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# ~8 [9 p9 x5 K5 @: k; ?. B" c目录:
5 d( w; Q, |. ]) }- n2 v一、体外培养的概念
: m: O) s; Q" C9 j# o' A+ n二、体外培养技术的发展历史
6 C( K& F# Y5 G+ V" v& e- p(一)体外培养技术的创立4 ^1 [/ {; E `- j# [
(二)体外培养技术的发展
4 H5 o1 Q" i6 d& `(三)我国体外培养工作的发展情况
1 k. E3 s Y$ |# K三、体外培养技术的主要类别5 ]) K+ e) ?. P* z# c9 [2 [
四、体外培养技术的应用, S8 n( n- Y9 \
(一)在组织学与胚胎学以及细胞生物学领域的应用" l# f+ W# }! O/ @
(二)在肿瘤学方面的应用# _' S; O$ d; ~- }. A
(三)在微生物学领域的应用
+ T% T' k) F" J(四)在免疫学方面的应用7 E1 A1 Z( B, w& z- j( G/ b
(五)在药理学领域的应用
- k3 Z, d1 \5 q, H2 b7 `1 X(六)动物细胞与微生物大规模培养技术在生产实践上的应用8 U! j4 F/ t! Y3 s9 O; f* I
(七)在现代医学领域的应用# L5 `3 G8 [1 E1 N) U! J4 D
(八)植物组织细胞培养技术的应用% ]2 a- a! Z& u, D7 s9 N# t2 K
五、对体外培养技术的评价; I. l. P1 |5 g+ {
第一部分体外培养的基本原理与技术
" X7 I1 Q+ e7 p& ~; v第一章从体内生存环境到体外生长条件2 u5 ~) W5 L) ]2 q1 [
第一节体内细胞生存的营养条件% b3 d% O4 b! I2 a) p* `& W$ z
一、水
' y7 P5 ^( e" T- |2 Q1 `! e二、无机盐类; Y/ n H. d: a
三、葡萄糖& I5 m+ N5 g: u
四、维生素/ o( J1 P! j( M* H2 K
五、氨基酸
4 [2 f1 u4 R2 P s第二节体内细胞生存的其它条件
+ Q6 G6 J+ y' e# s3 \一、温度9 E7 Z# D( k5 o& H+ E2 g
二、氧和酸碱度
0 a6 ~0 s7 h2 s# O& P s. }% L5 ~$ a三、体液渗透压6 \$ k0 V# g8 [$ J
四、细胞之间的相互联系
$ E' U+ X% c5 G第三节体外生长大环境
( Y' c- i) f3 M6 ~一、体外培养实验室
" j- e0 M5 X* J! x4 R二、体外培养的设备和器具
& t; X2 A; Z% H+ z/ y(一)大型设备和仪器
. H* x8 `6 H+ y' A# B! U(二)培养器具+ {2 t' z; n% R8 T/ H# F& f
第四节培养用液4 U/ T+ f1 K7 {6 Y$ y
一、水与平衡盐溶液
. L l2 |. ]8 C( @: |1 g, g+ K. t+ }(一)水与缓冲液1 S6 |+ Z4 l8 r3 j. S4 T' F4 I
(二)生理盐水与平衡盐溶液' z" c6 x1 W2 O1 [4 h, C1 @
二、培养液
C5 g3 e" U' y0 p(一)天然培养基
5 N$ {) O8 g- }7 V! _$ n(二)合成培养基9 |- i8 U$ R+ h+ k% E
(三)无血清培养基
F) J8 B) `' S$ n) @# k三、体外培养的其它常用液7 ?+ a3 ^! y! v( n6 h
(一)其它常用液的类型
" _9 y9 G& g7 x' {4 m3 a: W$ E. H(二)其它常用液的配制4 r* P) U9 N3 S
第五节细胞在体外生长的其它条件
7 h: Z3 [! i* j/ H& C) v一、无污染的气、液相环境
7 _* o& @; _2 I. J二、温度4 c& o) ~- w* `% q6 J3 d$ C6 M
三、生长基质. Q$ ?9 }/ ?: \5 C# K0 w u( O" j
第六节清洗和消毒
/ V& n6 r+ H6 g/ I一、培养用具的清洗
" A! R! ^+ H+ @- Y$ M9 x" L(一)玻璃器皿的清洗; _% R* E' U/ C k+ v& s# z% y8 i u
(二)胶塞和塑料用品的清洗- W2 o6 |+ N; \; {( {
(三)清洗后物品的包装; Z# [% R4 A% p* h/ w
二、培养用品的消毒和灭菌4 u G% a- S3 H" `9 }, D) C" z
(一)物理方法6 M! |4 T. O; H8 }# a) i/ V8 Q
(二)化学方法消毒$ c8 t$ |0 v, _# y8 L
第二章体外培养的基本方法和过程. o7 d) [# ]3 A/ E _
第一节原代培养0 j% K0 \4 a0 j5 W2 L/ d
一、原代培养的过程
/ ~0 X% H6 v G(一)取材及培养材料的制备7 B7 b S! e0 i# g/ ^" ^/ r, b9 e
(二)分离(散)细胞的方法
0 n; X+ H5 w0 Q1 T! V6 a(三)接种与培养过程
0 d6 E; N- E! \! @6 L(四)更换培养液
, k+ e* E7 o+ H" z' g二、原代细胞培养方法的注意事项0 M' e, z( w& V
第二节继代培养
$ K" g. o* Y9 u1 r一、原代培养物需要传代的指标
1 t; Q+ A( l% k6 |* F二、传代的过程
. ^0 Z9 J) f0 U( \三、传代培养的注意事项% ]; @9 l& {, \+ m: z% k
第三节体外培养的基本方法和技术
8 N# S9 H. ]9 O R }- H# W3 K一、悬滴培养法
