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1 }5 }& h1 ]! R6 d$ p' A目录:
5 g# i' F" O8 w6 Y+ H' [5 I* [! F8 w一、体外培养的概念" K3 H: w, }, l' U6 Z2 c3 N. M0 ?* h7 _
二、体外培养技术的发展历史
9 W2 u# o' T6 ~7 h$ P0 s(一)体外培养技术的创立7 Y5 h2 V( G- D
(二)体外培养技术的发展. z1 a. S1 d3 @7 {0 S/ T$ K
(三)我国体外培养工作的发展情况
6 T' {% y: I3 w( E3 ~三、体外培养技术的主要类别2 k: @' c1 K6 [0 X: q) c2 ?
四、体外培养技术的应用
2 m' G8 y& M9 Y+ o: y$ b(一)在组织学与胚胎学以及细胞生物学领域的应用$ h$ b X- v( x
(二)在肿瘤学方面的应用
0 ?! i+ P) |0 i; E, p; G(三)在微生物学领域的应用6 x' O! }* K# a3 L; M
(四)在免疫学方面的应用6 j' i9 M3 C2 C
(五)在药理学领域的应用
5 s! s& {4 J. h1 S0 u p(六)动物细胞与微生物大规模培养技术在生产实践上的应用
+ u( d* a1 F3 P, t8 M(七)在现代医学领域的应用
2 u+ ^; h6 y* X3 q(八)植物组织细胞培养技术的应用3 a8 Q5 S! H7 H% v2 |7 i8 U5 ^
五、对体外培养技术的评价- u0 N; P4 [! @$ ~% L# v
第一部分体外培养的基本原理与技术! h$ ]4 C3 D7 |: P- Z8 T0 E
第一章从体内生存环境到体外生长条件
- S$ _+ `1 w9 S- V4 C第一节体内细胞生存的营养条件 r; Y# g, [, T
一、水
6 s1 O {- L Y' E: A1 E二、无机盐类
0 L; {8 ?6 X; C* o5 [- f$ h$ C三、葡萄糖* X, D4 E4 w( X; x3 y& p5 f, z3 J* U: v
四、维生素0 y7 s5 M# h2 t# D! A3 T3 ?
五、氨基酸* q9 S0 q+ n3 A2 S+ Z4 }3 e
第二节体内细胞生存的其它条件) z7 Z* ?$ U3 [9 E& b9 B
一、温度5 ^4 H. C9 |4 D2 m" S H& |6 B
二、氧和酸碱度
' m6 `) z6 `3 e7 F三、体液渗透压
8 D. J C5 h- V四、细胞之间的相互联系3 {4 g: i1 M, ~" \( I. \
第三节体外生长大环境 v7 T# W5 K% e E
一、体外培养实验室0 a- k" o% c+ K% `) a
二、体外培养的设备和器具
: u0 S' O2 z/ V! Q! c9 {3 x, T* V(一)大型设备和仪器1 h& `! J1 _! y# t4 U
(二)培养器具. c }0 W8 c3 w- ~7 m
第四节培养用液
6 X; \: k, _9 `# l. I* ?一、水与平衡盐溶液
6 T- Q1 w& T& c/ K% T/ o6 K(一)水与缓冲液0 n8 Q# _; G1 ~+ P
(二)生理盐水与平衡盐溶液, b P- w. O9 Q/ @( ]9 C/ {5 T! a: f
二、培养液
) i" @- d/ G# R0 }6 F(一)天然培养基
/ g, P" U. Y& C(二)合成培养基
4 G4 q( p$ c" y(三)无血清培养基
* r! D! W/ V) x5 x9 K# H* C8 e三、体外培养的其它常用液' T4 A( G8 }0 d! O6 Z. d {- p" |) S
(一)其它常用液的类型
# X/ v0 B" g& s3 l(二)其它常用液的配制
5 M, V# h- |! g第五节细胞在体外生长的其它条件) C0 G3 U K6 ~2 n6 J6 Q
一、无污染的气、液相环境
/ _, ]& r2 Q- T; r0 `二、温度
& a$ ` P. V: Y8 q" ~) S& w4 q6 \8 U, J三、生长基质1 N* Q2 s$ U9 T! h- H
第六节清洗和消毒( J+ w7 ]4 I7 h7 t: J3 V
一、培养用具的清洗' y2 E6 ?* o7 C
(一)玻璃器皿的清洗* K7 _, w* T) `3 `
(二)胶塞和塑料用品的清洗, c5 A* Y: i* C) k
(三)清洗后物品的包装+ z# H0 }2 P" K& H5 v
二、培养用品的消毒和灭菌
( R" x- ~+ _; b- q0 I(一)物理方法; m7 u$ @: }9 U1 @
(二)化学方法消毒
' t% R2 ^# Q2 Q第二章体外培养的基本方法和过程
" B9 R- v) a. [) ?第一节原代培养6 H$ s9 p4 c- b N2 E- O4 t
一、原代培养的过程! ]( C' P7 [& e. h# I8 [* L
(一)取材及培养材料的制备; Q9 O6 K( M9 s; l8 k
(二)分离(散)细胞的方法% S2 R/ `* Q$ R
(三)接种与培养过程
! A! l8 N, x/ @, g2 @(四)更换培养液
8 N& j5 H- r, n- X二、原代细胞培养方法的注意事项
+ E' ?. s4 C6 O第二节继代培养; Z L4 _) T6 @
一、原代培养物需要传代的指标% F- g" Q( b- z
二、传代的过程6 g# q: z$ \. t4 Q; _5 c; u- x
三、传代培养的注意事项" _4 {* A$ o5 ]( _
第三节体外培养的基本方法和技术- B E' `9 ^8 d x2 Z, V. p+ {
一、悬滴培养法
3 g0 O$ e* q9 n(一)Maximow双盖片悬滴培养法
8 S) N" G9 p( W6 _; u: Q(二)改良的植块悬滴培养法: \2 t/ I& c g2 C
二、培养瓶培养法2 C6 j5 p( @! p# P# Y
三、盖玻片培养法! e, @- ~: T& ?' \ w0 `2 D. K: h
四、旋转管培养法
W. b4 F2 K* R5 D7 L' A五、灌注小室培养法9 Z, D! r( t/ \, j2 v/ n1 z
六、培养板培养法% Y5 k; j- m4 z
七、二倍体细胞培养法: [. F5 L' G1 }) |! x- r8 r
八、克隆培养法* v9 X& E' [4 S [' {- h
九、中空纤维细胞培养技术- G' j3 _4 m5 t4 c, B6 k
十、微载体细胞培养法
+ g$ O: {- R6 \+ h十一、微囊培养技术: M3 f* t6 d+ b! m/ t+ _8 g
第四节培养物的冻存与复苏
. K1 G# U4 I' H一、培养物的冷冻保存与复苏原理
! V. J) i8 g+ f* I(一)冷冻速率- Q- O J( d* R" l+ i
(二)冷冻保存温度2 l- L( |; s) Z* Z% {
(三)复温速率$ h! Z U r w: J$ N/ I3 b. u
(四)冷冻保护剂( ?5 e" P% S' W) Z ]3 l
二、冷冻保存方法+ d, [# Z7 ~2 c. ]' a& X/ R9 ?* I( x
(一)非玻璃化冻存方法
M+ [. N1 e, S9 U, L(二)玻璃化冻存方法
% W7 [6 L9 U, B三、冻存细胞的复苏) D/ f3 l- D/ o9 M. \; O
(一)非玻璃化冻存细胞的复苏方法
5 p" h1 i$ N! v* p(二)玻璃化冻存细胞的复苏方法5 g3 C. i/ i6 c8 Z0 Z9 s+ C+ K/ O
第五节培养物的污染1 N. R: C8 _6 T( m2 D1 X& g
一、微生物污染的判断" [! ]5 w& v- F7 v& ?" [
(一)细菌的污染及其判断
8 f1 L$ q) x8 V, V7 v z# q& Q(二)真菌的污染及其判断6 I& W; L% u# a4 ^, [: B* x
(三)支原体的污染及其判断
, X" c: x# z: p6 x) Y5 q' } B# d( J(四)病毒的污染及其判断2 V" V9 j4 L& Q1 D$ l" {- p) F
二、污染的预防% l- t4 @: j8 w' @* Y
三、污染的排除
: e* |) B8 J( ~2 P6 h第三章体外培养物的生长生物学
/ `" v: |: \0 q# C* s第一节体外细胞培养物的生长类型5 N$ i" |6 b: e d; h% `/ t" g l
一、黏附型细胞, h( z: Z2 P5 p2 t* N3 X
(一)上皮型细胞% {1 R3 ? ]! S9 f a; e: ]2 S6 c
(二)成纤维细胞型细胞- K, Q: B0 }2 W5 P
(三)游走型细胞8 p. h; t% j5 f e' T/ A
(四)多形型细胞/ N, {5 V/ I9 J! j( r( b
二、悬浮型细胞3 g: U* U5 V0 K" A
第二节体外培养物的细胞生物学特点
( g$ i, h6 Y7 n; J+ W一、培养细胞分化状态的变化
. R5 h; D- K, [4 j( P+ X, p二、培养细胞的增殖能力; v0 Y! |# K7 i' d
三、体外培养细胞的生长过程. c' `4 c3 F& h3 ~1 d- @ W
(一)原代培养期
+ {$ q, F7 e+ g$ d4 T" _$ }(二)传代培养期* p8 q7 \ T3 R) _! ]
(三)衰退期
1 d( b0 R5 M3 j) q3 a: p$ q四、体外培养细胞的形态学9 J( C8 }) r% P! v$ a2 }" W
五、植块培养物的生长生物学% ~ J) j ~$ |" I- p
第三节影响动物细胞体外生长的因素/ @4 `% E6 V: Y; i6 l
一、营养成分与生长基质成分对细胞生长的影响
, W; |/ q7 }" x0 ?! V& c(一)血清的成分与作用8 t+ y9 N" O1 @! i( T4 S0 f% t/ t
(二)无血清培养液的设计及应用
4 {+ |/ Y! R& L(三)生长基质成分) T/ p* ~# Z! s- }7 R
二、温度条件对细胞生长的影响
5 r- z D/ f$ A* u三、气相环境对细胞生长的影响 r4 f% _: |! T) k' X
四、培养液的酸碱度对细胞生长的影响6 O8 [- Y9 W) Z$ `
五、辐射线对细胞生长的影响
. ]7 B5 v9 k/ `# n六、超声波对细胞生长的影响
; d% \! C% Q* g; M H1 J七、影响细胞生长的其它因素
0 z5 b( l6 G. o第四章细胞分离与纯化% `) L* _5 n7 y I: y- G5 y
第一节解离(散)组织制备细胞悬液过程中的细胞分离
6 E/ i3 e. [, L# E第二节利用细胞体积和密度进行分离纯化的方法
# m" g7 a2 ?+ x8 i$ h一、一步密度梯度离心法
& W" e' a) [8 v4 b& @6 h(一)血细胞的分离
' ~: q( q3 w8 W- n! t(二)玫瑰花环细胞的分离
9 P0 A( I0 ?+ A7 y) L, S. Y; e二、等密度梯度离心法+ d/ e/ h2 F0 c0 k# `# N) K
(一)连续BSA密度梯度离心法, S* ]; P% d, I' y. u
(二)非连续BSA密度梯度离心法+ D9 x) X, K& H" G5 F4 P, l0 M+ x
(三)连续Percoll密度梯度离心法; d. J$ Q$ q! F0 U9 o* i1 s7 d
