请问MSC从梭形变化到扁平状是分化了还是老化了？怎样让其长期保持在梭形状态？

hailanlanyj

我也有同感，细胞现在大部分成扁平宽大的了，不过我没有加任何因子

open1230

最初时是纺锤形的，但随着传代次数增多，细胞渐渐变得不规则！

xiao6tao

同意楼上但是：MSC其实是生活在一个低氧的微环境,1%-7%左右，这个浓度和常压下相比，低氧可以延缓其衰老，延长寿命。
& \* Z2 U& L+ \9 c0 o, V8 M我们一般在常压下培养MSC，所以会出现过早衰老，甚至发生转化。

寒小溪

我的也是  传代的没有原代梭了  1 我觉得不要给予刺激很重要   原代条件怎么样就怎么样  换液传代条件都不要变化   比如原代没加那传代以后也不要加了   刚开始用什么瓶子以后还用什么瓶子    总之  前后给予同样的条件   2传代消化很重要   时间五分钟不要太长 不要离心
. X' H& u" U' Y% m8 s" v6 [6 `. }
3 G: Q0 A2 I. d1 R- h* l

; s7 J8 T- Z4 {9 G% m

寒小溪

不好意思没说清楚   加的是因子   原代加传代换液也加  原代没加 传代换液也不加哈

fengxuan

回复 boo1019 的帖子7 v1 n- h% U  Z5 q% r5 @. d
! E3 o/ r4 f. E0 T2 ]
你养的MSC 第几代开始变得？

yunshi503

看来 复制性衰老是个大问题 对干细胞的体外培养

daviehe

大家传代消化细胞后不离心直接培养吗？困惑！

一一

干细胞老化表现：
1 F6 ~, n- ?; u% I( n①细胞胞浆内特别是在核区附近出现黑色颗粒，表示细胞开始出现老化；
  h# p, ^4 m' d7 `0 p' u# B, Y②细胞胞浆内出现空泡，则表明该细胞已老化或者已经开始分化（在全部细胞中出现少数老化细胞是正常的）；) \8 B6 m- c( p) g
③细胞立体感逐渐消失，细胞间的间隔不清，部分细胞扁平状，细胞的形状趋向多样；+ y& g1 j" u0 m) l/ c
④贴壁性减退，出现一些漂浮的细胞；
3 M* ^" L$ t0 V⑤部分分泌强的细胞分泌物增多，细胞表面会比较脏；; Q2 s) ?# E5 [' j
⑥细胞增殖速度明显下降，分裂相的细胞明显减少。
! q" D' Q, j" _4 \! Q1 J预防：  I" H: S, [# C1 ^) N1 ^
①合适的接种密度，有些细胞需要一定的接触，通过分泌因子，进行增殖，当过于稀疏，增殖会缓慢，出现老化；
- L9 S4 x# L* s8 }& t8 t: ?②传代汇合度：过晚传代，细胞出现接触抑制，活力下降，贴壁慢，增殖慢，出现老化；
* M3 s' J6 J* z! ~4 I% k0 q( {③合适的血清和培养基，这个就不用说了吧
: j4 V6 D/ @) m/ M7 c④必要的因子：如bFGF，保持梭形，还有抗氧化的物质 如维C；9 ~8 X, \( K8 Y7 }9 t( _" l
一旦细胞增殖慢，就会容易出现老化，一个细胞的老化会分泌很多东西对其生长环境影响，导致出现老化现象。
( T+ z; l  Y$ w) B9 A( z, f
) e5 ^' o. l& D! h6 C! `+ H

一一

培养体系应该始终如一，不能换液时不加，培养加。消化是否离心，是根据你加的胰酶量，还有是否含EDTA，如果加的胰酶量比较大如1 ml左右，还有EDTA，我建议还是要离得，如果细胞比较娇贵，那就低转速，时间可稍微延长，我们都是 1000 rpm/min ，5 min。比如你的消化下来液体比较多，也就是在离心管里液面较高，就应适当加长时间，而减小转速。