4 y% p0 C: z8 N(一)Maximow双盖片悬滴培养法* z( M2 U. H7 Y* \: t! _- [& p
(二)改良的植块悬滴培养法- r+ u) p2 U; j5 K
二、培养瓶培养法/ ~: x9 G: ]' ?1 X4 r
三、盖玻片培养法2 | b H2 ]& L6 }: @( s, P/ }
四、旋转管培养法: j" r" D5 |/ G- j1 B- [" p
五、灌注小室培养法( A5 Y2 ^* A/ f/ u
六、培养板培养法( R5 d6 d/ k8 j) z3 g1 D( f1 g
七、二倍体细胞培养法) \8 I: G. E( i. T2 {
八、克隆培养法
. k/ z2 d& p E3 a- C九、中空纤维细胞培养技术7 u" U. E( i* n9 d) O# m
十、微载体细胞培养法2 _( d3 n" m! w; r# p2 ^: L
十一、微囊培养技术/ B! C; y2 p1 m' V( w/ _8 I
第四节培养物的冻存与复苏
7 x+ G4 S6 ]' K: J; T一、培养物的冷冻保存与复苏原理
7 ]$ W, ?8 ]/ F. q(一)冷冻速率
; Z o& I! b/ n' \8 N2 u(二)冷冻保存温度2 y, G$ C; R% Y$ `/ D. K
(三)复温速率9 }4 @. V& f! y& K
(四)冷冻保护剂
) H* c% I* }' S0 T8 Y' }! l二、冷冻保存方法" _+ I" ~. b/ K! d/ \) r
(一)非玻璃化冻存方法
7 i F$ Q; Z6 M$ ?(二)玻璃化冻存方法( F9 L$ X6 l. F* l- N' p
三、冻存细胞的复苏
5 f1 Z: H6 u; B* G9 D% R(一)非玻璃化冻存细胞的复苏方法4 w [( \3 I& k0 e1 k" d5 `
(二)玻璃化冻存细胞的复苏方法
, H0 ~( u/ s1 K3 U, l( f第五节培养物的污染
+ [; C% s/ t' n: M/ s! {( w( r \一、微生物污染的判断5 g3 B# B0 v6 U+ N0 g/ T
(一)细菌的污染及其判断
8 i5 \( v& W1 V: [* X(二)真菌的污染及其判断
( z; i% b/ |3 \! R- R$ T/ F(三)支原体的污染及其判断4 }6 r8 x# b: P, |9 w
(四)病毒的污染及其判断
5 |% Y4 A7 r6 D- T8 y6 N1 q二、污染的预防
% p! g8 y7 N" Y7 d三、污染的排除
7 t5 A: z& y* \5 j& U第三章体外培养物的生长生物学
7 f& e5 ]" z+ r" X x2 ]第一节体外细胞培养物的生长类型
% ?7 r2 y; y/ L# @9 D一、黏附型细胞
% a8 |+ X' S8 F( k+ S(一)上皮型细胞; N8 Q2 K6 w* l3 y8 w( R& e: `
(二)成纤维细胞型细胞* {; G% \8 Y$ @' F k
(三)游走型细胞
9 K# ^9 R- O$ h8 j: u* s$ m+ c+ ~(四)多形型细胞+ x5 f' |1 ^6 q) T7 u9 I
二、悬浮型细胞0 T; W4 d; ~! s/ ^) n8 T2 N
第二节体外培养物的细胞生物学特点( s2 W: k2 J) J
一、培养细胞分化状态的变化
& q' \ k. q, L二、培养细胞的增殖能力( |$ v$ P$ b: {$ x# C: E; f
三、体外培养细胞的生长过程% T) { W7 g0 o6 F( H; i w* _
(一)原代培养期
2 n8 b$ G' ~6 a, g& J+ x" `, B; d(二)传代培养期" r! U( }& T ? j. J; O7 T) X0 }
(三)衰退期8 z4 B2 I4 \+ [
四、体外培养细胞的形态学& n! w/ X2 i" h: d. d
五、植块培养物的生长生物学
/ s# |, S! a4 r2 q& s第三节影响动物细胞体外生长的因素1 Z8 ]& ]3 w- }; |1 j: o; w5 s
一、营养成分与生长基质成分对细胞生长的影响
& I/ Y8 {" k5 }(一)血清的成分与作用& L% t3 [3 q( }7 R1 E6 t+ n! s
(二)无血清培养液的设计及应用
) j$ a3 h2 A) C3 x(三)生长基质成分
. Q3 [) Y* E2 w3 ~% I! a' j4 Q# c二、温度条件对细胞生长的影响/ w3 m+ G9 T' ~7 \2 {; K
三、气相环境对细胞生长的影响! o2 k" b' B' G6 B; J" ?6 J9 b
四、培养液的酸碱度对细胞生长的影响& {1 e3 z* e( S) F3 \0 J
五、辐射线对细胞生长的影响
! O( Z. O* [9 u F9 |2 F六、超声波对细胞生长的影响( X! I0 e) p5 M$ |6 F
七、影响细胞生长的其它因素8 c L2 Y0 T- D: j. c" g
第四章细胞分离与纯化" a2 A; e6 f7 Y4 e" t
第一节解离(散)组织制备细胞悬液过程中的细胞分离
5 T, g5 d( h0 p0 v% t W0 P第二节利用细胞体积和密度进行分离纯化的方法$ I, ~: b v7 b b
一、一步密度梯度离心法+ \' j+ _/ r' I* O1 h& B9 {/ j- @
(一)血细胞的分离 O- U6 h! J% {! V$ h8 J+ ~6 N; t4 z
(二)玫瑰花环细胞的分离
! n' \. T6 ~' P8 }二、等密度梯度离心法
/ ?- u' o* V8 ]4 [(一)连续BSA密度梯度离心法
( T4 b- b/ s. R2 M8 B- Y(二)非连续BSA密度梯度离心法: d& L0 }+ x1 ]; c R& E; s
(三)连续Percoll密度梯度离心法9 q P$ B+ u4 S4 a# T3 K
