请问MSC从梭形变化到扁平状是分化了还是老化了？怎样让其长期保持在梭形状态？

hailanlanyj

我也有同感，细胞现在大部分成扁平宽大的了，不过我没有加任何因子

open1230

最初时是纺锤形的，但随着传代次数增多，细胞渐渐变得不规则！

xiao6tao

同意楼上但是：MSC其实是生活在一个低氧的微环境,1%-7%左右，这个浓度和常压下相比，低氧可以延缓其衰老，延长寿命。
5 H1 m7 t/ K: Z+ [: g9 e9 P! U我们一般在常压下培养MSC，所以会出现过早衰老，甚至发生转化。

寒小溪

我的也是  传代的没有原代梭了  1 我觉得不要给予刺激很重要   原代条件怎么样就怎么样  换液传代条件都不要变化   比如原代没加那传代以后也不要加了   刚开始用什么瓶子以后还用什么瓶子    总之  前后给予同样的条件   2传代消化很重要   时间五分钟不要太长 不要离心2 Y2 M: ^+ g# w; _- n
: z! j7 [0 o# I0 f% ~

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寒小溪

不好意思没说清楚   加的是因子   原代加传代换液也加  原代没加 传代换液也不加哈

fengxuan

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0 N# H. `' }8 A9 P8 _' E$ E1 p7 y; `9 E9 D% C0 F$ q
你养的MSC 第几代开始变得？

yunshi503

看来 复制性衰老是个大问题 对干细胞的体外培养

daviehe

大家传代消化细胞后不离心直接培养吗？困惑！

一一

干细胞老化表现：+ x# b" i; G$ y4 x% ]9 E
①细胞胞浆内特别是在核区附近出现黑色颗粒，表示细胞开始出现老化；' ]% ~  j9 d6 z
②细胞胞浆内出现空泡，则表明该细胞已老化或者已经开始分化（在全部细胞中出现少数老化细胞是正常的）；
! v+ H; I* D2 Y$ X( C. r- k' T③细胞立体感逐渐消失，细胞间的间隔不清，部分细胞扁平状，细胞的形状趋向多样；* J: _+ v, p9 V% h7 d& Y( d
④贴壁性减退，出现一些漂浮的细胞；
7 G  _1 N0 U5 O3 c( y/ d+ e* L⑤部分分泌强的细胞分泌物增多，细胞表面会比较脏；8 z! @& z7 d+ Z' c) {
⑥细胞增殖速度明显下降，分裂相的细胞明显减少。
+ H5 M' F. ?( v. m预防：
4 A0 Q1 I: y; ~; C8 |①合适的接种密度，有些细胞需要一定的接触，通过分泌因子，进行增殖，当过于稀疏，增殖会缓慢，出现老化；' k3 w% s3 `( Z9 D. x3 w0 }! G
②传代汇合度：过晚传代，细胞出现接触抑制，活力下降，贴壁慢，增殖慢，出现老化；
) D" o; Z# f/ z6 P③合适的血清和培养基，这个就不用说了吧
! h0 Y$ ?6 L7 H# w: i④必要的因子：如bFGF，保持梭形，还有抗氧化的物质 如维C；
2 ^3 T1 o6 z" N/ |+ y一旦细胞增殖慢，就会容易出现老化，一个细胞的老化会分泌很多东西对其生长环境影响，导致出现老化现象。& j) _- k& c% F, ]0 e+ Y  n

; F4 g6 Q: s4 I3 J- B$ a

一一

培养体系应该始终如一，不能换液时不加，培养加。消化是否离心，是根据你加的胰酶量，还有是否含EDTA，如果加的胰酶量比较大如1 ml左右，还有EDTA，我建议还是要离得，如果细胞比较娇贵，那就低转速，时间可稍微延长，我们都是 1000 rpm/min ，5 min。比如你的消化下来液体比较多，也就是在离心管里液面较高，就应适当加长时间，而减小转速。