求助关于胚胎干细胞一传代就分化，状态极为不好

枕头和书

建议楼主最好放张图上来，如果血清条件培养的话，那可能是因为血清的问题，即使大品牌的血清也会出问题，我们实验室碰到过这个问题。解决方法就是换血清替代物！- N; S, T- e, U8 [8 U% e0 J! G, k
祝好运！

w1986725

首先，我建议要找问题要从根源查起，干细胞培养液比较重要，你需要排查各个成份，包括各成份是否过期，如果你使用的是Lif,提醒你要注意lif是否过期，这个问题较为关键。其次需要实验一下你的feeder，用普通的细胞培养基就好，如果颜色照样改变，绝对是feeder的问题；再次，需要检查一下你的接种密度，是不是太密了，问题需要排查！加油！

是鸟就要去飞

首先，我建议要找问题要从根源查起，干细胞培养液比较重要，你需要排查各个成份，包括各成份是否过期，如果 ...7 O+ X& B; @; x  w+ u# A
w1986725 发表于 2010-7-15 15:02

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) a7 n( q1 K' u6 V        恩，谢谢你，Lif我们的滋养层自身能分泌，而我单独做滋养层的时候培养基第二天不会变黄，至于接种密度，我们1支15CM培养皿冻存1X2ML冻存管或2X1ML，复苏时根据试验要求密度控制的还是合适。我们在一样一样分析，谢谢你

是鸟就要去飞

建议楼主最好放张图上来，如果血清条件培养的话，那可能是因为血清的问题，即使大品牌的血清也会出问题，我 ...
$ ^* D3 z$ s; I) x4 ~; n枕头和书 发表于 2010-7-15 13:46

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    恩，血清的问题，到最后在查，先把简单的分析做了吧，如果简单的分析不出来加上血清就更难分析了

是鸟就要去飞

回复  是鸟就要去飞
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    恩，培养基都是借来的话，那你的完全培养基里面应该是血清出问题了啊。我用的 ...
; A, d; I0 f# W0 ]6 |- e" _5 q) xmaozhuxiwo1 发表于 2010-7-15 13:13

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    谢谢你，我也希望快点查出来，这时间耽误的

cortex

加没有加非必需氨基酸？β－巯基乙醇呢？
6 I( _( o! s/ x/ {/ [0 ?楼主的问题看来可能是在血清上。你与之前的血清是否是同一批次的？如果不是，重点考虑。不同批次的血清可能不同。再者，血清也有可能出问题。如果加了β－巯基乙醇之类的，好好想想，有没有算错。可能重新配一下Glu和β－巯基乙醇试试。PS一般不应该会出问题。如果这些都没问题，那你就得从细胞上着手了，是不是细胞出了什么状况？: b7 U8 ^& m9 u, ~
这个是比较花时间的，祝楼主好运！

是鸟就要去飞

加没有加非必需氨基酸？β－巯基乙醇呢？
8 d1 f4 U" H( i( x4 }楼主的问题看来可能是在血清上。你与之前的血清是否是同一批次的 ...; k8 |- ]* x: W. T$ v3 t
cortex 发表于 2010-7-15 16:29

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    我们的DMEM中含非必须氨基酸，β－巯基乙醇我在上面说了有，且我们都是按标准打印出来贴在细胞间的，配置应该没有问题。血清我也说了是测试后大批量购入的同一货号的同一批次的血清。细胞是同一种细胞，同一批冻存起来的（和之前养的好的），都存在液氮中，今天听了好多朋友的意见，十分感谢大家，待分析出结果会告送大家问题出在那的

梦想lab

我觉得培养基配方可以不变，重新购一批吗，估计问题就解决了，可能是原来的成分哪个出了问题，最常见的可能是血清

懵懂干细胞

在学习中。不过培养液等等东西最好是自己配的。