(四)非连续Percoll密度梯度离心法
7 a( i1 L9 y( s三、速度沉降法* l6 f2 y. H" `, w+ K1 p. k
(一)低速离心速度沉降法+ \ R% P) U+ H& D" @+ A
(二)简单策略沉降法" L1 L3 ]4 `# a( j2 ?& w" [( f# \
(三)简单重力沉降法分离白细胞与红细胞5 v# t: D; G+ Q! q1 z. Q
(四)简单重力沉降法分离粒细胞
9 ^2 \6 j( d+ A$ k4 r' d四、离心淘析分离技术7 U. ?( d$ Z' F. `% Y
第三节根据细胞表面电荷的细胞分离方法% }' Q6 z6 t1 G+ f
一、自由流动电泳分离技术
& d! A5 y% h2 s5 i6 w* a二、密度梯度电泳分离技术
+ A; A$ h& F; e3 f" A! M第四节基于不同黏附特性的细胞分离方法! h$ ?; P: W9 H4 t! L6 y% A$ H* H
一、差速黏附处理% L1 y: n4 t7 T \' C' p8 U9 E
二、葡聚糖凝胶G10过柱法
6 P3 O7 o K6 {# Y三、羰基铁粉法
/ R. b2 W% L! p4 F/ g4 C四、尼龙毛分离法) {" R# O9 n: S/ L' k
第五节利用细胞表面标志分离纯化细胞的方法- y' s) `9 p Q
一、免疫溶解法
, [* a: q: f- l j$ F7 k+ ]- s二、盘化法
) }+ x9 i+ x; [' X& X+ b& `(一)直接法 G+ s, q j9 P) b2 f
(二)间接法
$ q" [0 |( H* F; S |三、凝集素凝集法0 d; `0 d R- Z0 e
(一)花生凝集素凝集法分离皮、髓质胸腺细胞
/ `) ^/ {0 x3 N9 Y) g(二)大豆凝集素凝集法分离T、B淋巴细胞
1 e; W3 d t$ S* Q四、玫瑰花环分离法9 q! @( b" i! l0 Y+ ]" G) h- [
(一)E玫瑰花环分离法; W- c& u, e$ C, M9 T7 Q
(二)EA玫瑰花环分离法. I Q( R$ z! } p: J* N
(三)EAC玫瑰花环分离法, \8 ]* e* }$ \4 q, ^
五、流式细胞分选术
$ s: ^/ K U/ |(一)流式细胞仪的结构和工作原理
2 m$ a+ s# Q: c9 ^( B(二)流式细胞术分选细胞; D& H; j- T6 [) c z* y6 h
六、免疫磁珠分离技术$ B+ D& e: N1 L: L7 j7 T0 _
第六节利用其它细胞学特性分离纯化细胞的方法; Y8 x# [ ^, ^) P6 J) D! T
一、反复植块法
6 R+ N6 u3 ?; d6 q, J二、有丝分裂抑制剂处理
' Y- h( {8 o: w4 }. D+ s第五章细胞系(株)、细胞克隆与细胞周期同步化
4 g! V. T. E" q( P2 G1 n2 R o第一节细胞系(株)的建立与鉴定! i' @5 l* u5 k' J$ K* E
一、基本概念/ V1 d5 ` f& @6 m2 w! v
二、建立细胞系(株)的档案: P6 C8 o$ Z; O$ k8 x5 K
三、细胞系的鉴定
& g' X& l- }; J3 k1 @(一)细胞系鉴定的内容
, W/ q3 R9 D8 b$ P$ c4 w(二)细胞系形态学的鉴定方法: j5 o) B9 N; C) E2 u7 O- o- r
(三)细胞系的染色体数目、核型及其带谱分析0 Q0 j1 T/ ]$ j4 p' d) r. ^
(四)细胞系的同工酶酶谱检测$ R6 D7 K! U# ^$ f
四、细胞系(株)的保藏; H0 ?1 c; [( @
五、国内部分已建立的细胞系或株名录( f6 x7 H7 y9 ~, {1 B
六、国内部分已建立的单克隆抗体杂交瘤系或株名录
# N2 T6 e, Z+ c; p- a# d/ ]. H七、国外部分已建立的细胞系或株名录- [5 C# v* T) p. }
第二节细胞克隆
! u2 S: C$ K2 T j w' T一、克隆培养技术
: F# o, Z. L% p4 g/ P) m8 U/ N(一)稀释铺板法. @- P: S1 @+ o! O2 n6 D
(二)饲养层克隆法
( c+ M; u5 ?4 o5 y3 d(三)胶原膜板或血纤维蛋白膜层板克隆法
/ N) b! ^( h) T(四)琼脂克隆法% b0 C- F, e+ n( _0 I3 J8 C: J
(五)在琼脂基底上用甲基纤维素克隆化
5 j+ k, z# E/ Y" X0 b+ Y3 t9 O二、影响克隆形成率的因素
G3 y$ c+ R$ N" Z. n+ _三、克隆的分离2 A6 P& i8 R: J! S( w$ n7 R
第三节细胞周期与细胞同步化- m' U. s- D( s, U" P! P
一、细胞周期
0 J9 ?% O" {: ~4 W二、细胞同步化) |+ _# {$ u4 x
(一)各期细胞的分离' j' W9 ~ m% ]6 D
(二)细胞分裂相同步化法" R$ p+ Y1 N7 {6 n
第六章器官培养
1 a5 Z* `$ m: l1 K第一节器官培养技术概论
% t, c' _/ y# h9 L+ i一、器官培养技术的基本要点3 \4 f- K- B. V0 @- P- t6 i& v
二、器官培养技术的发展简史! {' P1 ^$ y; E. e
三、器官培养的基本原则
: C6 [6 @) |8 L8 o; O) h(一)养分的供应与取材0 E1 q( r3 {& J4 |
(二)抑制细胞迁移/ W7 n; S1 y4 s& w/ M2 ^
四、对器官培养技术的评价
, Y; @, }$ H2 I/ T- u% a D( }五、培养器官的生存环境及影响因素
7 ~1 Y" K6 b4 E3 Z8 }. c. p(一)培养器官的生存条件及其影响
, A7 O9 m/ a6 f$ r3 f" c(二)培养器官的内在因素及其影响
+ }) }" \6 g9 ~第二节器官培养的基本方法. n2 y' ]4 Y6 o, C6 B1 C) Z3 u
一、表玻璃器官培养法
3 m! }; u- ]: {二、琼脂凝胶培养法(Wolff器官培养法)
' B& M/ H$ |, P% l: h三、悬浮培养法' F% y9 h6 k7 t3 f: S" V E* z
四、直接漂浮培养法
/ T. E5 c! b' {/ }/ C8 z2 V- N* Z五、擦镜纸培养法
0 ]) [' |6 B( [* y2 @! _# Z0 k六、金属格栅器官培养法
: R1 J/ m+ E3 N0 g2 o1 l七、琼脂小岛器官培养法
2 D O$ D& W- Q% Q八、陈氏滤纸虹吸器官培养法
8 y1 X, W2 d( M( P [8 V九、灌注式器官培养法
6 }( Q( f' N! W+ ~十、旋转管培养法
, ?, g: N# ?' E, P5 I十一、摇摆式器官培养法3 h5 E5 s2 {% b6 m$ O: ~: l1 S
十二、器官灌注系统
+ V8 |- p8 t5 F! z1 f7 B6 d十三、鸡胚尿囊绒膜培养法' V; Y( O$ r, m3 f& ~/ t1 _
十四、早期鸡胚胚盘培养法5 N6 R1 f! L9 l( U3 ?
第三节器官培养各论5 j. P# ^% L6 C6 l+ G
一、胚胎肢芽的器官培养+ P9 G% I! F7 s& C' A6 e
(一)胚胎肢芽的血浆凝块器官培养方法
# i: q4 _3 v, X4 ?7 `9 R6 F% ?8 C(二)胚胎肢芽的琼脂凝胶培养法
; P8 |* J, D" W" f二、胚胎性腺的器官培养
# [9 [4 T( F7 v8 H3 x; L% {: u三、软骨与骨的器官培养
' v5 |% J/ J1 U7 M- ~; ~. D(一)软骨的器官培养
9 i+ [% r) G, ] v3 B# Z e* u(二)骨的器官培养
% H9 R, j3 {) ?5 f四、神经组织的器官培养7 H" @' \* @3 e4 i$ a3 z4 y; W1 B$ i
五、牙胚的器官培养* E B. u) ^! g, r
(一)Trowell培养法培养牙胚器官
" d+ \3 D8 g) u(二)悬浮培养法培养牙胚器官
, N% o$ r4 T2 r3 |2 k1 y M六、腭板的器官培养
3 b9 Z- h2 N- n( l( b4 s8 G l/ r2 _(一)腭板器官的静式培养法0 a: K# H# X0 f4 E
(二)腭板器官的转动培养法2 R) G- q6 o3 Q G* q6 o
七、毛囊的器官培养
0 G* j7 v& ?+ M$ ^* X八、血管的器官培养) W/ f! Z7 Q0 ]" F) f( c$ Y; A
(一)血管的悬浮孵育法器官培养
+ K* M h1 ?: e" e$ y" ~(二)血管的琼脂孔器官培养法+ q- ~ v+ R; V2 }1 q
九、肝脏的器官培养
7 m: b* I/ G1 b9 m4 ^十、小梁网的器官培养
4 o- N* p, X( V! h( `十一、人胃肠黏膜的器官培养. ^( Q" z" S' p* S( V
十二、胚胎器官的上皮与间充质植块的联合培养: j a5 I p. }, e3 Z
十三、肿瘤侵袭研究中的器官培养
6 R) \7 }5 ]+ f! J/ }; e8 ](一)肿瘤细胞与靶器官植块的制备5 d' K a: Z: X
(二)肿瘤细胞与器官植块几种联合培养模型
2 ^+ C. |. S+ d第四节全胚胎培养
% S- K3 ]; P* K& E! ?- U一、植入前胚胎培养
) B9 r7 e8 {5 X2 I& Z二、植入后胚胎培养4 U# p$ h- a% Y5 C
第五节器官培养的应用
' g1 Q2 V4 Q+ E- ]% k6 A一、器官培养中的形态发生研究" F- ~$ X" A9 Q! O
二、器官培养与发育分化研究
( C& j+ h' r+ |; I(一)外分泌腺的发育分化9 o) C7 W, D, j2 b9 o" u
(二)内分泌腺的发育分化" E8 E& f; {& s) B" Z
(三)性腺及前列腺的发育分化. Z( j( _' f, }" _6 T" T$ T
(四)神经组织的发育分化
5 p7 p) x0 R4 `& l5 Z4 `(五)各组织细胞间的相互作用对器官分化的影响
/ N2 C/ t4 h' q5 W: j三、体外培养整个胚胎的生长发育/ L9 \2 E% ~9 K# Y1 X2 X7 Y
四、胚胎致畸作用研究
) W4 c, D" j4 m! O' U0 B% M五、器官的功能及其代谢研究2 B" R" d3 j: U
六、器官移植中的应用
6 J/ |& }# s: f$ g& M9 k(一)器官保存1 f2 J3 L" f7 u* d) r
(二)降低免疫原性
4 M" n& }, D e$ g+ I七、器官培养与肿瘤侵袭研究* V; q( ]1 ?) J
第七章培养物的观察检测方法/ ^; \4 M" A: ^$ b; g; T* U v& l
第一节活细胞的观察检测方法
; W& c" x" P& A3 v+ T/ P0 v2 S$ N! ~一、相差显微镜观察培养物的形态结构( S7 V- a9 ^. `" r! W0 r6 X
(一)相差显微镜
* f. V; f7 D5 u5 o+ `, x' Y(二)用相差显微镜观察活细胞的方法
* u2 ~/ \/ ~# M4 w4 g* O+ `" R# L6 k(三)活细胞的动态观察与缩时电影
% N: L% e) k: @3 \- \二、细胞计数法
' q# O! `$ L4 ?) C三、细胞生长曲线1 s- _# y' @0 ]% f2 L: ~; q1 ?
