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楼主: dilal
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小分子(12kD)蛋白western blot转膜条件   [复制链接]

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小小研究员

11楼
发表于 2012-10-13 20:02 |只看该作者
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回复 daxi-fighting@1 的帖子
; }/ ]+ h- q- @% q: S- d, U& B% f: r) U4 w2 m- B7 s) @" F2 Y/ Q
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优秀会员 金话筒

12楼
发表于 2012-10-22 13:39 |只看该作者
回复 daxi-fighting@1 的帖子6 B- q7 }3 T/ v8 `
: O4 h0 i1 R. E. G' e
marker有时候很不准的,你可以早早的就把电泳停掉,转pvdf膜,压片试试,最好刚开始压整张膜,先找准位置
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13楼
发表于 2012-10-26 17:53 |只看该作者
回复 王乾 的帖子
. Q. ~4 q, h5 R: u% }* C" V0 o4 Y: E" G+ [6 H
嗯 半干转做出来了。但是条带依然不好看,可能是我处理蛋白的时候有问题。小分子量的降解了可能
' T" p* z) v) X: L) k1 ~' k
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14楼
发表于 2012-11-14 21:16 |只看该作者
选择硝酸纤维素膜时要 注意的是选择合适的孔径,20KD以上的大分子蛋白用0.45um孔径的膜, 小于20KD的话建议选择0.2um的。你的目的蛋白在12kd,应选用0.2um的。还有,我做过内参为17kd的蛋白,转膜条件为:0.25A,湿转1.5h,冰浴。效果很好,不知对你是否有帮助。
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