关于N2B27培养基德配置

随风的天使

请教大家，在胚胎干细胞培养时使用N2B27，如何配置培养基，请大侠指教！谢谢！

深海寂寞鱼

to 随风的天使 ：
9 c( d* I0 Z; P/ t
6 C! @% y% |! G9 \     N2 (100x)  5ml/支, B27 (50x) 10ml/支, 直接加入到500ml的基础培养基里（比如，DMEM/F12）就可以了。
* H2 S; g9 D2 n% J; w& [' g+ }6 |2 d/ C6 [( K; u8 E
     这样就是通常文献中所说的，1% N2 and 2% B27。: ^+ Q3 `4 _5 A( ^4 G
0 q* W$ a) C  r1 J# F
     希望我说明白了。

随风的天使

回复 深海寂寞鱼 的帖子
  Q0 q( n( i; v  }/ Q, Y4 C, h" c6 |8 l; F! ]8 M% f( C, M, I% L
谢谢你，我看很多文献还要加胰岛素等等很多东西，如果培养胚胎干细胞它只是临时的代替血清吗？其余的成分是否需要改变呀？谢谢你！

深海寂寞鱼

随风的天使 发表于 2011-1-13 09:36 5 m  G, B' h- J* |! J
回复 深海寂寞鱼 的帖子9 I- d% k8 ?$ y

( Y- C  ^: h3 \/ V- u3 M1 D& ?% z谢谢你，我看很多文献还要加胰岛素等等很多东西，如果培养胚胎干细胞它只是临时的 ...

7 |8 ~1 n& {6 I0 |: e
to 随风的天使：
+ H8 b% q5 y, y3 U2 u- b: K* m# K% l: `+ P3 ~: W) q4 o8 g
    B27和N2就是用来替代血清的。血清的成分十分复杂，而B27和N2的成份是完全清楚的。" ~/ F+ b: Q; b- s
% ]2 @9 Z5 C% J# E5 P* s2 ^
    有关B27和N2的具体成份，请你参看论坛里的这个帖子：http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... 2B%B3%C9%B7%D6.html
' U4 j7 o" D* j* G8 o: W& I: m  A% o! O0 V' g; |. m6 G) A& Z! R
    这样你也就可以知道，其实B27和N2里面是有胰岛素的。% k4 t! ^7 B4 J0 }
) W. f* ~0 H  o" N# E/ w8 _! r6 X1 J
    我不知道你具体看的哪篇文献。你注意一下它是在加B27和N2以后又加了胰岛素吗？! C8 ~3 K5 X' _: S; o" x: s

; Z4 Y! o+ i$ b% [4 T$ j8 I    如果是这样的话，那么它就是为了提高培养基里胰岛素的浓度。这样或许可以促进细胞的增殖。3 z3 A+ R& u5 L2 @0 s( Q& L' \
: W$ V* Y- q8 \& j; q1 D/ N9 u" `
     当然也可能它是有选择性的加了B27里面的一些成份，所以加了胰岛素。
$ @6 h4 u0 X  G! k. w7 q9 V# C8 X3 ]
6 z) I+ p3 X% x0 Z( h' _     多比较几篇文献，你或许就能发现规律。8 a. G3 N& ^/ R+ D" \: V3 i

( s9 F6 {+ U# \8 O2 O' J     如果还有不明白的，欢迎继续讨论。

cicadacjk

如果你是按照Austin Smith他们的配方，则应该是6 m& U( X! f5 D0 g5 s7 u
1/2 DMEM/F12 1/2 Neurobasal- G$ S3 D2 w( J! v8 K& G$ q
+0.5%N2 +1% B27
2 d0 b5 J  X  y/ e# e& x这里是他们实验室的protocol
4 g5 K5 f4 I- ^6 W0 Y) {( H我自己试验用Knockout DMEM/F12养，问题也不大$ ?8 L, P- X, f) ]3 E) {
0 E" c8 ]3 P% @0 Y" n" [! ?# r( I

深海寂寞鱼

那你完全可以用他们实验室的配方。 Austin Smith的实验室的东西可信度很高。3 Y+ p! V& U- D- ^
. G# N! Q$ G% s1 A6 r5 z
你完全用Knockout DMEM/F12应该没问题。" s$ W% i/ s. s: M6 s; C! S1 U
* [5 I* Z" I" ]) T' c
你注意他把N2和B27的浓度减半了。% N; A2 O8 S. L5 v$ Z! T8 Z' w; n

3 i/ l6 l3 x7 ^7 w我觉得你就按你的方法做。只要实验结果是好的。 你发文章的时候就按你的方法写就行了。

安静的折腾

没有加bovine serum albumin fraction V吗
3 r  n; ]  R' x9 n/ L* q

weddy2009

N2B27 (200ml)  
$ x) B8 A% u  }, m7 L7 L8 QMix 100 ml DMEM/F12,
3 ]" `2 Q, Y( V% s100 ml Neurobasal medium,
3 ~6 a* L; T6 K( y1 ml N2 stock, 2 ml B27 supplement, - v6 r6 @' ~, Y2 |7 S; G
1 ml Glutamine, 200 µl β-Mercaptoethanol.4 G; p8 ]/ W* B4 {
我们实验室的protocol，很好用的

微笑ci

回复 weddy2009 的帖子! [2 n) v1 W6 P3 s4 X0 X

8 r6 d7 M% k: a" q# p/ \你好，请问这个培养基是用来养hES 的吗？我怎么觉得像神经分化用的呢？

weddy2009

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' \$ ]! \4 W* Q6 d
5 i- o* x' t8 x2 _% m+ M楼上问的是N2B27的配方啊，我就指的是该配方，用来培养mES时的基础培养液