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chocho 21:58:20
. D# u, ~/ L: `用抗BrdU单克隆抗体(Sigma,B-2531)进行ABC免疫细胞化学染色;简要过程如下:(1)4N HCl,室温,10min;(2)0.3% H-2O-2,室温,5min;(3)正常羊血清,室温,1h(不冲洗);(4)1∶1 500兔抗BrdU单克隆抗体,4℃,湿盒,24h;(5)1∶200生物素化羊抗兔IgG抗体,4℃,湿盒,4h;(6)1∶100 ABC复合物,4℃,湿盒,4h;(7)用葡萄糖氧化酶-二氨基联苯胺-硫酸镍铵(GDN)法呈色5min;以上各步骤前后均用0.01mol/L PBS(pH7.35)漂洗3×10min;常规脱水、透明、封片。染色结果用Olympus BH-2显微镜观察并摄片。本实验用0.01mol/L PBS或正常羊血清替代第一抗体作为阴性对照。 - l* f+ p9 W8 ]' ?1 G9 Q$ M
chocho 21:58:31
7 o. l/ n6 j" Q& k# `这个是做的大鼠
# O# Y2 K2 h" \/ z7 Uchocho 22:01:41
9 j! v* [8 }) w5 u) i不知道你用的brdu和brdu单抗的生产厂家是哪家?
7 C+ I& U- O$ X2 J9 P3 r当年,我用了国内boster的brdu和brdu单抗,郁闷了3月没有做出来,全部换成sigma的以后,立即出来了,有时候,试剂的选择也很重要。
! y9 y7 p! { Pchocho 22:01:54 ' C/ v! q( @# x
有人说 抗体很重要
% r' W0 z2 Z! T" a4 schocho 22:05:02 % f, _: u1 `; b! }4 k* v. u
免疫组化处理过程中核膜破裂,DNA溢出等原因,染色部分可能并不是定位于核,而出现胞质深染的可能
* b8 i+ F+ @) }; A4 M3 T$ w |
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