小鼠胚胎成纤维细胞冻存

是鸟就要去飞

用冻存盒吧，细胞悬液和冻存液混合后放在冻存盒里（我室用的是2X冻存液，冻存液配方是1:1:3=血清：DMSO：DMEM），直接放-80冰箱，如果没记错的话，一分钟降温1°C，1.5h后就可以了，要是觉得不保险就冻一夜，第二天可以转移到液氮灌中。您说的细胞复苏时会有一定比例细胞死亡的，这是正常现象。只要复苏和冻存手法正确，应该没有什么问题。建议您用明胶包被一下培养皿，这样对贴壁会有一定的帮助。

mominglily

我们一直都是-20℃ 2h，然后直接放入-80℃。需要注意的是，在-20千万不要超过2h，否则细胞死得多。冻存液一般就是：10%DMAO+90%培养液。

show0ji3

关键还是要在细胞状态最好的时候冻，这样解冻也会更好一些

zhbshi998

学习啦，谢谢各位的帮助

懵懂干细胞

现在大多数实验室都是用梯度降温最后存液氮的冻存方法，不过前些日子在网站上看到了一个细胞保存的改进方法，跟你们分享分享
. L6 N; ~; o) H$ z3 f  U[资料分享] 改进的细胞冻存方法
' d0 P  }+ L1 f6 S# x/ W我发了帖子可以去看看！

iseeyou1210

we usually freeze down the MEFs in the freezing medium (80% DMEM, 10% fcs + 10% dmso). The concentration is 3x10^6/ml. Keep in the cells in -80 ON, then transfer to LN tank for long time storage. Never get problem.

懵懂干细胞

流程跟你做的差不多。或许你可以检查一下你们冻存盒里面的异丙醇（梯度降温作用）够不够。
6 ?1 P( @) ?/ h/ F3 Z另外我给你附上一个改进的细胞冻存方法吧！# X+ \! p2 |' U5 T9 H
http://www.stemcell8.cn/thread-25325-1-1.html

hjhzhhy

不错啊

xiaodiao123

我们是4度1个小时，然后直接转到-80度过夜，最后转入液氮中。细胞效果还可以。

wangming

冻存液与冻存操作程序相互配合，冻存细胞复苏时状态都很好。冻存液：90%血清+10%DMSO（不宜过多），冻存操作程序：放入异丙醇冻存盒，直接进-80度过夜，然后进液氮长期保存。