四、体外活体染色观察与活体染料1 j% [" g$ |( O, Y
五、活细胞的染料排除检测法
' Q# ^% m! N5 N' |2 a六、细胞增殖活性测定的3HTdR掺入法( i$ ~& _, J6 }4 J! W8 @* X
七、细胞活力测定的MTT比色法, G- V3 U7 g: l
第二节普通染色观察
! E4 \ O; V0 M+ p* ?. _8 s! W+ }" t一、HE染色法
$ F8 [9 t H! }& `9 ]5 J3 D( ~二、吉姆萨染色法
- U; _% V, N/ Y4 m5 u三、载坡片处理方法8 T: l! C1 ?( P! e( s
第三节细胞化学技术: ^* P; J C+ W$ f# p& t
一、酸性磷酸酶/ W! N. P# g& Y7 s- Y
二、葡萄糖6磷酸酶
6 s7 e* K( ^( @. u1 d# d; q4 A* A三、琥珀酸脱氢酶0 B1 l" X# F0 B1 L! j8 c. x
四、DNA与RNA的吖啶橙荧光染色法
7 k7 C7 |0 `/ F5 J y' y五、DNA的富尔根(Feulgen)染色法" M7 g4 j2 n# T5 l
第四节免疫细胞化学技术4 |. h- E5 c0 D6 ?& W6 Z" R' w2 D/ w1 ]
一、常用免疫细胞化学技术原理3 E$ ]9 A6 n6 u/ Y. c
二、常用的显色标记物
; f/ ^4 r; ?2 w. W' J(一)辣根过氧化物酶
, A9 J( G- x# w( A& P(二)碱性磷酸酶! Q, Z1 {: K6 I4 B
(三)荧光素
* d7 }: y8 j- x, t6 G(四)胶体金与免疫金银技术( [3 t B- i6 Z2 s2 N8 C) ^8 S
三、免疫细胞化学方法及标记物的选择
" R; u/ F1 \4 i: j% G0 l* `四、免疫细胞化学的一般问题' J$ K) f5 S# x) x3 t
五、免疫细胞化学染色的典型程序
: U0 d1 A6 t r* V4 q! k0 j4 R(一)免疫酶间接法# g+ X7 {# l4 @* q7 O
(二)免疫荧光LSAB法/ A. ^8 k9 A$ I
(三)PAP法1 ~+ ?- M% q" I5 j! Y C
(四)SPA胶体金银法
/ s' X& b; B8 f第五节原位杂交技术
2 E' i' w+ w1 q( O- g/ E一、探针与标记物的选择
2 g' R+ o) p# ^/ Q1 [* i5 m" `二、原位杂交技术主要实验材料9 ?3 z- W" ]6 ~6 L) I: a
三、杂交) x. X3 F2 @8 R2 ?& A, z; z
四、显示标记物
* _7 a6 D) B7 E- p五、设立对照
: L* l# h; q: ~: s4 R- f- z! ?7 R( i第六节电子显微镜技术
/ k/ E. o- q3 y, q/ y; x9 d一、超薄切片技术
' q4 T- q- k. I% N. v9 x8 p1 z& V$ O(一)对培养物的预处理& I, w1 t4 U( E: w3 y( L' @9 b) ^/ b! ~
(二)标本制备
) X* x* D2 M8 j; L二、电镜免疫细胞化学技术9 }5 C( B+ x0 t6 G) O& Q
(一)显示细胞表面抗原
+ v1 s1 q- I) u(二)显示细胞内抗原
% W2 D7 X8 h/ j2 E( _三、其它电镜技术简介% f% w4 K/ D) G% Q Z: V' t( Y
(一)扫描电镜技术; J" a8 i5 o: V- ~( l9 g, }( O
(二)冷冻蚀刻复型技术
0 ]6 i7 ^$ `9 J$ v) H第二部分动物基本组织的体外培养. Y4 [ Z" R( B1 t
第八章上皮组织的体外培养
1 \ Y, R6 B$ G: E第一节上皮组织体外培养技术概论3 @( r5 s0 R- M1 ^+ s
一、在体生长与体外培养的上皮组织的基本特点- d' K* d, p# e, l. ~6 @" z6 T% c
(一)上皮组织的形态结构* Q# v0 I7 F+ g( s! N! S; E# [
(二)上皮细胞的极性
, K# G) u, `7 U& C; C(三)上皮细胞间的连接, z1 }; ~: K( q5 t4 p
二、体外培养的上皮组织细胞的生长生物学0 A7 y' i& i2 c3 R2 x; n
(一)体外培养上皮细胞的形态结构. L& ^6 K- z! F) R5 V1 c( i5 ]
(二)体外培养上皮组织的生长与增殖特征8 ]# e) Y# Q' R- l4 w8 p% p
三、体外培养上皮组织细胞的观察与检测5 |* p1 e+ i! k' l& n# p9 y
(一)一般形态学观察" k$ |9 j! N8 l& Z! K2 H' m& z
(二)组织化学与免疫组织化学观察与检测9 D/ ~& v( W4 Z4 Z+ K' @7 d
第二节呼吸系统有关的上皮细胞培养- x. R, m9 u1 Y- a& _4 x
一、呼吸道导气部上皮细胞的体外培养
% d# a" [# m8 s/ {% l- C二、呼吸道导气部上皮分泌细胞的悬浮培养7 ]1 c1 P! P- K3 n
三、Ⅱ型肺泡细胞的培养. n% h5 E6 Q' y0 |) L9 T
四、鼻咽上皮细胞的体外培养
6 I& K2 @: v1 i7 ~第三节消化系统有关的上皮细胞培养
& g, h/ [6 W/ H, q8 ~/ x. e3 W% X一、食管黏膜上皮细胞的培养
& J0 x; X0 C+ l+ q二、胃黏膜上皮细胞的培养
. a. [; L i, _# j" e* ]3 C三、肠黏膜上皮细胞的培养
8 ~% R2 b. [% p3 q四、胆囊和肝外胆管上皮细胞的培养
1 E+ d8 T% Z5 ~* o' k* Q第四节腺上皮细胞的体外培养' J8 `# ~: O1 s4 {8 g
一、唾液腺上皮细胞的培养
7 k) G0 t8 B& P% O3 U% W7 l$ r' k二、乳腺上皮细胞的培养
/ _# ]% ?/ x! z" D(一)乳腺上皮细胞原代培养的建立和维持, r: A# ?0 Y7 R+ I: K, ?
(二)乳腺上皮细胞的悬浮培养
7 b% w# l) G9 B1 F, ^+ l(三)乳腺上皮细胞在EHS基质上的培养+ e* n8 w. p y! N5 ^* j- r
(四)乳腺上皮细胞的其它培养方法6 P( u c' R* d ] m: H% H
(五)乳腺上皮细胞培养中的有关问题
: z* r" x- e/ O2 \) S$ {第五节表皮细胞的体外培养
7 ]0 V x& V. K$ P2 Y/ n& q一、表皮角质形成细胞的饲养层细胞培养法
d6 r0 O7 g$ X' D0 f% @* Q3 M1 j二、角质形成细胞的复合培养法 p: ?% {9 |& e5 ]
(一)在人去表皮真皮上培养角质形成细胞
) a. S% `, D8 g( L1 `7 t u(二)在真皮替代物上培养角质形成细胞7 _9 G6 J* a0 Z. y
三、表皮黑(色)素细胞的培养" Q$ v L; b2 d4 q( @4 T- k
四、表皮郎格汉斯细胞的培养
, l/ [ j5 {1 C, L1 ~5 N( d第六节血管内皮细胞的体外培养9 r9 W9 M" [, n) H3 \
一、猪主动脉内皮细胞的培养" u$ c; J1 i8 ?4 E1 ?