(四)非连续Percoll密度梯度离心法
* S- ~1 ]- _( S三、速度沉降法5 r$ t% Y. ?" b7 t1 \: c2 w
(一)低速离心速度沉降法
* ^( I5 w- y) U |7 ^& H1 d(二)简单策略沉降法
* B+ R/ K1 S4 P x5 w0 `. u* s# t(三)简单重力沉降法分离白细胞与红细胞: _1 X! T V" C/ F
(四)简单重力沉降法分离粒细胞
$ B F- X& t) ~( }; f& O6 ~四、离心淘析分离技术
& ^) f$ U* N* J& s( f# a7 @第三节根据细胞表面电荷的细胞分离方法
* H' e/ `( X) {9 p: \一、自由流动电泳分离技术& h' ?! L. ?. b* V" \0 @
二、密度梯度电泳分离技术
7 m* L+ n. A# \ x7 i% k2 ]! B第四节基于不同黏附特性的细胞分离方法
* p" t8 c( Y& X! Y一、差速黏附处理) I5 Z$ @6 I- T4 B3 z
二、葡聚糖凝胶G10过柱法/ z4 j3 J$ H. a
三、羰基铁粉法: Q' u: D! y% f, h
四、尼龙毛分离法
2 }; A. L. K* P1 E; `6 t第五节利用细胞表面标志分离纯化细胞的方法7 h7 J. z& G5 |5 S' Q
一、免疫溶解法
. Q3 h% x+ y5 J6 F6 f! y( N6 A& d二、盘化法
$ ?( n& a, k$ K& q4 i3 G; R(一)直接法
4 b( y. ^% W1 d7 ~" B6 \ m5 N2 j(二)间接法
+ A9 ~& J5 }8 L1 _: \& ^+ k, T三、凝集素凝集法8 w6 J" o; q6 A
(一)花生凝集素凝集法分离皮、髓质胸腺细胞% \) k6 p; J4 N% }; L) Y6 ^" ]
(二)大豆凝集素凝集法分离T、B淋巴细胞
( Y: @7 { B& }& E- W) d# [9 d) T四、玫瑰花环分离法
( n/ C3 P4 H- }( O3 s4 j(一)E玫瑰花环分离法
# |; x8 P4 W) Z7 g/ W; L(二)EA玫瑰花环分离法
- R) [; {' t# r(三)EAC玫瑰花环分离法: e& R5 V+ ~, c# w0 k
五、流式细胞分选术7 [7 i `3 t/ U/ h! _
(一)流式细胞仪的结构和工作原理
$ F5 I' }! s% t3 H& ~(二)流式细胞术分选细胞
- d1 \4 Q" g) P S% }3 f六、免疫磁珠分离技术9 Z @* ~3 @" B, o
第六节利用其它细胞学特性分离纯化细胞的方法7 L, o' Q$ I2 P
一、反复植块法, K3 u9 l0 t, X# M% B
二、有丝分裂抑制剂处理
, s, h1 f0 @" V& d第五章细胞系(株)、细胞克隆与细胞周期同步化, ]7 K6 i3 B" O$ E6 K
第一节细胞系(株)的建立与鉴定
$ o+ X$ [+ T" b: K5 Q% [一、基本概念
; }( J5 ` j+ u5 U* d- [2 t二、建立细胞系(株)的档案9 i* w# s. j ]
三、细胞系的鉴定! U3 b2 ~' @" n* z
(一)细胞系鉴定的内容" I$ |! V: a' l( J7 T5 t9 b/ E
(二)细胞系形态学的鉴定方法# e+ Q# M& ^: J: F! Z3 y
(三)细胞系的染色体数目、核型及其带谱分析
1 u5 ^; n3 A1 X" U1 p2 P(四)细胞系的同工酶酶谱检测
# p; S5 O9 X: _4 [四、细胞系(株)的保藏
, f" \) K9 w1 Z! N4 ~" v五、国内部分已建立的细胞系或株名录% \; X% \/ k4 N
六、国内部分已建立的单克隆抗体杂交瘤系或株名录
5 T( q7 S* `# A: w0 x) y/ y七、国外部分已建立的细胞系或株名录' W! }. |& m; M
第二节细胞克隆 i9 W! D: o5 D8 f4 b+ S% K
一、克隆培养技术
% V+ r& c/ C* [" O7 H7 j2 Y(一)稀释铺板法3 P7 w* v) |) }( h% ]( R8 @
(二)饲养层克隆法
3 E) x. w: F6 W9 z7 x. R1 J(三)胶原膜板或血纤维蛋白膜层板克隆法2 Q* q0 Y$ A- q
(四)琼脂克隆法% o" Q8 u1 B6 }$ d5 \
(五)在琼脂基底上用甲基纤维素克隆化
# Z/ Q* g# P, H B; k' O% U二、影响克隆形成率的因素
$ K! n4 B7 A: |& L三、克隆的分离
; u8 j# t, n3 h) r0 f6 G第三节细胞周期与细胞同步化
; Y, g4 i3 u5 y6 e$ V, |& H1 y一、细胞周期5 B3 y' E7 N8 J" e+ \
二、细胞同步化
/ `) S) ?, ?6 ?. Z(一)各期细胞的分离
8 y$ @, Z2 A7 H0 ^4 j# f2 H! r% A(二)细胞分裂相同步化法, _' Z" a- a" L' H" _
第六章器官培养: G6 C+ F: x( I. C" K
第一节器官培养技术概论
/ a, [5 x. V) x- P4 @5 n一、器官培养技术的基本要点8 r" K2 l9 W2 u1 w7 R3 O
二、器官培养技术的发展简史
- [; s0 _# D% L8 F' k# u/ r- _# a4 ]三、器官培养的基本原则
* Z, z, j" z0 N(一)养分的供应与取材
3 e. M1 L( U* e. G& ~+ @* ~: \(二)抑制细胞迁移
* t, D8 ]8 t }* f: D四、对器官培养技术的评价
5 h% s& D. x7 O五、培养器官的生存环境及影响因素
$ R+ H8 T' Q- S% j2 w0 \(一)培养器官的生存条件及其影响
