求台盼蓝染色照片

luyoutian

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' }4 n; E5 P- P1 Q. k
7 Q( [4 ~8 ^7 e计数是计圆形亮点的为细胞，死细胞一半不发亮~这个很容易看; Q6 B. x+ |2 H9 Z( Q0 i
计数可以先拍照让然后再计数，但拍照和显微镜下看的细胞还是略有不同的
' |" W1 J0 D* D  p2 K  }( L建议还是显微镜下计数

aminhair

通常认为细胞膜丧失完整性，细胞即可被认为已经死亡。台盼蓝(Trypan Blue)是检测细胞膜完整性最常用的生物染色试剂。健康的正常细胞能够排斥台盼蓝，而死亡的细胞，膜的完整性丧失，通透性增加，细胞可被台盼蓝染成蓝色。依据此原理，细胞经台盼蓝染色后，可通过显微镜，直接镜下计数或拍照后计数，实现对细胞存活率比较精确的定量分析。2.台盼蓝染色 , j/ P- B/ e. y- a+ Y2 j* L4 c( c( _
    吸取100微升细胞悬液到EP管内，加入台盼蓝染色液100微升，轻轻吹打混匀，3-5分钟(染色时间不宜过长)后滴板计数。  
0 a. C5 u& w9 E; l- `# q, U2 |2 m    3.细胞存活率分析
9 ?# E0 b1 p4 ]/ _! C! j    吸取适量加有台盼蓝染色液的细胞悬液，滴加血细胞计数板计数。于大方格内分别计数细胞总数和蓝染细胞数。 - s8 _; j5 f  R* {
    细胞存活率＝(细胞总数－蓝色细胞数)/细胞总数X100%。 9 L4 b  ^4 P& p& \
    注意事项
  e3 e' m4 y2 M5 c- o1 |    配置时需要滤除菌，取用时最好在超净台内进行，以免微生物污染。  
/ K! c9 \6 K/ u' e" A3 W" J, y    染色试剂具有潜在的致癌性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
4 ^7 T1 u3 u! h  J2 y* |

xuehu20

tangyvhuang 发表于 2011-1-18 20:35 ! b. Z* L7 y+ e4 D4 G7 U' Y
基本上都是用0.4%的，染液与细胞液1:1混匀，
2 ?/ \8 T& u5 c  V& G( {死细胞的细胞膜是破裂的，台盼蓝可以进入细胞进入使细胞核着色 ...

4 p( f: E- w7 R: [请问染色后多久观察合适？
" g4 X8 K0 o* N3 j( O

xuehu20

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; J! A* g* D3 a0 x( Y) w+ Y0 o, U; j3 @/ v: h2 `) m
都记，细胞存活率=活细胞数/总细胞数，即图中亮细胞/（亮细胞+染色细胞）

zerollx

回复 lh_kitty 的帖子+ J6 O7 K6 V; ~- Q4 I' u

: w- v) z) ~2 V8 A# B! r一般染多久后观察呢？

deron

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8 C  ~/ ?* _+ {1 t" U$ @- N
) F0 q" h$ j  m- n+ o说法很多，时间长了以后部分活细胞也会因死亡而被染色。. b8 M' F& B2 P9 R- p6 ]
我是30s后开始观察——染色速度很快，而且活细胞也不是那么容易挂——5min的时间是可以接受的。$ g! x& ?8 N5 b
最好还是拍照观察，既可以保护眼睛，又便于统计保证结果

luyoutian

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) A8 ?- P. |0 Q) ^( P. Z. O, x4 q: m. @1 k' Y6 T5 @8 Y9 I, \
一般没有要求染色时间，细胞与染色液充分混匀后，即可点样计数

lh_kitty

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& D1 t! N+ W' ?' e' d" \8 x
5 I" E% L- [7 I) \+ c一般论坛里讲3分钟内观察' l. @' J$ K6 V; e9 B

Scarlett

如果有很多细胞碎片会干扰细胞计数，怎么办呢？只看形态进行排除吗？

Tonypan

一般我加上去过不到1min就看，时间长了都变蓝色了