二、免主动脉内皮细胞的体外培养) ^. Y; l3 J6 O ]3 p
三、人脐静脉内皮细胞的培养$ X- v5 N& g9 J8 r: F
四、大鼠主动脉内皮细胞的培养
7 ]! w4 S; g$ i9 d3 q$ r五、滤膜培养法培养血管内皮细胞, Z5 Y8 b4 \; v9 L
六、免脑微血管内皮细胞培养( R0 x- n5 f, P- x) ^2 l
七、大鼠肺微血管内皮细胞的培养
% r4 E" q* u6 b, ]第七节胸腺上皮细胞的体外培养
3 F. z# G* @$ \! b+ `第九章结缔组织的体外培养% Z2 l T6 \1 |: Y) B7 B' x
第一节结缔组织细胞的生长生物学特点与基本分离技术7 g% c0 L1 d9 M. T. G) m) M
一、结缔组织细胞的生长生物学特点
" t+ ^4 S0 e. O" G* \二、体外培养结缔组织细胞的基本分离技术
; V4 m) [8 f) {; |( ^- V/ T第二节结缔组织细胞培养各论( x4 e. u1 h( f- `9 J" J
一、成纤维细胞的体外培养9 V4 d o6 `8 e2 a" b2 o$ ?: y8 v
(一)真皮成纤维细胞的体外培养
2 l9 s& t. F3 ^6 \6 V$ [(二)人包皮成纤维细胞的无血清培养- T/ ?$ ]; M! f
(三)中国仓鼠胚胎成纤维细胞的体外培养
% r8 @3 x4 O2 Q$ ]+ b# K(四)鸡胚成纤维细胞的体外培养2 ^3 @8 U$ i6 F$ s, g
(五)人胚肺成纤维细胞的体外培养
/ L( A+ v: E" I* `4 o! L/ Z( K. _(六)小鼠肾间质成纤维细胞的体外培养2 V2 Z2 f0 [+ u8 S$ V' K
(七)眼组织成纤维细胞的体外培养3 K) \6 n5 z/ c" R2 T" p
二、巨噬细胞的体外培养) t# M' h7 ^4 f ^. o- T
(一)获取肺泡巨噬细胞的方法
! B* ?6 Y9 S' j* H; y(二)获取腹腔巨噬细胞的方法( r5 T9 ~1 L9 |! `) y9 q
(三)巨噬细胞的纯化
" o) Y* m) X0 v4 R7 ^" ?6 u2 x(四)巨噬细胞的接种和培养
% y- e- _/ N2 X. V0 J1 U- ?三、脂肪细胞的体外培养
9 d1 K& e8 {- r7 M% ?0 E(一)大鼠前脂肪细胞的原代培养6 H& R. ^; F0 N1 X- d' B% S+ J
(二)小鼠前脂肪细胞的原代培养* E U% j2 ?# [% W
四、肥大细胞的体外培养
: t! h q; K, ?5 \(一)肺肥大细胞的体外培养
) o' s `0 n1 k+ z(二)肠肥大细胞的体外培养
$ r. b2 T& T" b% f% W(三)皮肤肥大细胞的分离和短期培养 J( F1 s$ X; k
五、间充质干细胞的体外培养
" R' @9 E. w+ i, d(一)鸡胚肢芽间充质干细胞的体外培养
2 [* o! o% t0 e* H" B8 n- A0 Z" u& W1 n(二)大鼠骨髓间充质干细胞的体外培养
* C) j4 W3 Y* i Y# H(三)人骨髓间充质干细胞的体外培养8 n. v G: b+ A$ W' C5 S; f
(四)兔骨髓间充质前体细胞的体外成软骨培养
3 Y1 |7 k7 x1 P+ O: w. n第十章几种重要脏器细胞与特殊动物细胞的体外培养
' B! C( P7 p) K) _' I3 a1 v第一节眼组织细胞的体外培养
$ W4 f) A6 k- k% E# g1 K一、角膜上皮细胞和内皮细胞的体外培养
# j5 M( o0 k0 b: k* ]4 f(一)角膜上皮细胞的培养) D& u. n! n _' L
(二)角膜内皮细胞的培养
0 K2 P7 Q6 p( j二、小梁细胞的体外培养
: C# j" _& t4 ~4 G# |; S三、视网膜色素上皮细胞的体外培养7 B9 u0 Z& B9 s! n$ A+ V
四、晶状体上皮细胞的体外培养
4 m" }' ]- n" W- a6 }五、视网膜米勒细胞的体外培养
, m6 \+ H4 s9 z, q+ t( E. O1 E( l第二节骨与软骨组织的体外培养
7 v. x& j& }) I+ v \一、成骨细胞的培养
: @5 l& @' ~" B) @( W(一)骨内成骨细胞的培养. f0 O' t* V0 e3 x
(二)骨膜内成骨细胞培养 O( T4 V6 D9 H) U7 L* W* ~' g
二、破骨细胞的培养
/ o/ b& }7 d( p4 u(一)成熟破骨细胞分离细胞培养法
`5 X9 B ]- W" r8 v(二)骨髓长时间培养诱导分仑形成破骨细胞法
4 E/ Y0 _$ l0 w& P" ]' u; `三、滑膜细胞的培养
/ [5 o$ A! \' R; I+ _& {* v2 V(一)滑膜植块培养法( v" @& b/ i: ?. Y+ ?: y: b- V* m+ }
(二)分离的滑膜细胞培养法2 D' s! V- r, M- m
四、软骨细胞的培养
+ ?2 [4 y* L& [(一)关节软骨细胞的短期培养
& U$ `/ w$ b+ e2 ?; A(二)人关节软骨细胞的长期培养法5 e4 E1 P2 n2 H
第三节泌尿生殖系统有关的几种细胞培养
4 I' ^& `4 Z' n' [9 K8 v一、生精细胞的体外培养' M" K! P& K: {7 F* d3 B
二、睾丸支持细胞的培养; F- t# x5 C3 p- C, e; A% G, I
三、睾丸间质细胞的培养4 z7 L4 B0 ]9 h7 m* j& z
四、肾小管上皮细胞的培养
9 `* g" Y) \% A' @$ i五、肾小球系膜细胞的培养. J# i" @0 B' a: {% h% r2 c! I6 i+ r( B+ _
第四节几种内分泌细胞的体外培养
# ?0 T- Y% }# Q; S一、胰岛细胞的体外培养
0 Y+ j; M& `2 `, O$ [二、人垂体腺瘤细胞培养
; `2 T" F; ] F% f三、甲状腺细胞的体外培养& q7 K& @. w s" ]: _( `7 N
第五节羊水细胞的体外培养1 E1 ]. e' Z9 q/ V5 i0 x
一、羊水细胞的体外培养基本方法
& m5 Q! o: w0 J" F6 M2 J二、羊水细胞的富集培养法* S, x2 N( L* ~0 Q3 {! R
第六节胚胎干细胞的体外培养' O) q4 v- I" z5 J: [5 W# }+ Z" V: H( |
一、体外培养胚胎干细胞的技术原理0 z2 N5 P" T( ?
二、体外培养胚胎干细胞的基本过程
& M. x. F u5 h. {/ e(一)饲养层细胞的培养' u6 ?+ E2 G( K5 }% S
(二)饲养单层的制备3 | P9 Z0 @* m$ |7 T! D
(三)用于培养胚胎干细胞的条件培养基的制备
! ^' V+ k y3 @, M7 {3 S(四)胚胎干细胞的分离与培养) a; [. w$ R$ x0 W) @
(五)胚胎干细胞的冻存与复苏. T& \% y/ P+ M
三、胚胎干细胞的鉴定
! J* i! W' Q% Q/ B2 s8 }(一)碱性磷酸酶检测8 P& ]1 w( W7 W4 Q u) p
(二)核型的鉴定
; c- ^( g1 z- \4 e. R! `% X6 C& q(三)体外分化能力观察) Z/ A. p" j6 `! U6 U& w
(四)体内分化能力的观察
9 ~: |/ d" x0 J" c- u% h(五)嵌合能力的测定1 h- x& y7 C9 L7 d D: D- r
第十一章造血干细胞的检测与造血祖细胞的体外培养( j) ]7 F; _8 T4 G% Z8 D+ @
第一节概论
% C- g. k& {* k) b/ C; N一、造血干细胞的生物学特征
* K# @7 h4 \1 N(一)造血干细胞的基本特性
2 q- C8 _. _: F& }/ W(二)对造血干细胞的识别) j. j2 |- b2 U* C
(三)造血干细胞的胞龄结构
/ J# T3 P6 {( H5 R/ H9 d* z(四)造血干细胞的动力学
5 \. w% S4 ^3 j% @) F二、造血祖细胞5 ]7 d9 i/ E5 L
第二节造血干细胞的测定技术- n# ?3 w8 R. H0 K
一、CFUS的检测技术
7 |5 d2 M, x. h7 ]/ d0 c. E二、以标记染色体测定脾结节的形成
U3 F- E/ i7 x- p6 |$ a1 \3 T三、脾结节移植法测定脾结节CFUS
# N& ^0 K' B9 h6 \5 J) g( f第三节体外培养造血祖细胞的特殊实验材料
1 U8 \, @" S5 I+ {0 o一、培养用液( P1 A5 E8 ]* D" S# A+ ]9 \
二、特异性刺激因子的制备8 O, U% d( \5 ?; U7 K
(一)横纹肌条件培养液的制备: A. u Q- B6 X$ j5 G& m
(二)白细胞条件培养液, e5 L1 \% h! @. y l7 f
(三)脾细胞条件培养液9 q! {0 l* `8 O; g6 t
(四)再障病人血清的制备" B4 c# S# b* h, Y3 Z! g' M$ p
(五)胎肝细胞裂解液的制备+ `6 K D% H$ x+ q/ b$ o2 u
第四节造血祖细胞的体外富集与培养
- G0 l. J( v" B/ \/ y3 ?" p一、造血祖细胞的富集: \9 n! t6 r% X4 |& a4 h# |5 \, P
(一)单个核细胞的分离
, k7 K$ w p/ _- U8 q, o(二)CD34+细胞及其分离方法
' o' s; z1 Z9 @: n: R5 \(三)CD34+细胞的MACS免疫磁性分离方法
: d* s& @7 U k: o! `' F$ g+ X( p二、造血祖细胞的体外培养* q8 o5 @* w3 K- g# s
三、各类造血祖细胞的培养技术
9 S4 _8 X& O/ u" W. m# i(一)CFUGM的培养9 y6 K/ D6 F& ~) A8 N
(二)红系造血祖细胞的培养5 }# x* V D1 d
(三)巨核造血祖细胞的培养" N( G, _1 ?& ^
(四)混合细胞集落的培养, i* |$ R. j% J* \# r* d
(五)白血病细胞的培养
7 x+ c6 M5 \- i2 I4 A4 E(六)无血细胞体内扩散匣培养技术
8 U8 `! f, h# m第五节造血祖细胞培养技术的实际应用* b# y9 z9 B: {( `
一、正常人骨髓内各种造血祖细胞的含量测定+ X: {" k5 Y2 C/ G) ]/ C' m
二、某些血液疾病的细胞病理学4 i5 N! E. }+ } D3 Q
三、药物对造血细胞的作用研究# w6 N4 Q& k; T- _) ^5 Z
四、再生障碍性贫血的发病机制和预后以及造血干细胞移植治疗9 l ^/ j2 u: S
五、体外测定造血祖细胞辐射敏感性与全身放射敏感性反应的关系
: h1 C; H4 n# \7 {第十二章血淋巴细胞的体外培养4 k" ~2 l9 {: U; V/ `' l% z, ^
第一节各类淋巴细胞的主要特征' S. o8 _& M, ?7 A( Z
一、T淋巴细胞" v& a* I _: A6 Y
(一)T细胞的表面标志
1 U g+ c/ A( W* p: x(二)T细胞亚群及其功能! A2 l3 |* f4 d5 ~* D( t
二、B淋巴细胞
, D0 f5 a* |+ {5 k$ L, P(一)B细胞的表面标志
5 m7 F" H: V5 I(二)B细胞的亚群
, R' E, ?: g+ a* l! G三、大颗粒淋巴细胞
, ?4 @4 ~: k6 f* u) ?$ y2 ~+ {(一)NK细胞
/ o# ~( t7 B4 c! V& @ \(二)K细胞
v: R) l# P/ y7 f第二节血淋巴细胞的分离. P- v6 v/ G d. a! l2 r% {
一、单个核细胞的分离( K6 A* Y/ L3 P' J* b
二、纯淋巴细胞的制备
1 @6 a. E+ p7 X J, w" N% t% P, }(一)玻璃黏附法
. ?/ [ I* E+ |* Q( A* m2 h(二)羰基铁粉法8 g+ ~* c0 x+ I& |! \1 c2 K& M* b0 Q T
三、T细胞和B细胞的分离# ?. g. F4 F8 a Z2 G$ f" |, z7 j3 f6 J4 j
(一)T细胞花环沉降法, @9 r( i! P9 b) ?8 c8 n7 `
(二)尼龙毛柱分离法
" h. ?0 J. [, `# ~6 V四、大颗粒淋巴细胞的分离' n9 H4 g0 t6 h9 f7 U
五、荧光激活细胞分离仪分离淋巴细胞及其亚群. @+ U& L. @& U3 y; G
六、免疫磁珠法分离各种淋巴细胞及其亚群
' X9 E0 J/ W6 x( H! X第三节血淋巴细胞的体外培养方法和应用" a4 Q# V% X$ a4 d# c
一、淋巴细胞转化试验- d3 d C2 a N/ w; Q8 m$ ?
