如何将细胞单克隆挑下来

zoe

能否在显微镜下直接用枪头把贴壁细胞吸出来或刮下来，然后再用胰酶吹散？

cicadacjk

用玻璃巴氏管拉成细针，稍微融下头部，可以很好地在显微镜下分离克隆
5 A* G* T2 R. c  p: y8 J! u然后用口吸管吸就可以了（胚胎操作的都会）
' Y  }4 y5 z: m6 a0 W3 v见到的其他方法都没这个精确

st_oliver

回复 zoe 的帖子. q0 `8 u. X4 s6 X; I' D: u$ Q

. h/ T  a* B: W! k0 f0 l. a本人最近一直在挑克隆，挑的眼睛都花了，荧光的和没有荧光的都挑过。
( d, l* A7 Y3 [7 E. x0 `4 H, X6 D有多种方法2 s! U  j* N* H2 ?
如果你的克隆比较大，且比较稀疏，皿又比较大，想批量操作的话，可以用小的滤纸片原片，泡过胰酶的，消化，然后一个滤纸片放在一个96孔板进行扩培！9 B* s3 P8 I* s/ J: `1 e* p6 s
如果你的克隆比较小，又密的话，上面的方法就不行了，我主要用吸胚管拉细了用，根据你的克隆大小拉成合适的孔径，可以先用胶原酶消化下来，取少量稀释到合适的密度，吸胚管吸出你要的克隆，可以胰酶消化，也可以暂时不消化，时间操作要快。也可以不用胶原酶消化，直接刮下克隆，吸出你的克隆，进行下一步处理。- R* w( o! i" R- O7 }5 F
要挑比较纯的克隆，就看你的稀释程度和你的操作技巧了，多多练习就好了。
; T3 P/ v5 v: M4 ^+ ^* B最好祝你实验顺利噢！

zoe

非常感谢各位前辈，我会尝试下，有结果了上来回报，祝各位前辈实验顺利

trl137

我们经常用的是显微操作法和稀释法。具体这样做的：. x" ~$ Y5 z: r8 @8 A4 j, y$ Y
稀释法：等细胞生长到一定密度时，传代稀释，在一个10cm培养皿中，细胞数保持在20个左右，这样等到细胞长起来后，彼此间有一定的距离，再用克隆环就可以得到了。
- N# X0 Y+ R4 L/ i8 G显微操作法：只需要把显微操作注射针的直径控制约为体细胞的大小即可，消化细胞后进行显微操作。

janeyu

如果克隆不是很密集的话，可以用在显微镜下观察，用记号笔在培养皿下点一下做个标记，然后拿到操作台里挑取，办法很土，却是可行的，我们实验室的单克隆就这么挑取的。
2 Q4 k* Z& l2 Z: g7 B1 H3 Z% C; j$ A如果克隆长的比较密的话，建议用有限稀释法稀释到单细胞再培养克隆。

siyue13

用克隆环

BIOLOGY

体视镜下，把克隆用玻璃针管连着一段橡胶管做的口吸管吸出，胰酶消化，血清终止，种入新的皿中即可

future007

我见过两种，都是需要先在显微镜下用笔将克隆圈住。一种是用克隆杯，底部抹上凡士扣在画好的克隆处，用胰蛋白酶加到克隆杯里消化，在终止消化，最后吸出液体传代。另外一种就是直接用枪头反复划圈住的克隆的区域，用PBS轻轻地从皿的一侧冲洗。最后收集PBS液，直接传代到新的皿里，不要忘了补加细胞培养液。

jhu132llh

这个在我们大实验室其他组倒是很容易9 q6 J1 m, l5 F
因为我们大实验室有做克隆的
. X! w) J  ~2 w3 E0 s+ h所以$ Y6 x6 B$ y/ C( b" z" z1 J
用遗传操作系统很容易就可以将细胞克隆吸出来，极度精确