4 k. B) c7 A- g(二)培养器官的内在因素及其影响2 B9 Z" W2 z! P+ h% @0 M
第二节器官培养的基本方法
0 I K8 z0 h& A5 i6 C7 e0 T一、表玻璃器官培养法4 I6 }( E: ~. I9 n. I
二、琼脂凝胶培养法(Wolff器官培养法)
8 y) d" B ]0 ]9 r三、悬浮培养法4 h. F" N9 Z3 H: Z0 ^: G
四、直接漂浮培养法
1 p& i' S: E5 |0 V. \五、擦镜纸培养法, j3 |" K9 D* c' ?( W6 Y
六、金属格栅器官培养法
0 |+ N% B* t5 i' X9 g; N+ s七、琼脂小岛器官培养法8 X9 u/ V% H% R6 A, Y
八、陈氏滤纸虹吸器官培养法3 _9 b ^7 Z$ P+ X& `# ]- ^! U
九、灌注式器官培养法2 @4 A0 y/ F% X5 Z6 y
十、旋转管培养法
) h! ]( u0 ]8 Z% [十一、摇摆式器官培养法
1 x' L! m! \2 j8 B7 q十二、器官灌注系统
( h& s9 b1 |% w3 P" M十三、鸡胚尿囊绒膜培养法
/ s/ v. ~4 J; X! {2 E. X1 @* u十四、早期鸡胚胚盘培养法
1 r" k- b: d$ @* f- q# {第三节器官培养各论
' G7 x2 U% N& N; f一、胚胎肢芽的器官培养
3 Z: y& l+ j0 `. f1 x; t(一)胚胎肢芽的血浆凝块器官培养方法
* K9 F; J% R* g: ?9 s* M$ {8 X: ?(二)胚胎肢芽的琼脂凝胶培养法" C* V, ~, @, r. j
二、胚胎性腺的器官培养
- f" B' H: V1 _三、软骨与骨的器官培养; Z& s- k0 d, @; v. A9 @
(一)软骨的器官培养
$ }+ {! F5 Y; c9 P8 i% [(二)骨的器官培养' m! l9 k( o) {; j5 m! k
四、神经组织的器官培养" |# c3 r3 Q Y1 n
五、牙胚的器官培养
1 J4 _: O1 ~% t5 d- S6 u! N(一)Trowell培养法培养牙胚器官
/ k: [5 F1 M# L: m+ q2 h2 r(二)悬浮培养法培养牙胚器官
+ v0 L) Q- f6 D7 `: A) \; K六、腭板的器官培养7 P# f4 V& d1 k
(一)腭板器官的静式培养法5 c( ^& [ V: {. T) D$ |
(二)腭板器官的转动培养法
% |4 p4 V- U3 D. K# q& Z1 @七、毛囊的器官培养% h X H9 M" j1 w' ^
八、血管的器官培养& B: ?4 h; V) F& L+ T) D
(一)血管的悬浮孵育法器官培养
8 s8 T. `# m$ O3 a. {(二)血管的琼脂孔器官培养法& |/ d/ Y# O7 J; _/ J; B* ^) Y4 L
九、肝脏的器官培养
/ H7 g3 a3 t$ U& j十、小梁网的器官培养, b+ S: z u6 N/ p# x
十一、人胃肠黏膜的器官培养
0 i& y9 ^# ~# l' A9 X I十二、胚胎器官的上皮与间充质植块的联合培养5 M. X1 l# [8 n4 I5 c& C$ c! Y$ u
十三、肿瘤侵袭研究中的器官培养
( u8 V. e- M# {% O* n+ x(一)肿瘤细胞与靶器官植块的制备
& W4 d/ F( O$ U& y+ K& P: B- y(二)肿瘤细胞与器官植块几种联合培养模型. Z r. u3 o, ^% P8 E$ ?2 L+ Z2 i9 r
第四节全胚胎培养7 Q- r; G$ g. ^2 q7 p/ g
一、植入前胚胎培养9 \# h6 e' w: d
二、植入后胚胎培养& J9 o+ Y- @3 i) R. X1 p% F# `# z
第五节器官培养的应用
; I7 e5 t- [& H9 n/ j6 f一、器官培养中的形态发生研究
; l* |3 l8 |( f二、器官培养与发育分化研究, p& ^" |: ~1 [- b ^
(一)外分泌腺的发育分化
" Y) y' g7 J. n% n(二)内分泌腺的发育分化 |3 |9 x/ R/ v& A0 x
(三)性腺及前列腺的发育分化) g/ P% p5 [3 }4 _% [' y
(四)神经组织的发育分化
6 C- ~& C6 U' a4 x(五)各组织细胞间的相互作用对器官分化的影响
* G T# H+ B9 z# `3 d三、体外培养整个胚胎的生长发育
! S, p& s# f, v5 `/ D- i四、胚胎致畸作用研究. {8 P, m7 ~, A" l% N, O- r- R
五、器官的功能及其代谢研究
- O% `. z+ M( F- n- u: j六、器官移植中的应用' u& g1 f' I# H& A F( _% U: C
(一)器官保存6 [* ], I- w) O& z! D2 i0 X
(二)降低免疫原性* r& D% u+ a5 w) M1 K* \
七、器官培养与肿瘤侵袭研究
- a; S/ u$ C) E8 j第七章培养物的观察检测方法& e+ D/ K3 c# Y- @8 l# O
第一节活细胞的观察检测方法, v( {/ B% F! b/ |* j
一、相差显微镜观察培养物的形态结构
$ m, [& h( i6 c4 N& f(一)相差显微镜
8 W" k$ s7 U, l$ Y. C(二)用相差显微镜观察活细胞的方法# C+ c, n2 x c, b
(三)活细胞的动态观察与缩时电影
; g e9 v, W8 h% Q, a# C二、细胞计数法$ ]% c8 z/ @) t% }) x
三、细胞生长曲线
; h: A J. {2 l四、体外活体染色观察与活体染料, w$ M% B9 q. H
五、活细胞的染料排除检测法) T& u' t" p3 _2 A* ?