二、B细胞产生免疫球蛋白的检查/ U8 B+ u( ^/ `3 P) f
三、T细胞介导的细胞毒试验$ L) G, h6 n: z1 ?1 `
四、NK细胞毒性试验
+ C0 Z* E9 E1 ?1 l1 `五、K细胞毒性试验
7 A7 u! c( u/ H7 b/ ]8 V) r六、LAK细胞的制备' n! E( g! c- E" u& j
七、淋巴细胞的体外长期培养# t/ c! l& M$ v J, J
(一)用IL2建立T淋巴细胞克隆' a7 L; y4 u8 W( l8 N: H$ v
(二)用EB病毒转化B淋巴细胞) ?6 Z1 Q7 ] T( I
(三)用B细胞生长因子建立B淋巴细胞株
+ w. s1 l- I8 O3 Y* _6 f第十三章肌肉组织的体外培养$ C; ^& Z6 { ?5 j: ^; F
第一节肌肉组织体外培养技术概论
' {) h r8 z* [0 g0 d! Q8 ^一、肌肉组织体外培养技术的发展简史
# r; }1 L. C/ l8 G& N7 \/ z二、肌肉组织细胞培养的意义与评价
3 g) x9 i0 L7 h `5 d第二节心肌细胞的体外培养
4 d; J1 ?. b+ V+ I8 C一、心肌细胞培养的基本原理6 ^( E) h g. D( J/ t- F) G0 |1 {/ a
二、心肌细胞培养用液" M/ f: F: x0 Q5 @" A8 w" W- L
(一)常用平衡盐溶液
2 _0 J! B: y2 `8 F2 N! e t(二)心肌细胞培养液
+ q& T9 |% v0 ~$ F7 r$ \(三)其它培养用液
* i- ~+ h* \; U9 N, Q三、心肌细胞的培养方法
2 [/ p1 I/ x5 V, V$ E, O(一)心肌细胞的原代培养4 D5 M2 z t Q* `4 c& [# y- f
(二)成年动物的搏动心肌细胞的制备
4 l1 G' ^# j6 g7 I# B( y1 h(三)心肌细胞培养方法的某些发展
. N! I; [; {1 v$ g3 K四、心肌细胞培养的基本结果与观测方法
3 [2 p- m2 y" C( U5 U, }) @; l(一)一般观察
: w$ }& U Z3 Z. C(二)培养心肌细胞的形态学观察
, j' i4 }+ Z0 {! M) o! i. A; Z! P(三)心肌细胞搏动的观察
0 T# j$ q4 w8 A9 r% T* c五、培养心肌细胞的某些电生理特性
- ^8 O: v: ]5 Q7 L六、培养心肌细胞代谢的某些特点
! R T9 _2 O# w5 r% q3 ~5 ^第三节平滑肌细胞的体外培养
, i% [+ S1 I, o4 `9 x一、平滑肌细胞体外培养方法
$ U* V* Q- V3 H二、培养平滑肌细胞的结果与鉴定
0 z2 g1 j. E4 ?" ^/ X5 R" e0 K5 A: O三、影响血管平滑肌细胞增殖的因素; Q' Y8 e/ r8 {" t8 C/ } X3 ~
第四节骨骼肌细胞的体外培养9 v! ~' a T* ^
一、骨骼肌细胞培养所需主要材料! s# I( m1 z8 h( q& F( w3 x. _
二、骨骼肌细胞培养方法. r4 G& I- C# }' b$ p. e
(一)乌类骨骼肌细胞的培养
0 T% q3 A; R) \(二)啮齿类动物骨骼肌细胞原代培养方法
& N! K9 P- t: L& o( I(三)从啮齿类动物肌肉中获取高纯度肌源性细胞的新方法
, J1 @3 t; q& y. m( v8 F三、肌源性细胞系的建立
0 n: ?7 d& b; z, O+ z r第十四章神经组织的体外培养2 B2 a0 M+ ~: l& v6 D1 B- S; b
第一节神经元的体外培养
$ q( h1 a$ Z) ~4 L j: u. r3 [. C一、神经组织的植块培养法" ? [& c; R$ u/ I- x1 H
(一)概述5 @- O0 R+ p/ n9 l4 t4 ^) G; L9 Y
(二)灰质组织或神经节的体外培养
/ x \- y) o, V$ Q0 p4 e% W2 X(三)白质植块的培养
) m$ h- A* s! f: u$ I二、神经元的分离细胞培养方法8 k$ w8 U: n9 U0 `' r
(一)材料的来源
% {+ b! }5 H1 v! a0 M+ v1 x4 c7 O(二)神经元体外培养液" p0 M" { `6 c+ b' X
(三)神经元体外培养的生长基质+ Y7 z3 r6 n$ h; u+ F! S
(四)神经元的分离细胞培养过程7 g. I+ W- Y) P7 L$ P5 g
(五)神经元细胞的体外培养! j8 f- @/ @7 z
第二节神经胶质细胞的体外培养3 ]5 g2 m) J: Y Y
一、星形胶质细胞的体外培养5 W) a+ h/ G7 K2 `0 H
(一)取材的动物年龄与部位' D3 i2 n) w9 R! y9 c
(二)星形胶质细胞的体外培养方法
; y: R& ]1 U9 N# U9 O(三)星形胶质细胞的无血清限定性培养液
1 ^5 l8 x; W z1 |/ \! h(四)星形胶质细胞的形态学特征与化学标志物) P' _, o# h& I$ {% h+ e: t
二、少突胶质细胞的体外培养
- K5 ~: N3 t0 C0 U0 k9 F# B. q(一)体外纯化过程. q) t( `' m1 t0 R; _/ O( C( I' T
(二)体外培养少突胶质细胞的化学限定性培养基9 N, ?2 F* I& e! u
(三)少突胶质细胞的化学标志物
' [! }" D! u3 r* j+ o: t. w(四)少突胶质细胞的形态学特征% G! |$ y& w. _( |, B0 R) G6 N
三、施旺细胞的体外培养
: H; _) I$ p* T4 Z( H(一)施旺细胞的体外培养方法. O6 @# z& d9 F
(二)施旺细胞的无血清限定性培养基' H- D/ O, k; H5 i+ `9 P; |* l
(三)施旺细胞体外生长的形态学特征与化学标志物# E3 j$ e. Y1 \ I( p# M
四、小胶质细胞的体外培养
N% R! y a' m(一)小胶质细胞的体外培养方法 m8 U ]: p% B; t. H0 b
(二)小胶质细胞的形态学特征与鉴定
( P- Z. h( o) P, R* o1 ?五、其它神经胶质细胞的体外培养: l, [6 s0 [8 k- q& r
六、体外培养神经组织分离细胞的形态学特征比较. j: \- C9 j# J2 ?; l8 O. w! A5 z6 r
第三节各类神经组织细胞的培养方法
( u$ ` k+ q% P一、鸡胚背根节的体外培养6 \0 J9 [: J9 N, `3 \* g6 T
二、大鼠颈上神经节的体外培养
# w9 p( d0 ?9 C0 i三、大鼠小脑皮质神经元的体外培养6 H" q/ ~5 p9 |) ]- z4 K3 N1 f. t
四、大鼠星形胶质细胞的体外培养) ?. |+ t& |& l' y$ A2 _
(一)方法一：植块培养法: l% e: U& P: f% ?; y6 s
(二)方法一：分离细胞培养法/ A4 g/ Y8 n" {* Q; b( |) c1 b
五、大鼠少突胶质细胞的体外培养# U4 y' |7 B5 n; E |$ _
(一)方法一：植块培养法
2 N% D& d, r1 j. L) x(二)方法二：密度梯度离心法' g, f$ b0 ?5 {" }" I
(三)方法三：恒温摇床处理法5 G0 A4 I1 I$ h, ]7 d7 m
六、大鼠施旺细胞的体外培养; p) @+ _8 K7 }1 L: ^
(一)方法一：常规分离细胞培养法
7 d0 @/ V* e6 S* a4 r(二)方法二：免疫选择法5 V; |6 E# [3 ?7 @$ _
(三)方法三：反复植块法2 J+ K9 |5 s* l; G8 y( Y5 A1 t8 ~
七、鼠脑小胶质细胞的体外培养
3 B' i1 g' q/ N( z: R7 Q八、脊髓神经元的体外培养: t G$ h: X' U Q, q- C9 K
(一)方法一：差速黏附处理富集脊髓神经元培养法& m/ K- ?( M3 S$ B
(二)方法二：台面选淘富集脊髓前角运动神经元培养法7 h3 s( f" \( W$ _% Z
九、鼠脑神经干细胞的体外培养
3 u0 }. U3 Q+ S* }; C(一)胚胎神经干细胞的体外培养" r+ [. Y: o1 E# C& D5 _# r2 f f0 j
(二)成年脑组织内神经干细胞的体外培养
; {1 [0 L1 P. z" I7 P& Q十、大鼠胚胎几种常用脑区组织体外培养的取材# Z2 `/ I& J0 h0 U% Y1 T" C( v/ F8 ^: y
第三部分特殊类动物细胞的体外培养 C% x1 a4 i1 i5 u+ t0 V( ~1 Y
第十五章肿瘤细胞的体外培养
# u9 D% C( x: g K第一节肿瘤细胞在体内和体外的生长特性概论5 I0 n, V4 F. z8 Z1 h5 `) x& S
一、肿瘤细胞在体内生长的特征 @8 X3 s1 ?, i6 G0 @5 L) I0 E; K b5 f
二、肿瘤细胞在体外的生长生物学特性- P7 }) w) c2 L/ ^3 J, q* r
三、肿瘤细胞在体内和体外的生长特征差别
: E8 N3 m& d1 T; {# H5 h四、体外培养肿瘤细胞常用的培养基8 m, T {/ K/ B; }- W8 y& B
第二节体外培养肿瘤组织细胞的方法和技术! x7 z% ?9 C' N7 c f' @
一、肿瘤组织细胞的原代培养
) x* S* o. r5 a1 c5 z4 G- y二、肿瘤细胞的传代 V$ @% p' C( C0 ?
