求台盼蓝染色照片

luyoutian

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' }; _  p9 g$ H! M
2 P3 |  v& i4 }& n计数是计圆形亮点的为细胞，死细胞一半不发亮~这个很容易看
. i" c2 s% f5 h1 `' @7 `计数可以先拍照让然后再计数，但拍照和显微镜下看的细胞还是略有不同的
1 B) R, t% v+ h- t- a/ p建议还是显微镜下计数

aminhair

通常认为细胞膜丧失完整性，细胞即可被认为已经死亡。台盼蓝(Trypan Blue)是检测细胞膜完整性最常用的生物染色试剂。健康的正常细胞能够排斥台盼蓝，而死亡的细胞，膜的完整性丧失，通透性增加，细胞可被台盼蓝染成蓝色。依据此原理，细胞经台盼蓝染色后，可通过显微镜，直接镜下计数或拍照后计数，实现对细胞存活率比较精确的定量分析。2.台盼蓝染色 6 K3 ]6 L+ r: l. b7 G: C5 L
    吸取100微升细胞悬液到EP管内，加入台盼蓝染色液100微升，轻轻吹打混匀，3-5分钟(染色时间不宜过长)后滴板计数。  
* p, W0 Y1 f1 M    3.细胞存活率分析6 R. ?( B. Q* e% c4 m8 D+ E; j) u
    吸取适量加有台盼蓝染色液的细胞悬液，滴加血细胞计数板计数。于大方格内分别计数细胞总数和蓝染细胞数。 ( v7 i& I7 K& X0 G$ D( B( A
    细胞存活率＝(细胞总数－蓝色细胞数)/细胞总数X100%。
, s; C0 T4 t- H& t  O' L) a5 s3 @    注意事项
- Q2 l5 m& V: F    配置时需要滤除菌，取用时最好在超净台内进行，以免微生物污染。  7 J$ [4 n# D7 A9 u& R
    染色试剂具有潜在的致癌性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 3 _7 N7 j, R% L/ @" ~1 O& M

xuehu20

tangyvhuang 发表于 2011-1-18 20:35
( Q6 P0 n1 @# p0 U" T基本上都是用0.4%的，染液与细胞液1:1混匀，5 z5 z- B, E3 ?! C- w% Z3 R! y
死细胞的细胞膜是破裂的，台盼蓝可以进入细胞进入使细胞核着色 ...

6 @9 r' l% m2 g请问染色后多久观察合适？+ L9 N* ^) Q3 |# s' N6 X0 s

xuehu20

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3 M0 B) k2 l5 E6 w5 j- b, ]* V, {2 s" x
都记，细胞存活率=活细胞数/总细胞数，即图中亮细胞/（亮细胞+染色细胞）

zerollx

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" D% r) h# Z* U6 k; D
6 d. E1 W/ _( w3 T* ]一般染多久后观察呢？

deron

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, I, Z* ~5 {; Q& `* t
, B6 s* Y  j: l6 C说法很多，时间长了以后部分活细胞也会因死亡而被染色。$ O+ O5 B% N9 R1 S( u7 P' ~; K
我是30s后开始观察——染色速度很快，而且活细胞也不是那么容易挂——5min的时间是可以接受的。  a0 U7 z4 |  ]8 b
最好还是拍照观察，既可以保护眼睛，又便于统计保证结果

luyoutian

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9 S* d8 U1 T+ v; Y
一般没有要求染色时间，细胞与染色液充分混匀后，即可点样计数

lh_kitty

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- l, y8 K7 D8 s9 e
! F# j- V1 f# {3 F; u% i: f: _* h: Q! P一般论坛里讲3分钟内观察
3 f. M( H+ _2 k( O" v" W

Scarlett

如果有很多细胞碎片会干扰细胞计数，怎么办呢？只看形态进行排除吗？

Tonypan

一般我加上去过不到1min就看，时间长了都变蓝色了