请教有关皮肤成纤维细胞培养

sailboat

打算做皮肤成纤维细胞培养（原代），看有的文献说需要用胶原酶 有的说不需要，很想得到答案
; c( C, ~4 D/ ^/ p0 G还有，看到胶原酶还有分型，代表什么意思呢？分型是什么意思？都可以用吗？
% [, H, ~. e7 {$ D5 l1 c如果用胶原酶的话，消化浓度是多少？
# Z' V( i8 k. D5 D. Y2 E9 r最好能系统些
/ v2 k1 G: e# R( ~. ]拜托各位达人了

tangyvhuang

sailboat 发表于 2011-2-23 17:05
! }! a! O% s0 i% s9 b( }打算做皮肤成纤维细胞培养（原代），看有的文献说需要用胶原酶 有的说不需要，很想得到答案
3 w; ^) O( c$ h- k, L" y& ~$ G还有，看到胶原 ...

: g' V7 @" I: e/ J这个我们以前做的都是组织块贴壁的方法，酶消化好像是用胰酶消化的，37度30分钟，没有用到胶原酶，对于胶原酶的分型讨论比较多了，个人比较推荐II型胶原酶的。主要是这个对于细胞没有伤害，消化时间长点没关系，要是胰酶的话消化时间过长的话细胞都破损了。

luwei8157

皮肤真皮成纤维细胞过去用胰酶是因为实验室条件不好，胶原酶比较贵。
( k8 A: b3 `2 a7 m1 h9 p  Q真表皮分离，用dispase酶4度冷消化16h 一般可以将真表皮分开，镊子可以剥离。
0 q3 ~2 w4 p' b组织块法比较传统，就不介绍了。) M" B5 @$ U2 D) J/ x) r
或者酶消化法，用325U/ml 1型胶原酶消化被剪碎的真皮组织，消化1h左右，然后加入培养液吹打 100目过滤，离心 培养。

fish_zbw1985

分离组织中成纤维细胞用组织贴壁法足矣，等的时间长一点细胞都从组织周围爬出来了。酶法消化用胰蛋白酶就可以了，如果觉得0.25%的浓度对细胞损伤过大可以选择0.05%的胰蛋白酶消化。胶原酶没有试过，比较贵吧

sailboat

用dispase酶4度冷消化16h 一般可以将真表皮分开，镊子可以剥离
. ^% v3 ?8 j. R
! {0 ?7 U9 ^9 X& ?) p& s3 _7 V7 p请问 可以这直接分开吗？dispase酶消化的作用呢？不会消化下一种吗？

sniper

0.5%TE + EDTA，消化能力就很强了。不过要看做社么物种，如果山羊的话0.5%TE，而小鼠0.25%TE就行
2 l" p' ~, \2 Y

OBGYNob

我看过有关文献说用胰酶就好，但是本人使用该方法之后没有成功，伤心中....难道真的要用胶原酶？

runsong

用组织块法吧，我们这里用此法从牛耳分离的成纤维细胞状态挺好的，筛单克隆，做核移植都没啥问题。
, r% C* ~0 B7 H7 w9 J: x4 b前体是细胞要用GIBICO血清养，而且不能换。

pheebs

Dispase 很贵的啊！！！！！！！！！1

receiver1

用Dispase分离表皮和真皮，然后真皮组织块培养法获得成纤维细胞。这一方案最可行。6 ]6 n+ Z3 g3 V# w

: ~  _& {2 [' z当然Dispase有点贵，但是实验室必备的，因为这种酶的作用比较温和，不像胰酶那样剧烈，一般不会对细胞造成致命的伤害。