三、肿瘤细胞的克隆培养法1 T" ]/ R8 Y* q- T p
第三节肿瘤细胞体外生长的细胞生物学特征6 s: d! U; Z/ Z* W9 j% J) _9 f
一、肿瘤细胞体外生长的形态学与细胞学特征
$ J* M. B+ G' j' }二、肿瘤细胞的核型和异常生长特性
+ _& F+ O' I, `7 C. D(一)染色体数目及核型/ C4 p b' D$ ~# ~) b
(二)永生性
6 y( h' |4 k0 e& {0 C(三)异质性
( E1 a( z6 Z) z' m2 q8 W. J(四)动物接种成瘤性
1 c" L4 S2 \7 }4 L) m(五)非锚着生长依赖性: D4 _; {" s* S. {, s+ @
第四节已建立的肿瘤细胞系介绍
J9 q) @! e& t( Z% A$ E" f一、国内已建立的人类肿瘤细胞系介绍
3 r" E e; X% m& q7 y二、国际上已建立的人类肿瘤细胞系
0 W5 y7 A2 ?+ C' t6 f第五节部分肿瘤细胞的体外培养与建系过程
P9 t& r3 d- S6 J" D- w7 X一、人鼻咽癌细胞系(CNE2)的建立
+ i9 [! B B3 L* }$ G Q7 G8 D- \, S二、人骨肉瘤细胞系(HOS8603)的建立
) T% ^1 d1 ]+ L$ u4 z0 y5 C三、大鼠肝卵圆细胞的本外培养
! D1 N# ]$ E, Q四、人神经母细胞瘤细胞系的建立
" C3 ^1 p. c" l5 S1 i1 P五、人肺腺癌细胞系的建立: w9 P" S" \( O' P8 M' n
六、有肺巨细胞癌细胞系的建立3 J; Z0 O% L1 Z, `) I' ?6 ]
七、人肾颗粒细胞癌细胞系的建立
^0 A1 S8 F" r' ^2 P8 U$ E s# [八、人卵巢癌细胞系的建立
/ j- n/ M8 d$ d' J% \; a; i" D九、人肝癌细胞系的建立3 G( ?% }7 M) p
十、人喉腺泡型横纹肌肉瘤细胞系的建立" J! I0 g2 v0 ^+ `) u% [
十一、人恶性胸膜间皮瘤细胞系的建立/ @, G/ i2 S3 r- z2 Z6 T& W
十二、人乳腺癌细胞系(HATTORI)的建立
i2 @ n0 z% a7 q' b b# \第六节肿瘤细胞培养的应用( f4 h# K/ F& K T1 B& j
一、肿瘤细胞对组织浸润的体外研究
5 h/ Q' O1 j8 }' _' z( p) ^" u# y9 k二、人恶性肿瘤细胞的动物移植瘤研究
& y P9 v! g* S5 L* r+ t; M: B2 Z三、培养肿瘤细胞的体外分化实验
) `5 L6 g4 q# p5 F; d% o四、培养肿瘤细胞的凋亡诱导研究- C4 T* M- O$ o- v% k, {) F, N" c
第十六章病原微生物的培养' V( w5 S* T& X0 y- @( V5 X
第一节病原微生物培养技术概论
. O: i+ S3 D; l: C2 x一、病原微生物培养的基本原理" X; }8 V& g+ h" W; O) m- N
二、病原微生物培养的基本方法和技术2 l) ?. t! o9 G- k' p# j3 f
三、病原微生物培养的应用7 O8 a+ \( M2 h7 f3 Z
第二节细菌的培养
}3 a& w* [: x( d/ |. |: J1 N一、细菌培养的基本条件
9 u7 K- Z) H4 ^" @+ j6 W(一)细菌培养基* [' s) q, l2 A0 {5 x
(二)细菌生长的其它条件
6 v0 L- n& F. [5 V, t8 h3 o3 M% m! h二、细菌生长繁殖的特点
- m% @7 C8 F3 U% D& \2 i9 C三、细菌培养的基本技术0 g- P N% I0 d% r" D, j6 k! I
(一)无菌操作技术 u& g0 P6 N; V2 O/ D
(二)细菌接种技术2 t/ G+ a$ N9 V
四、细菌培养的方法
4 I" E" Q/ u2 e* U: K5 t(一)一般培养法( d! g6 E3 D3 T; Y3 q" r9 R# }
(二)二氧化碳培养法* i/ H" P" W% A4 U/ @+ U# o3 U* q
(三)厌氧培养法8 K( P6 i* j2 ]! ~; m. T% ~! p
五、各别类细菌的培养
6 d# W7 R7 L2 {(一)致病性葡萄球菌的培养
" [8 P- I' \8 c3 v(二)幽门螺旋杆菌的培养
5 D' u' O. _8 N; x- K3 Q! ^(三)结核杆菌的培养
9 R7 n0 k+ N8 P! ^2 s3 `(四)淋球菌(淋病奈瑟氏菌)的培养; ~# [5 V9 f$ c; B
第三节其它类菌的培养
' ~+ ^" V& z i. w9 \0 d& r; _; H# C0 ]一、放线菌的培养
5 w! E3 i* Q( B4 m5 `) n4 Q* F" N(一)放线菌培养的一般条件
4 a4 ?' @2 F& u* G2 R(二)放线菌培养基
! s; ^8 T5 v4 }5 F v二、真菌的培养
9 k; p( q. c* n( j; u(一)真菌培养的一般条件
1 _+ |% u* F/ O6 t(二)常见致病真菌的培养基& H5 T$ M, O6 R% d( z8 M8 [. A
三、支原体培养* t3 L9 O+ ^8 A) C$ Q1 q+ G
(一)支原体培养的一般条件* p# J3 {* C8 W, c R: R
(二)常见病原支原体的培养基0 u/ J5 z, _ L3 k' e* M
四、立克次体的培养" d# _. T: k' G, d" g' n" B5 U
(一)立克次体培养的一般条件
I7 U, y+ C8 @- g+ M6 z(二)常见病原立克次体的培养1 |% K+ Y% v1 ~4 E0 Z5 d. A( e
五、衣原体培养* O; w- Z2 w" r8 }+ b# g6 v
(一)衣原体培养的一般条件
( ?) Q7 p( ?" w0 T+ q/ d& B(二)常见的病原性衣原体的培养
5 i' {4 E& l' \# v2 H7 Z六、螺旋体的培养1 _. c/ W3 u# P& w& P7 o
(一)螺旋体培养的一般条件' N+ `6 F7 {$ [ M4 K+ T/ z* e3 ]' U
(二)钩端螺旋体培养基
, ]9 j/ ^& F* j! y L- E/ |) m(三)常见病原螺旋体的培养7 X6 { s# [8 E5 Z5 \* |
第四节病毒的培养+ x4 ~- _+ c( Y* X4 J
一、宿主细胞培养法 w" l3 x8 E$ W3 g: E+ [3 w g
二、鸡胚培养法3 j! ~/ Z0 t5 @3 _, A& t9 q- L
三、各别类宿主细胞培养法
7 N4 F- s" f& P9 e% ~4 t(一)EB病毒的培养
1 l8 }' H) {: t f) s(二)脊髓灰质炎病毒的培养; w& f3 b& f" i9 d; t/ T
(三)乙型肝炎病毒DNA转染细胞系的建立和应用
, i- h1 y5 Q! Y# ?' o6 \; E第十七章医学寄生虫的体外培养
# n- @6 e! g/ I第一节寄生虫的体外培养技术概论
; y/ o; ]" m. i( b+ v, ~. k一、寄生虫的营养与代谢特点
( i, `: \$ C5 o7 U二、寄生虫的体外培养技术类别
( ?2 l# [4 B# i) D: ~(一)寄生虫虫体培养0 I0 O+ W) E$ b3 E2 v. h! k5 e' l! l P
(二)寄生虫细胞培养
. [ Z1 r: s9 \7 m0 {4 f(三)寄生虫的体外培养常用培养基
8 X* x( ?. \4 M# [& r三、寄生虫体外培养技术的应用
0 X' S. v( G: z( d(一)在生物学研究中的应用7 B8 v$ M0 w" b# i$ x+ h
(二)在病理与免疫学研究中的应用
) x5 ]( w k, E(三)在药物学研究中的应用. F% ]7 w; \2 W* ~ Z/ Z
第二节疟原虫体外培养
1 {0 P$ t9 I4 ?$ {7 Z) V一、疟原虫红外期体外培养# Z; C1 r/ n- T8 B( S5 z/ ?4 C' }
(一)约氏疟原虫红外期的体外培养
{) c6 p2 t! H9 a7 T4 m# v(二)人疟原虫红细胞外期体外培养6 w; b6 L5 W2 b/ c* I7 b+ @+ p/ q! o9 W
二、疟原虫红内期体外培养* g8 i, w) A0 g. t
(一)体外长期连续培养
+ l/ {8 @( w/ Q2 z- Y& ~(二)同步培养法
3 C4 A1 p t- e1 W% U% z$ s8 ~(三)疟原虫冷冻保存技术. u" O/ e5 @, H$ f. \2 Y. x
三、恶性疟原虫配子体的体外培养* q; N4 d3 Q# M, [& e8 z
第三节机会性致病原虫的体外培养. a* w/ H8 g& ~ ?
一、弓形虫的体外培养$ P5 t: o/ C9 q7 V
(一)速殖子的培养方法之一：单层贴壁细胞接种培养法
I& ]/ v- A8 I7 G4 l+ E(二)速殖子的培养方法之二：悬浮细胞的接种培养法* X: I! z2 p8 [
(三)速殖子的培养方法之三：在鸡胚中种植的培养法
1 o1 W: G& e" k1 l6 w(四)包囊的培养% H" U6 E& q, V0 ]* L
(五)弓形虫的冷冻保存技术
/ J' M! B/ r: ^0 K+ x* d二、卡氏肺孢子虫体外培养
1 t/ I' |" b& K: |! W" K# b# \0 T(一)用非洲绿猴肾细胞系培养卡氏肺孢子虫
% g8 l# L% @( @, u8 @1 q# u! e(二)用胎儿肺成纤维细胞系培养卡氏肺孢子虫) n! B. w9 o* a" d
三、隐孢子虫体外培养
" u/ p! x8 X% C6 T; R, d8 l- W(一)在组织细胞内培养 F8 {5 {, R, c/ i8 ~
(二)在鸡胚中培养" [8 s3 k- a: \( ~$ ]) j
第四节日本血吸虫体外培养& T3 B# U9 t9 B% Z8 h
一、培养基及培养条件
; A) K9 Z, A" l8 p& d(一)培养基的种类
" N+ o& L7 D& F4 |( u0 W0 G(二)培养条件
# a3 A* B+ }: H( j5 M+ s二、各期培养方法) x9 o! _' d% B) M4 O6 R# Q) g2 Q
(一)尾蚴人工转变童虫体外培养8 k# r* { D+ W4 O3 E0 i- O
(二)肺期童虫体外培养+ R$ a7 a% V, c" e0 M$ O, K
(三)成虫体外培养9 D t. h8 I+ B. Z
(四)虫卵的体外培养
* |* {& D3 @' T5 E$ X K(五)毛蚴至母胞蚴的体外培养
! Q* c$ V# S5 x& j* Y(六)子胞蚴和尾蚴的体外培养
$ c. z% `" V' w' e( H% T; x* y(七)血吸虫成虫和童虫细胞的培养& x% M0 O: m) Z
第五节棘球绦虫体外培养! B. Y, `' w) k) p
一、细粒棘球绦虫的体外培养
) B- K. m/ z: v(一)囊型发育. O* l$ h2 f& s* s
(二)链体发育' V( t- v% L! N5 B. ~# F
(三)成虫体外培养
) @! u' n2 I$ @& K- [(四)细胞培养
3 p4 D2 F8 [5 x9 l& ]' u% l二、多房棘球绦虫体外培养
3 D, p+ o1 p- m(一)多房棘球绦虫虫体培养
0 E% q$ Q* B+ h(二)多房棘球绦虫细胞培养' _9 j2 I1 O* \$ ]$ ]8 S
第十八章无脊椎动物组织的体外培养4 [0 N# @/ l, F( j" k
第一节无脊椎动物细胞培养的基本方法和技术
9 n3 `$ a1 u5 t, b! F/ @! u一、体外培养无脊椎动物细胞的基本条件) f) D0 p* D! ^( j. y8 d
(一)无脊椎动物细胞培养基8 ]& k3 D& j/ e, Q' P
(二)无脊椎动物细胞常用培养基的配方
; m7 T2 ~: Q2 Q V! v(三)昆虫组织培养基的配制
$ p0 O+ E! [& ~! D(四)体外培养无脊椎动物细胞的其它条件
% T, y' ~1 X5 D二、无脊椎动物细胞的原代培养
+ M$ b& Q! R" J% v三、无脊椎动物细胞的传代培养- J5 N- |! l# t+ T6 E
四、无脊椎动物细胞的悬浮培养; g5 a3 f% X. U H+ X; b
五、培养细胞的低温保存和冷冻保存
3 ` _% P9 w. }4 w, P第二节无脊椎动物的器官培养/ w$ r; |( G: s' E
一、软体动物器官的体外培养8 J0 s7 v9 I0 F& c
二、蠊翅目昆虫的体外器官培养# Z2 x0 b5 r! N5 P
第三节无脊椎动物细胞系(株)的建立+ h& l3 c8 G* w) ~' X, j. _
一、昆虫细胞系的建立
; r: t8 x; U0 ]1 p- w(一)鳞翅目
# M0 k" M$ A' l3 V9 p(二)双翅目
$ a+ f$ O/ W. @+ e(三)蠊翅目# {& H& b$ M( w9 ^+ N; v5 L. O
二、昆虫缺陷型细胞株的建立1 e. I7 \- D# s4 Q- r
三、软体动物细胞系的建立! d N' P/ ~. R; ~- |
(一)蜗牛细胞系的建立
! C- s8 B* @0 P(二)牡蛎细胞的离体培养4 V* c& k5 z# h, G! L
四、蜱螨(扁虱)细胞系的建立
. W- l* e4 ^+ R# A7 P五、建立细胞系的注意事项5 `0 N! u- ~1 _ W( q6 E# n
第四节无脊椎动物细胞的大规模培养
' g1 P$ \; v3 ]6 Z9 E一、大规模悬浮细胞培养的添加剂
3 X) t" [* J% B二、低剪切力连续生物反应器! n* X* l1 ]5 i# q: x
三、有血清培养基扩大规模培养昆虫细胞技术, S# i3 T; }) y7 C" Q0 P/ }
(一)扩大规模培养的主要材料* y, M1 U# ~* R0 |8 M
(二)扩大规模培养方法: f( L) d* i# f* [
四、无血清培养基扩大规模培养昆虫细胞技术
3 q7 n1 x/ ~" Q6 b0 D; o第四部分体外培养技术的应用# n) o! X) E! B0 B7 e
第十九章体外培养的应用技术+ G" f8 E; v& y! n) ?
