如何将细胞单克隆挑下来

zoe

能否在显微镜下直接用枪头把贴壁细胞吸出来或刮下来，然后再用胰酶吹散？

cicadacjk

用玻璃巴氏管拉成细针，稍微融下头部，可以很好地在显微镜下分离克隆
; \9 w$ |7 p3 h  Q$ M! j1 m8 W, h然后用口吸管吸就可以了（胚胎操作的都会）$ l5 o% v3 L8 J
见到的其他方法都没这个精确

st_oliver

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9 u9 G7 `) V, N! n7 [& q3 O, H
, H0 M5 m. L) q" ?) j$ ]本人最近一直在挑克隆，挑的眼睛都花了，荧光的和没有荧光的都挑过。
0 `0 d2 A- {" b. [$ c有多种方法
- @' g4 @& U$ T9 u# U4 d/ Q如果你的克隆比较大，且比较稀疏，皿又比较大，想批量操作的话，可以用小的滤纸片原片，泡过胰酶的，消化，然后一个滤纸片放在一个96孔板进行扩培！4 q- e5 d+ `: X% Q7 p" v
如果你的克隆比较小，又密的话，上面的方法就不行了，我主要用吸胚管拉细了用，根据你的克隆大小拉成合适的孔径，可以先用胶原酶消化下来，取少量稀释到合适的密度，吸胚管吸出你要的克隆，可以胰酶消化，也可以暂时不消化，时间操作要快。也可以不用胶原酶消化，直接刮下克隆，吸出你的克隆，进行下一步处理。* y8 `, S$ R  K, }8 U
要挑比较纯的克隆，就看你的稀释程度和你的操作技巧了，多多练习就好了。
, ^) J, e6 d- d. x最好祝你实验顺利噢！

zoe

非常感谢各位前辈，我会尝试下，有结果了上来回报，祝各位前辈实验顺利

trl137

我们经常用的是显微操作法和稀释法。具体这样做的：
$ Q0 V* @* B0 ]; e稀释法：等细胞生长到一定密度时，传代稀释，在一个10cm培养皿中，细胞数保持在20个左右，这样等到细胞长起来后，彼此间有一定的距离，再用克隆环就可以得到了。/ \3 _  e$ l# G& Y, }* z
显微操作法：只需要把显微操作注射针的直径控制约为体细胞的大小即可，消化细胞后进行显微操作。

janeyu

如果克隆不是很密集的话，可以用在显微镜下观察，用记号笔在培养皿下点一下做个标记，然后拿到操作台里挑取，办法很土，却是可行的，我们实验室的单克隆就这么挑取的。
1 g4 O4 K2 f6 Q如果克隆长的比较密的话，建议用有限稀释法稀释到单细胞再培养克隆。

siyue13

用克隆环

BIOLOGY

体视镜下，把克隆用玻璃针管连着一段橡胶管做的口吸管吸出，胰酶消化，血清终止，种入新的皿中即可

future007

我见过两种，都是需要先在显微镜下用笔将克隆圈住。一种是用克隆杯，底部抹上凡士扣在画好的克隆处，用胰蛋白酶加到克隆杯里消化，在终止消化，最后吸出液体传代。另外一种就是直接用枪头反复划圈住的克隆的区域，用PBS轻轻地从皿的一侧冲洗。最后收集PBS液，直接传代到新的皿里，不要忘了补加细胞培养液。

jhu132llh

这个在我们大实验室其他组倒是很容易
2 N4 g) |* ]# Q0 d% D% S因为我们大实验室有做克隆的: j  \$ I. Y" [; V. c+ B
所以
) N& n7 {' V- j# |  ~4 V; ^用遗传操作系统很容易就可以将细胞克隆吸出来，极度精确