六、细胞增殖活性测定的3HTdR掺入法2 y3 Z/ p. E# O4 o" Y4 i/ X
七、细胞活力测定的MTT比色法% L9 L) d% e0 p& ~$ d+ j
第二节普通染色观察
; ]- m, P: z( N# y* B$ W一、HE染色法
: [5 H( k( k& z' w9 I8 a% R$ ~) _! o二、吉姆萨染色法# ^ e, U, g8 x! o
三、载坡片处理方法5 u1 c! Y& W" }; o
第三节细胞化学技术6 B: T- v) [( R) a
一、酸性磷酸酶9 c! {/ }. v( G
二、葡萄糖6磷酸酶; z7 T* B4 u' c* K) R$ l5 {
三、琥珀酸脱氢酶
% Y/ t8 R, R1 L4 d+ X2 I( x* r四、DNA与RNA的吖啶橙荧光染色法+ X/ R" j4 j E6 J
五、DNA的富尔根(Feulgen)染色法
! F. B/ m& }- x/ ~0 w4 |: h% F9 P第四节免疫细胞化学技术
" u( S+ g9 a+ q6 v一、常用免疫细胞化学技术原理
/ G4 N' n& M5 ^& G+ Q- Y& j二、常用的显色标记物
2 B% F# Q' a# y6 U+ F(一)辣根过氧化物酶- K" Z+ b8 e5 v
(二)碱性磷酸酶" }: S: B6 D: G" P; ~, H, ~
(三)荧光素
* ? q% } O6 p! D(四)胶体金与免疫金银技术6 _0 C6 L% u& E1 P/ f
三、免疫细胞化学方法及标记物的选择# ^1 H# s& l; y. O/ c% ^$ @. p7 H
四、免疫细胞化学的一般问题 q5 n) C8 @1 u$ Z5 Q: E
五、免疫细胞化学染色的典型程序
% ^# J, m+ F- e/ X$ C, t(一)免疫酶间接法
9 G: G- f* j$ @+ _6 c, j- o3 _6 W- E(二)免疫荧光LSAB法
# O8 n4 Y) ?9 ?(三)PAP法# [4 j- T" o) S$ A- m
(四)SPA胶体金银法
1 B6 `8 {, l8 x第五节原位杂交技术
9 ~$ Z; F0 m- D一、探针与标记物的选择1 @+ i; X5 `6 L5 u+ t3 ]7 X( @
二、原位杂交技术主要实验材料
$ G- ^. k* N3 g0 J$ _三、杂交
9 z+ S0 F% m2 P% [- {四、显示标记物
# b7 [6 s* V( w+ G3 G7 ]五、设立对照9 q! v7 t5 \9 b# }0 B0 t% S, a+ I
第六节电子显微镜技术
* A5 S5 q5 r% K& W; M$ y9 L. k一、超薄切片技术# P: e2 i- x: t" H' F# u
(一)对培养物的预处理
9 Z" U0 X7 s( y3 v {$ F0 |. S(二)标本制备* D: D S5 G" Q3 \4 X
二、电镜免疫细胞化学技术 g- J& T/ ^ y7 A
(一)显示细胞表面抗原( D+ e" Z# l" {8 }
(二)显示细胞内抗原
, W7 C- P" ^4 t1 q1 _5 G \三、其它电镜技术简介5 H O. P7 R: M6 V
(一)扫描电镜技术
% j2 p" N! ^9 d7 v5 i(二)冷冻蚀刻复型技术
0 H* [2 G+ O. V8 E+ S$ ?第二部分动物基本组织的体外培养
( G% B0 ]$ V; J0 C' }第八章上皮组织的体外培养
( T; k3 A8 H1 O第一节上皮组织体外培养技术概论
6 Y F: Y# t) ?2 ?- }. @3 y& ^一、在体生长与体外培养的上皮组织的基本特点: w) p9 i& m- F z
(一)上皮组织的形态结构( c' r9 u% n" ~8 H: Q, W/ i9 z
(二)上皮细胞的极性
% e3 d$ b4 X3 r' f, @' N(三)上皮细胞间的连接7 ?0 }& w! M$ q4 s
二、体外培养的上皮组织细胞的生长生物学: q/ w- I+ ?* b
(一)体外培养上皮细胞的形态结构4 {% ?$ K# `+ Z
(二)体外培养上皮组织的生长与增殖特征
# r A" w% w) m7 ]; ^% ~% ^, L三、体外培养上皮组织细胞的观察与检测9 F: @* K. v7 W3 G
(一)一般形态学观察
# \6 u4 Z W3 m(二)组织化学与免疫组织化学观察与检测
& i/ u, R3 L. r0 ~第二节呼吸系统有关的上皮细胞培养
$ c* I; Z: D" P) v$ x+ [一、呼吸道导气部上皮细胞的体外培养" ]# d" ], O' B
二、呼吸道导气部上皮分泌细胞的悬浮培养
/ _% ~7 f4 L$ M( H8 r3 A+ c* m三、Ⅱ型肺泡细胞的培养
5 `+ @: ?: T! J7 h" c5 X2 {, q四、鼻咽上皮细胞的体外培养
9 B l' s1 v: [/ t+ c k第三节消化系统有关的上皮细胞培养
1 S4 B% L1 }4 E9 U一、食管黏膜上皮细胞的培养# s- `$ M) u) R$ f" m7 ]
二、胃黏膜上皮细胞的培养! y. o) R) V5 G
三、肠黏膜上皮细胞的培养
! Q) h# g6 D( W" L/ t四、胆囊和肝外胆管上皮细胞的培养
; x) a# j0 [0 ?, `5 o& E第四节腺上皮细胞的体外培养
! t! v: C8 W1 V. P一、唾液腺上皮细胞的培养- z" E! H: }$ O+ i1 N# X9 P6 w
二、乳腺上皮细胞的培养' _+ |8 F9 ?2 h" u8 Z2 u
(一)乳腺上皮细胞原代培养的建立和维持
