- x- V- D% U' m
                       Insulin (Bovine)                500.003 H: p5 y) u/ F, t5 m
                       Progesterone                    0.63
2 Z" j% X* ]4 f                       Putrescine                         1611.00+ ^; C% a  _2 v7 R% q0 n
                       Sodium Selenite                 0.52  c+ Q# B, U+ k
看你养细胞的目的，最好添加N2，尽量不添加B27。

meirongwan

B27在神经干细胞诱导前三天用用DMEM/F12作培养基很便宜

dingyx2009

回复 6# cortex ) q( w+ p# p$ D( {. e. `- \* L$ f

; q1 q9 g  Q1 G; u- P近来培养神经干细胞即用B27，又用N2。在相差显微镜下观察，发现和以前单纯用B27培养的神经干细胞还是有区别的，B27培养的干细胞背景干净，细胞大小相对均一，而加入N2培养的干细胞，总感觉有很多的单细胞和细胞碎片。可能在我的实验我还是倾向于单用B27。

cortex

当然，这个得根据你得实验。这个很好理解，B27的成份明显比N2复杂。这不过有报道称，经B27扩增后细胞的分化潜能会下降。所以这个你也得考虑。