第一节细胞分化与体外诱导分化
( }# S- ~9 v. d/ I$ p, S: e- E. n一、正常细胞分化" Q. B+ C. N1 M# l' M6 e
二、EC、ES和EG细胞系
1 s6 S+ R. `, b三、ES和EG细胞培养和建系的基本技术
, D3 e" ~4 ] K2 Z& t1 u(一)饲养层细胞
) @% m$ c" x% {" o7 W+ ]2 s) l(二)胚胎细胞来源1 |. |$ w5 a: l/ [; ~1 C1 |& m. j
(三)ES和EG细胞的培养过程' g" E) X; v$ k: [7 @
(四)ES和EG细胞系特性和鉴定
; g4 ~+ D& W: h/ ^1 L四、ES细胞体外诱导分化# c! L; V2 m$ b7 [+ R6 _
(一)ES细胞体外诱导分化的意义
" Z' v- S9 ~ y' H, R. s, _ D. u(二)ES细胞体外诱导分化的基本原理
4 G4 T( n2 d A! X. v0 T! o! J V(三)ES细胞体外诱导分化的基本方法3 o9 P3 q: g! P; o
(四)ES细胞体外分化的细胞类型- U1 l# h0 T* s6 J& I! Q
五、诱导分化细胞的永生化
1 b0 u! q% b& X3 D8 q' u+ |4 K第二节细胞融合技术
; X+ B* x4 p6 Y一、病毒融合法
) z7 Y# B( x3 j/ P. O' d二、聚乙二醇诱导细胞融合法
, W; j7 X+ g3 h% u% W) D# ?4 h三、电诱导细胞融合法
- P9 I: x4 `) a/ ^- C) [) c! M G9 S第三节体外受精技术' S7 r7 r* _7 B
一、体外受精的基本实验条件; S) e2 A- f4 w9 t
(一)体外受精所需的主要仪器设备和消耗用品
1 I1 v- H4 M4 T) Y, J4 v(二)体外受精与胚胎培养环境的设备和管理) j. Z) x; x4 ^9 H: j
(三)胚胎培养液4 X/ s' D. v$ H4 x# O
二、胚胎的体外培养
! W8 ]% ?% ^ r/ g" m$ S* R8 M(一)卵母细胞的收集
1 g5 n6 i% Y* {% j(二)精子的体外获能
, x6 ] ]" Q m; l1 z0 e(三)体外受精6 y* r$ a, s2 u/ b! s% u
(四)卵裂观察及胚胎评分
6 Q* @* F3 |5 l三、胚胎移植* E- N( N$ b* B2 Q( G9 X
第四节基因转染技术与体外细胞转化
) S1 F3 Q' K6 c2 O一、基因转染技术
' [1 B! j w/ s, v(一)待转染细胞的准备) ^8 b% }1 ^2 ^9 I1 v3 u
(二)质粒DNA的纯化6 ]# M" ?. T, A5 q2 k( j
(三)基因转染的方法
+ \- g/ t& p, V! |+ r(四)转染细胞的筛选
5 Q2 y2 |: Q6 @* p二、体外细胞转化) r3 }/ m6 v0 _& q9 h
(一)细胞转化的概念与细胞转化的过程. }2 S$ c; Y) b8 u9 D
(三)诱变因素诱发培养细胞转化的程序* s6 `4 T8 d5 b D
三、转基因动物+ q8 x) f4 \ @
第五节杂交瘤技术与单克隆抗体制备技术
e9 G! y, C5 Q3 x4 N' H/ P一、杂交瘤技术6 @6 J% ]* _# f9 C
(一)B淋巴细胞杂交瘤技术的实验流程, O3 q! d, }1 U
(二)应用于杂交瘤技术中的培养用液
9 X9 z0 H! J2 U: c, E/ W: k. w0 O! C(三)杂交瘤细胞的染色体分析3 W6 {, |- Y( Q! H8 I
二、单克隆抗体7 Z* _ ~! W+ b/ ~; K$ ~' z( {
(一)单克隆抗体的概念
3 t# n# G8 v! j% T(二)单克隆抗体的鉴定) [, u2 _4 W! i+ I3 w" b `. T" B
(三)单克隆抗体的生产和提纯+ w& K! ^2 K$ ^, B
(四)单克隆抗体技术的发展' c! t. X! T3 [' a2 q% ?
第二十章动物细胞大规模培养. S$ r% }4 x* N% K1 X
第一节动物细胞培养有关的特性5 N" g) {0 k p. z4 w7 M
一、动物与微生物细胞的差别% a+ H. G8 x: {( I; R9 Y- y
二、动物细胞生长特性
" D% `" ?5 G" v1 O/ L* w第二节发酵
& t8 _, r3 y- T一、培养方法
0 D1 O/ o' p7 I& |5 J(一)贴壁培养0 F& n% b) P5 l" O$ X& K) H
(二)悬浮培养
6 `+ V" t* \ |2 U9 l% F. Z(三)固定化培养" V) T. R+ E8 [4 \6 \3 Q6 m6 h6 x
二、动物细胞培养的发酵工艺; H( c1 L, n; T+ d' u5 Y
(一)分批式培养, q/ N( u/ O* ]3 h, p& L: y% U
(二)流加式培养* u7 Q% I. z) S4 B2 g C
(三)半连续式培养+ J9 U4 h+ g7 d! j
(四)连续式培养
d& m& H# w8 `6 I. O; ?(五)灌注培养) t6 R4 L; M) b% T2 b
三、发酵工艺条件及其控制
5 R1 g: ?& Z- ~8 T( \( q* ](一)培养基
# K- L i0 e! T0 u' n9 |3 h(二)培养温度的调节控制5 @' a8 w5 A4 t, r$ A
(三)培养液酸碱度的调节控制
1 R( a2 ?; X7 {) I' j(四)溶解氧的调节控制
$ B; r' f4 i& w `, ~四、动物细胞大规模培养用生物反应器" F$ k) ~: N/ Y3 V& d9 `+ I9 e
(一)搅拌罐生物反应器- w' f& }8 C" H- Z3 X# j8 q
(二)气升式生物反应器 a ~8 d7 W# u$ n
(三)鼓泡式生物反应器+ I. o! j: G$ f u
(四)中空纤维生物反应器/ K) E( m) `+ d4 T' R
第三节动物细胞微载体培养技术
3 f0 s/ ]: q# V$ O% L8 ^一、动物细胞在微载体表面的贴壁生长机制8 }2 o; y: n4 H) x, `. q
二、微载体的主要特性
5 n5 e1 ]+ J& T2 y! [ p* r7 k6 S三、微载体的种类及其性质
* W$ D* |' z; [3 f8 B* L(一)交联葡聚糖为基质的微载体
1 e% n! Y3 U* w( e+ T(二)塑料为基质的微载体
* p+ q( {, t, q! f0 q(三)明胶/变性胶原微载体! ]! w4 \. S0 b+ h% T2 ^8 {
(四)玻璃为基质的微载体
1 L3 W8 g( l2 E3 l& c; V7 K(五)纤维素为基质微载体7 B0 F( Y4 ~- q7 L) {5 a2 b0 b
(六)液膜微载体2 N( L7 T, I+ v1 C
(七)大孔微载体
3 a# ~( p, e* n. v: E; N5 l四、微载体的选择
3 w& v2 f! P& D" n! G' c+ e第四节动物细胞大规模培养技术的应用" l* y: g. n& F: |1 c7 K4 R
一、在疫苗生产上的应用4 r% [6 U. I$ o- ?, i5 c
二、在干扰素生产上的应用+ e& B( n7 E q, n
三、在单克隆抗体生产上的应用2 J/ E( m9 T! S
四、在其它基因重组产品生产上的应用 Q' s$ T. ~0 U/ Y
第五部分植物组织细胞的培养, f. W- y! b, M
第二十一章植物组织细胞培养的基本原理与技术
0 Q6 C/ d4 ~2 i1 L第一节植物组织细胞培养技术的概念和类别# e" ?+ K6 Z8 k0 V% b+ g9 L
一、植物组织细胞培养的基本概念
' Z) O. Y$ m# m二、植物组织细胞培养技术的类别' ~; ?: q! ]: P- Q+ G$ J2 H
第二节植物组织培养技术的发展简史. W! P+ \ C& o
一、植物组织细胞培养技术的创立阶段
" p7 G; k9 j" J6 \! u" ~二、植物组织细胞培养技术的发展阶段
3 l8 [0 Z1 | Z( ~1 d/ n三、植物组织细胞培养技术的应用研究阶段
1 H' _7 w8 r% q# G" |第三节植物组织细胞培养技术概述
) z- Q! X+ B* L* f一、植物组织细胞培养的基本条件0 A7 U- ]& g8 J/ W* Y+ Q
(一)植物组织细胞培养的营养条件' u' `% h" V% r2 M/ P( R
(二)植物组织细胞培养的环境条件
$ D Z; Z; |4 c1 Q' @二、植物组织细胞培养的基本方法和技术
( e, \! E( {' A0 k1 A' Y. g) p% l1 e; a(一)植物组织细胞培养的基本方法
; L b$ t. S" O2 L4 H" D(二)植物组织细胞培养的基本技术
4 i3 o# Z* }3 S% S' `" N三、植物组织细胞培养的基本程序! F% Z9 J- J$ ^3 c. _
四、植物组织细胞培养物离体生长的基本方式3 F k' O& q+ C$ h
(一)直接芽分化的方式
& T2 w% e: i* ? S(二)通过愈伤组织形成的方式
1 ?8 k0 X$ O5 w- G+ a$ s- n(三)胚状体形成的方式
3 ^3 I& r: z& D" s2 \五、植物组织细胞培养物的鉴定$ R$ M( t n( g8 q/ z
(一)植物组织培养物的组织学观察
& w) C9 C4 f/ h( o- m8 Z; o) @ v(二)植物组织培养物的染色体观察; Z6 h7 S ? q$ |) D# e0 g
六、植物组织培养技术与动物组织培养技术的异同
* o" v' O- E7 V5 A第四节植物组织细胞离体培养时的生物学特征; k2 P3 _" \1 G( o, I" W H h
一、植物组织细胞离体培养条件下的全能性
/ |# ?3 p V( O( _% U8 n(一)植物组织细胞的全能性具有普遍性( b7 `: ?4 G8 E) T. e8 ?