3 S- ]$ l& R* s& E& c: G$ S" {(二)乳腺上皮细胞的悬浮培养
( |2 y P5 T, v7 r2 k8 f/ B! `7 ^(三)乳腺上皮细胞在EHS基质上的培养" u" H( o/ a5 |- q/ ~
(四)乳腺上皮细胞的其它培养方法
- |+ Y9 K5 `( v7 d/ ]9 J3 }(五)乳腺上皮细胞培养中的有关问题* r0 ^6 O* X# E9 V( j% M2 B
第五节表皮细胞的体外培养
; V9 _7 E! ?- k) M一、表皮角质形成细胞的饲养层细胞培养法
' N9 Y' ^: k6 p/ U二、角质形成细胞的复合培养法" o- I) G; g9 p+ `) U& Y* D
(一)在人去表皮真皮上培养角质形成细胞
" l; B' a# [5 h6 I+ q' P" Q% J+ V" R(二)在真皮替代物上培养角质形成细胞
+ Y( i5 F2 |. B! ~$ a& i& p三、表皮黑(色)素细胞的培养( d6 P Z7 I8 F
四、表皮郎格汉斯细胞的培养) Y! I, K! ~8 x! m1 ^$ H
第六节血管内皮细胞的体外培养
! K j: n% y9 y6 Y9 Y( ?+ L一、猪主动脉内皮细胞的培养6 ?* ^3 X1 j+ U6 L- C! M& P
二、免主动脉内皮细胞的体外培养( G2 l- k" u; h0 |: b4 H
三、人脐静脉内皮细胞的培养
3 _ x; A* H9 r# v H四、大鼠主动脉内皮细胞的培养' E* X! V# {/ X! h- E6 n* F
五、滤膜培养法培养血管内皮细胞+ h ~. t' j+ r: y2 R) S: @
六、免脑微血管内皮细胞培养* @* u% D/ L0 V, a8 b9 b) n
七、大鼠肺微血管内皮细胞的培养2 m3 E) t3 n* {' ^$ G! Y
第七节胸腺上皮细胞的体外培养
( _5 E& J( y: K! u l, I第九章结缔组织的体外培养6 t; C7 X. `& B- [! L
第一节结缔组织细胞的生长生物学特点与基本分离技术
$ a2 N3 ^! i; |$ L一、结缔组织细胞的生长生物学特点, E: n% L+ e1 s: n' |+ s
二、体外培养结缔组织细胞的基本分离技术
1 f% Z* F$ n' p4 {0 T第二节结缔组织细胞培养各论
3 Q6 C$ p% s0 s% q2 Z' a0 w一、成纤维细胞的体外培养& I& V1 Y P/ l3 X# E4 b( j
(一)真皮成纤维细胞的体外培养
7 l; ^ j, |9 Q @; a4 B2 O(二)人包皮成纤维细胞的无血清培养8 F0 Z9 `. J3 L* ^ r' K
(三)中国仓鼠胚胎成纤维细胞的体外培养
) S9 r, Z2 F+ B$ |3 l(四)鸡胚成纤维细胞的体外培养
7 f9 ^/ W, ?% p8 p i+ [. d(五)人胚肺成纤维细胞的体外培养
, L0 Y, ]: P: P- T; M0 R+ J2 @(六)小鼠肾间质成纤维细胞的体外培养, }: _* h1 E: r% v
(七)眼组织成纤维细胞的体外培养8 E8 l" ~9 r2 G3 ^. x& Z5 }' l
二、巨噬细胞的体外培养
( d$ j' n4 n9 `, d(一)获取肺泡巨噬细胞的方法
5 l" T& ?: ?4 B+ `1 k(二)获取腹腔巨噬细胞的方法8 c' f/ x5 T5 D
(三)巨噬细胞的纯化: z2 v0 e+ M* Z0 L( j
(四)巨噬细胞的接种和培养% ~9 m- _5 A4 R: _. @$ H
三、脂肪细胞的体外培养
# K+ b$ X- i6 X5 t7 p$ \& e(一)大鼠前脂肪细胞的原代培养
% j$ c, S$ a: T% w(二)小鼠前脂肪细胞的原代培养
: r; J: t% z$ |+ M四、肥大细胞的体外培养
) o8 `' D. f. v, F(一)肺肥大细胞的体外培养
5 h" v& C, i7 i- W8 ~) ?(二)肠肥大细胞的体外培养& U. l: c0 Q( M* I
(三)皮肤肥大细胞的分离和短期培养" D( r! A2 e8 F5 E+ p" G- ]. t
五、间充质干细胞的体外培养
* [) o D {+ }/ s0 [: v% [' k(一)鸡胚肢芽间充质干细胞的体外培养3 s5 m1 V$ s# G1 A+ |
(二)大鼠骨髓间充质干细胞的体外培养
! i! k" C; p, ]- Q; x(三)人骨髓间充质干细胞的体外培养5 I9 m/ R* K- }7 a7 Q4 B
(四)兔骨髓间充质前体细胞的体外成软骨培养
6 a1 ^7 O( C# @) t3 g7 Z+ l第十章几种重要脏器细胞与特殊动物细胞的体外培养
+ F% Q, m. s3 _* W& \5 Q6 Z第一节眼组织细胞的体外培养
# y$ o/ v! F/ a/ N# z一、角膜上皮细胞和内皮细胞的体外培养
( P. Z( S) d9 [* L) n% C(一)角膜上皮细胞的培养
9 b ?$ v3 B! @ L(二)角膜内皮细胞的培养 s1 O) c( d- Y r/ m* f
二、小梁细胞的体外培养8 @0 k1 R/ \' v! P; d6 ?6 J
三、视网膜色素上皮细胞的体外培养4 @; n- d- T5 M, A, t& V/ o: G
四、晶状体上皮细胞的体外培养
$ j+ ? b+ j5 _' }( {五、视网膜米勒细胞的体外培养
# C0 r2 z* [- |2 M5 c/ g第二节骨与软骨组织的体外培养
- i) {) x# Q0 \ p5 _一、成骨细胞的培养9 k) ?* p; {7 d, z! X, } Q
(一)骨内成骨细胞的培养
