显微镜下怎取单个细胞？

qgjin

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* ]% {1 s/ z3 d7 d6 o* z与卵子， 受精卵， 早期胚胎的收集 差不多。常用的方法如下:
3 h/ z! |+ @9 @% @0 D1：取玻璃毛细管（取血样的那种细的-未被肝素处理的）
' k0 y0 m- a. q( o! \2：酒精灯下，火焰消毒（但不要太长，否者毛细管会弯曲-只要你不觉得不方便弯了可以）
' X7 f+ \2 e; C+ q3 h3：待凉以后，一头用手 一头用镊子夹住，在火焰（顶端）下烤靠近镊子部分，烤到柔软为止;
! `. a0 m: A4 o+ I4:  立即在火焰外用力一拉（越快尖端越细，反着相反）1 A) j( z  R8 P/ p- y( Q( y
5：根据自己需要，在拉细的部分划个印（玻璃吸管或玻璃刀等均可以）， 掰断；) y7 R  G8 l; u/ N" [$ [8 A) w* h
6：在解剖显微镜下观察，内径是否符合自己要求（稍大一点比较好，下一个步骤会使内径变小）
2 q# V/ F3 E" B# N: o0 I7：毛细管尖端需在酒精灯的火焰根部（蓝色火焰部分）烧（1-2秒？久了会被封口的）一下（关键步骤），使尖端的棱角部分钝化；
6 T6 Y5 ]* a- H. D8：按 1ml(200ul也可以）枪头——胶管（内径能套住下面过滤器的进口，7-8cm）—0.45um过滤器——胶管（内径能套住过滤器出口，40-50cm 自己怎么方便怎么来）——200ul枪头（内塞1ml注射器里推进器前段黑色部分）——毛细管   的顺序制作
4 f1 F: l% o' j初学者（或捡大量的卵或细胞）也可以用巴氏吸管（最后的200ul枪头换成 1ml枪头）代替毛细管， 刚开始不太好做，练两下就差不多了。' _0 W! K5 w% W/ C6 T3 l
以上操作 做胚胎的都懂就是不愿意写， 让我滔滔不绝一顿 承让了！
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张也行

你要做单细胞是吗？那为什么不消化呢？短时间不会影响很大的吧。
$ x1 o+ i# x% W* l& d% e: l( G你真的有必要分析每个细胞的差异吗？几个相同的细胞一起裂解做RT-qPCR不可以吗？ 只是增加体系而已呀8 F: c! I/ [: f% k
楼上说膜片钳很高级啊，只听说过，能否发帖给我们介绍一下，奖励大大的啊！呵呵

张也行

当然实在是需要机械分离单个的细胞话就拉一个针吧， 别太长，容易断。别太粗，不然分不开的。

wxiouno4

用显微镜啊,个人觉得难度大了点,听各位高人讲解

宗介

拉一根glass pipette就行了 很简单的

zhangyan813

我们实验室也在做，用的是口吸管，就是一端用做显微操作的毛细管在酒精灯下拉成更细的毛细管，另一端用灭菌的200ul的枪头含在嘴里，中间用乳胶管和滤器连接。这个刚开始的时候有点难，就是控制不了力度，但是等你完全掌握了之后就会觉得可以随心所欲，很好用的，建议你试试。

afei198520

其实只要实验室有膜片钳系统的话，取单细胞就非常容易了。
5 d. @7 g! e  }$ v一般拉制一根5MΩ左右的电极开口就刚好一个单细胞大小，在显微镜下接近细胞，
4 Q: Y6 D" z4 t轻轻一吸就能将细胞吸入到电极内，然后将电极通过软管跟注射器连接一下，4 }0 v+ \" y; S
将细胞打到灭菌EP管内就行，即方便也可以保持无菌，推荐！

afei198520

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* a0 D' E/ b  n+ q7 p; R( G8 j膜片钳主要是进行一些离子通道的研究，推荐看看刘振伟的《实用膜片钳技术》，写的比较通俗易懂，对于了解膜片钳或者入门非常有用。

jane1lee

用口吸管很方便的啊~~

张也行

回复 afei198520 的帖子3 |' G% k- N' P

* p( x/ s0 I9 S8 [* \好的  谢谢你！