(二)植物组织细胞全能性实现的途径
( S; {3 _% T6 ~- {( v二、植物组织细胞离体培养条件下的突变性' B- Y3 V) K9 g; }
(一)植物组织细胞的变异性具有广泛性) K' |1 y6 Y0 j
(二)离体培养的植物组织细胞变异机制6 ~2 B G. S& m: z# W
三、植物组织细胞离体培养条件下的类减数分裂现象
" h; x0 N, a7 ?3 R1 O7 @(一)植物组织细胞类减数分裂现象的存在
/ w) T' v+ Z( j: Z1 n5 ~9 v2 O(二)体细胞类减数分裂发生的机制/ H! Y3 H% B4 _. ^
第二十二章植物组织细胞培养各论6 Y' B- J% ]1 o# R1 T) x" V9 A. {; Z' W
第一节植物的胚胎培养
9 T! q3 } [4 \, _5 M: h2 D: C- g6 ]一、植物胚胎培养的概念# z1 C3 ]: y- y8 l8 m
二、植物的幼胚培养
# D( a/ ~/ t; x# e* F(一)幼胚培养的基本过程
o0 C* F4 \$ J) d8 M) A(二)植物幼胚培养的实例
" N; b# s& N/ R1 L三、植物的成熟胚培养
: G# `3 c0 v8 I1 \6 g% m四、植物的胚珠培养+ o1 z$ k* }9 b1 ~
(一)胚珠培养的基本过程$ G6 H' y9 z; B- |
(二)胚珠培养的实例, A+ i$ v1 M7 V! m/ `: `& c
五、子房的培养: z; X1 B( r4 V3 T
(一)子房培养的基本过程
. f3 R+ u! n5 G* a5 ](二)植物子房培养实例
8 ^$ f5 Z' f7 u9 _/ i/ I2 j2 A$ H H# L六、植物的胚乳培养
0 d8 S" ^& Y% y, x3 A; ~(一)胚乳培养的基本过程
/ k" \' R7 w S7 {(二)植物的胚乳培养实例! ^& u: c' C/ t4 Y2 l# I( D* M
第二节植物的器官培养
& R% V7 c+ \ r9 P. c1 D一、植物器官培养的概念' j" s9 B$ B1 s4 r# g' w! Y
二、离体根培养; ^, L6 D; N Y- ?5 ~3 `; @
(二)根培养的基本过程7 ~6 \' A5 G4 P p
(二)植物离体根的培养实例- H: n& O$ A$ x* Z" l5 L# Q) P% ^
三、离体茎培养% r d, ?5 ^. S) p! U+ T9 R
(一)离体茎培养的基本过程
9 b/ Q; x# k+ V; ?. A(二)植物茎尖培养的实例
3 U V; M! Q& P8 u% g8 b6 V四、离体叶培养
5 b" `- k( @2 o' T# l( ^' A- ~(一)叶培养的基本过程
8 [7 m/ O& D* i% K" k(二)叶器官培养的实例
$ i9 y& X$ T* g, W9 L五、植物花器官的培养+ y0 a( Q3 l! B. R
(一)花培养的基本过程/ e4 P G6 v0 q! k/ k2 O1 o2 O
(二)花器官培养的实例" R" b1 Y! L1 h3 N* `, \
六、植物种子和果实培养4 y, C6 l; ^. B# z% T
(一)种子和果实培养的基本过程
" E* h: P) B( `$ m& D(二)植物种子和果实培养的实例3 o0 ~' U. k. i' @0 j! M
第三节植物的组织培养& p! D+ H: b- z7 q5 G
一、植物的组织培养概念
# b/ y" T0 A( q- i3 S二、植物愈伤组织的培养
: q( m: W0 L# j3 m三、植物胚性愈伤组织的培养
# Q! D! |0 O G" }(一)植物胚性愈伤组织培养的基本过程
5 s# W/ w. }9 `/ Q(二)植物愈伤组织培养及植株再生实例! c% m- I! f$ G
第四节植物的细胞培养" s, d/ [ C0 p! Z
一、植物细胞培养的概念9 R1 x3 N! ~& j( s" _
二、植物细胞悬浮培养2 M1 O1 [; {) x" `* f5 M
(一)植物细胞悬浮培养的基本过程) V! ^1 r- X) ^1 P$ a
(二)悬浮细胞的培养实例
7 i% Z, f1 O' N: L: J三、植物的单细胞培养- W% `! H0 ?! X0 F$ F
(一)植物单细胞培养的基本过程
7 G, {% V- r3 D* `" u(二)植物单细胞培养实例
0 E" t$ l! W$ ~- _ v/ U8 T第五节植物的花药与花粉培养! X" S b2 F$ L' ~4 C: M: I: U
一、植物花药与花粉培养的概念 O! E1 L" u `# H9 ?
二、植物的花药培养; B; P8 r) o0 d2 L) q- d) N
(一)花药培养的基本过程7 o) A) E% y; E- V5 c
(二)植物花药培养实例
# b( q' E( f5 o0 v ~* t三、植物的花粉培养' @2 _" M4 u8 o* k5 A
(一)花粉培养的基本过程
0 W0 L6 W0 n5 {3 w0 O% H3 M, Q(二)植物花粉培养实例
/ i! F v' b5 l3 N9 U" K第六节植物的原生质体培养0 t0 Y- N, V% i" |% R
一、原生质体培养的概念
! C( U: p; O$ }0 D; @二、原生质体的培养; U s, g m' L1 m
(一)原生质体培养的基本过程
' D% q4 K! j) A4 [(二)原生质体培养实例8 L6 Z8 N# b* Z# Q; y) f% |! d
第二十三章植物组织细胞培养的应用! [: s% N ]9 `2 }
第一节植物组织细胞培养的应用技术9 K2 X C$ U; Z9 F. u7 f2 I- C* T
一、植物基因转移技术
$ i' i. \& e# m' g0 H& k(一)植物基因的获取; O L) W$ {3 w# w- l. v
(二)植物基因的载体- Z5 F& g! L, v
(三)植物基因的转移方法7 ^- j, r* q2 k) V/ p
(四)转基因植物的检测, H1 `/ O- O0 b2 k
(五)植物基因转移实例) \4 ?" U L1 {/ v( b
二、植物体细胞融合技术
4 I! @2 k# G( P; L; |# g0 I# b7 g(一)原生质体融合的基本方法* L9 b# l+ U- l5 t) L7 u, D
(二)原生质融合体的生长发育" i& D# |- x3 q8 y
(三)原生质体融合实例$ O" y3 O t" b3 z: w/ v
三、植物体外受精技术
- \& U( g& b( u! T. u( G四、快速繁殖植物技术9 U5 ?6 R3 S1 Y$ Z
第二节植物组织细胞培养在农业上的应用
; @% b) S) J7 m' p$ M: Z一、利用植物组织培养技术改良植物品质
/ ^5 ]4 G% Z. ]$ [/ G- {2 h1 j(一)利用植物组织培养技术进行倍性育种8 _+ Q3 y1 h# F: D2 E' [/ n1 U
(二)利用植物组织培养技术进行远缘杂交育种6 G- A# _, q/ B: B: q
(三)利用植物细胞培养技术进行突变育种
2 C& _) V/ t+ V! z3 ~! R二、利用植物组织培养技术培育脱毒植物
6 Q1 ^( e1 N) j(一)利用茎尖培养技术进行植物脱毒
; I) T. E4 A1 c(二)利用植物组织培养技术进行植株脱毒6 ]9 ?" l. P9 b4 c
(三)利用植物组织培养技术快速繁殖植物9 T0 ?/ F! y7 b& @! E+ j5 ]
三、利用植物组织培养技术保存植物种质
6 _8 Q3 M: u% b) J# p! t1 n5 Q(一)植物组织细胞超低温保存的优点
& t# l" B9 S$ F- `3 n* R(二)植物组织细胞超低温保存技术6 z1 d# N7 H# i/ Z# @
(三)植物超低温种质保存实例
- s4 n+ L+ Q4 @5 g' O; o四、利用植物组织培养技术合成人工种子2 p' b+ J9 v6 t. x6 H; @
(一)人工种子的特点4 u/ E* J3 p- t: P! N6 l5 s+ |
(二)人工种子的应用前景1 S2 `# U {6 y1 D1 R
(三)人工种子制作的基本技术0 z! E0 W- f- r2 o6 g% w" d
(四)人工种子制作实例2 [, t. k! g9 V" q" Y8 R
第三节植物组织细胞培养技术与植物产品生产
( s/ e5 ~( ]+ c5 C( t- C一、利用植物组织细胞培养技术工厂化生产试管苗
0 }" l* g5 b! ~: E& R. `+ M. j(一)用植物组织细胞培养技术建立植物的无性系
! q& ]8 ~" W9 m3 v' B6 f" U! \3 L(二)试管苗工厂化生产实例7 @8 A8 R! }) ?1 e2 v) ^( h
二、利用植物细胞大量培养技术生产植物产品, a9 f7 X' [4 q6 @. P* _5 X
(一)培养的植物组织细胞积累次生代谢物的特点. u9 ?+ u8 }% ?% r- t! X# K6 M
(二)培养的植物组织细胞积累的次生代谢物之类别! \* Q9 o+ n2 D
(三)利用植物组织细胞培养技术生产次生代谢物的方法1 _- g8 { s1 z( ~; j9 d9 K, ]
(四)利用植物组织细胞培养生产次生代谢物的实例
- p# z# K0 D# h2 z第四节利用植物细胞培养技术生产植物药
. s6 i! \/ h! A' F3 u一、利用植物细胞培养技术生产植物药的优势和不足
' E6 G/ R& s% i* n+ J Z二、利用植物组织培养技术生产的植物药的类别
- ]/ C& h9 \- V% [三、植物药物生产的主要技术
8 P: t, B1 _' I( s4 u' a(一)发状根培养技术7 Y- ]3 ~) F$ H$ t
(二)两相培养技术7 y& Y* E- |7 S) |
(三)反义技术
% K5 T9 h2 ~) {# l+ G7 I6 }3 w四、利用植物组织细胞技术生产植物药的实例- L# f0 v: }. z
五、植物药工业化生产实例
* Z2 ^/ @- z) o! i3 N/ f( ^附录
* L9 G% X% \$ J! Q附录Ⅰ无血清培养基及添加剂供应商一览表/ M& @- o! t7 w5 U9 m
附录Ⅱ水合物的等量值表
% i( g: M* l4 f/ \+ J+ \附录Ⅲt界值表
7 X+ w& j; S. x) k- q附录Ⅳ离心机转速(r/min)与相对离心力(RCF)的列线图
; e$ Q0 y0 K6 m! ]% e$ ]* k4 W# H. Y& a |
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发表于 2011-3-20 08:51
发表于 2011-3-21 11:20