& G0 N0 `! x$ y8 S(二)骨膜内成骨细胞培养- j5 p6 Z' ~" a: e
二、破骨细胞的培养- C" @7 s' J& @/ I( S/ |: G7 {
(一)成熟破骨细胞分离细胞培养法
" n. v) C9 g/ P) u$ i3 b0 v9 ~" c6 K(二)骨髓长时间培养诱导分仑形成破骨细胞法
6 ]& P: ]; F; w$ d7 k三、滑膜细胞的培养
3 z# r* K: `3 W- b(一)滑膜植块培养法6 T6 G% B7 M. }
(二)分离的滑膜细胞培养法+ D, R8 R, ] F$ S/ Y! N! B1 G
四、软骨细胞的培养" k2 N5 E, e' Q
(一)关节软骨细胞的短期培养2 c9 t7 _0 S) \' n- Y
(二)人关节软骨细胞的长期培养法
) o. D% Y/ C1 ^# N! ~$ I0 h- p第三节泌尿生殖系统有关的几种细胞培养4 F" @" O7 P7 |7 Y1 T) ~ [: m
一、生精细胞的体外培养
) @; ] A+ K8 Q$ v二、睾丸支持细胞的培养2 f0 Y! d8 o* H
三、睾丸间质细胞的培养" e5 l% P8 ?- J$ D9 e. J
四、肾小管上皮细胞的培养. Y g+ I5 ~* }& [$ r
五、肾小球系膜细胞的培养( e% M, m; @& U, C$ Q, f) U/ x5 e
第四节几种内分泌细胞的体外培养
0 I- p9 ^5 e$ l0 o# E4 M一、胰岛细胞的体外培养% g- ~9 n! w/ F$ e! {
二、人垂体腺瘤细胞培养* ~; w# K; f. m& U3 b
三、甲状腺细胞的体外培养0 o1 o- p( }$ v1 `. r
第五节羊水细胞的体外培养
$ L8 K1 ~) f6 D7 \, }- L( H: O一、羊水细胞的体外培养基本方法2 w) @2 q" G3 f8 F; P
二、羊水细胞的富集培养法9 b: [4 I2 N5 H! @5 L2 p8 Q
第六节胚胎干细胞的体外培养
, J) O% [8 F1 o一、体外培养胚胎干细胞的技术原理) Z: N9 i& Q! e+ Z, W. o7 V
二、体外培养胚胎干细胞的基本过程
& x9 I2 @/ n9 b- [4 X7 U4 y3 ~(一)饲养层细胞的培养& w* }9 [. ^( [1 C
(二)饲养单层的制备
8 R9 z$ t# s/ Z0 O& W# D" ](三)用于培养胚胎干细胞的条件培养基的制备) h6 I2 m j, R1 ]
(四)胚胎干细胞的分离与培养, @, E0 @( I1 t: I2 b6 t! a% h
(五)胚胎干细胞的冻存与复苏) `( y& F; i- f( V9 l/ q7 v
三、胚胎干细胞的鉴定: I7 b+ S) {) J$ _9 B9 o. f2 [: T6 \
(一)碱性磷酸酶检测) o+ U4 e5 \0 D' `
(二)核型的鉴定
. H2 S4 v# l( u3 ?5 h. v(三)体外分化能力观察
& O1 l) S6 F+ G2 _- M: |4 k(四)体内分化能力的观察
% w7 ~7 M+ Z% b+ K& B# \, [(五)嵌合能力的测定
/ k( ~8 d+ D8 |第十一章造血干细胞的检测与造血祖细胞的体外培养
9 j3 _/ _+ J, A P. |1 Y第一节概论 E3 Z6 u; q4 J: ?
一、造血干细胞的生物学特征, B. y2 {2 t3 p) m V: D
(一)造血干细胞的基本特性
2 X- ]" Q) Z/ v Y6 D$ U(二)对造血干细胞的识别+ y( W! i e Y+ c8 {4 P
(三)造血干细胞的胞龄结构
: n4 E' U; W0 A6 u3 R# U(四)造血干细胞的动力学+ a) Z2 d3 ?' y9 c# r- B
二、造血祖细胞
6 q1 x' s/ Z; R, C第二节造血干细胞的测定技术- u4 g) J V" z
一、CFUS的检测技术
/ H" q" v. ]- d4 B( W K- [" g/ g二、以标记染色体测定脾结节的形成
. k* o B$ j( S6 g. j* v3 ]* v3 R三、脾结节移植法测定脾结节CFUS% _8 R, n# X% X1 }" |% ^9 H: X
第三节体外培养造血祖细胞的特殊实验材料
; P: Z9 `5 `7 D2 G' s" D) j一、培养用液
, X r5 @7 \* C$ ^二、特异性刺激因子的制备
4 A) j% C1 X8 [' K(一)横纹肌条件培养液的制备
4 c! h/ B8 p }$ q" A2 O$ `(二)白细胞条件培养液7 q; Z R- b% L( {& `/ [! v3 K
(三)脾细胞条件培养液 `( u" |. T, v. z
(四)再障病人血清的制备
# G0 W( c2 c- a; l3 A(五)胎肝细胞裂解液的制备. L& s5 @( {9 \9 e, G
第四节造血祖细胞的体外富集与培养
% h# r" u: l0 N# S1 O |0 |一、造血祖细胞的富集( u7 \- ]5 V: I' J
(一)单个核细胞的分离2 o0 Q% k, a7 ^/ |3 r/ V& O8 e' p
(二)CD34+细胞及其分离方法, O3 d. T, g" A" Z2 I6 s
(三)CD34+细胞的MACS免疫磁性分离方法% d6 D% ^& t$ k% m! ]
二、造血祖细胞的体外培养2 b8 p; J& ]' v( i
三、各类造血祖细胞的培养技术/ {! l% ]; L' F6 @
(一)CFUGM的培养
( [# h" c+ M0 E! w$ P3 l9 [3 \(二)红系造血祖细胞的培养
- d" E) s. `$ d' l(三)巨核造血祖细胞的培养
$ i* [2 W& E1 F/ z Y8 t(四)混合细胞集落的培养! H* m( N t- f& N+ F6 N
(五)白血病细胞的培养. g E/ y/ g: a9 ], U7 x, b
(六)无血细胞体内扩散匣培养技术( H6 b; u/ P) E4 c
第五节造血祖细胞培养技术的实际应用4 T/ F- k% t% v; ~
一、正常人骨髓内各种造血祖细胞的含量测定
8 B3 D2 V2 r2 i+ g+ {二、某些血液疾病的细胞病理学' G4 p* i; _ N: E6 h) j3 F z
三、药物对造血细胞的作用研究: c" ^4 h- I& C
四、再生障碍性贫血的发病机制和预后以及造血干细胞移植治疗
1 X* _0 x1 `! l7 X" k# E4 M五、体外测定造血祖细胞辐射敏感性与全身放射敏感性反应的关系
/ n) U1 a5 u7 K; s% y) Y第十二章血淋巴细胞的体外培养
* |$ s' g/ y3 D& @8 o$ d第一节各类淋巴细胞的主要特征0 `' s3 k1 E! e o$ d9 b
一、T淋巴细胞
( ]/ j# o# j: v' q(一)T细胞的表面标志
6 L1 q7 B; o$ v* t(二)T细胞亚群及其功能$ W; S3 w& @' I. T2 c* K8 B$ x6 o+ R0 b
二、B淋巴细胞
# I7 Y* H! @* l& n(一)B细胞的表面标志
* |) v- F: b0 O2 i% n6 j; P(二)B细胞的亚群$ q' ?, V/ E- P+ q' E
三、大颗粒淋巴细胞& g5 a& U5 P; x. i* W& G
(一)NK细胞
1 w% L% B8 O) U+ q1 A% m2 F6 [(二)K细胞
C- v$ B& \( `0 ?# N' _# Q* }6 h第二节血淋巴细胞的分离! V3 O. C! P4 N" n3 Y6 }& x
一、单个核细胞的分离
0 y4 g% [( G( X+ ]0 w; Z二、纯淋巴细胞的制备9 N: o- @. U8 W* z& R" F# ~
(一)玻璃黏附法
0 J4 B V1 ?* c6 B y; }* o! X: }(二)羰基铁粉法' c" c0 N( R/ b- d# b
三、T细胞和B细胞的分离
8 }$ t& a* V- ] t(一)T细胞花环沉降法+ B/ \6 ]; E+ X" r
(二)尼龙毛柱分离法1 b/ G$ J$ B7 A1 p& k
四、大颗粒淋巴细胞的分离
k" \! o' n" p五、荧光激活细胞分离仪分离淋巴细胞及其亚群
# k! g& H: t+ {9 S六、免疫磁珠法分离各种淋巴细胞及其亚群' N# r6 X" G7 u- {) r2 N6 }
第三节血淋巴细胞的体外培养方法和应用 v4 x9 i4 ?0 F
一、淋巴细胞转化试验8 { _: O s" ^9 Y, \% Q7 `) A( o. s9 }
二、B细胞产生免疫球蛋白的检查; v/ ]* M6 i8 q. @' I
三、T细胞介导的细胞毒试验# A" g o# |/ U
四、NK细胞毒性试验
" R$ g+ V2 H2 Y7 S# e# r7 t) S. m五、K细胞毒性试验
4 [$ S0 S; _3 c六、LAK细胞的制备) t; i. P# D% b! o& ~4 j- m( F
七、淋巴细胞的体外长期培养# d2 {3 v4 H" B5 b. r, y
(一)用IL2建立T淋巴细胞克隆
T1 k* M/ C) x# I5 d! a9 T4 q(二)用EB病毒转化B淋巴细胞1 T7 }0 h% a) T7 Q
(三)用B细胞生长因子建立B淋巴细胞株
- u k9 E6 v- x0 i* Y第十三章肌肉组织的体外培养5 Y3 A! g) r" S( u! q
第一节肌肉组织体外培养技术概论3 D+ g: U0 ]8 d
一、肌肉组织体外培养技术的发展简史
6 c2 Z# k g! a8 I2 g+ u二、肌肉组织细胞培养的意义与评价* V9 i, P0 O' k6 ]2 v+ _ x6 ]
第二节心肌细胞的体外培养
; ]* ?$ V4 U5 A' T0 R- v4 {, v一、心肌细胞培养的基本原理
/ x4 G c5 j! o& g二、心肌细胞培养用液
# Q" C) F) N P7 G(一)常用平衡盐溶液+ P3 F1 v5 ^% p0 ^2 q! @
(二)心肌细胞培养液; h q# F, Z0 R7 K$ \
(三)其它培养用液8 u% R$ @: F, T: ^
三、心肌细胞的培养方法
& C! z) A- G1 \2 E; T% |2 y/ r z; X(一)心肌细胞的原代培养) b1 w$ j3 q+ ]1 P! |# P" X' ^0 b
(二)成年动物的搏动心肌细胞的制备
1 w, H3 h6 m$ s2 G$ D( u(三)心肌细胞培养方法的某些发展" N2 y1 `3 w& P6 \8 H- ?5 P9 D; }
四、心肌细胞培养的基本结果与观测方法7 m2 z2 E3 B# q# ^5 r- z) l
(一)一般观察
% H% N- |4 E8 @! v! w2 X e0 M; \(二)培养心肌细胞的形态学观察& s5 b1 G0 q% ]' [# h P
(三)心肌细胞搏动的观察1 p$ |' u+ l. `5 }2 M
五、培养心肌细胞的某些电生理特性
+ h' Y9 [/ ]9 S; W7 H六、培养心肌细胞代谢的某些特点6 C7 F. B- }) Y
第三节平滑肌细胞的体外培养' M7 \# J2 y. a$ F# C$ R
一、平滑肌细胞体外培养方法
2 H _' v" I% {$ T8 ?+ a5 ?$ c( t二、培养平滑肌细胞的结果与鉴定
8 E* w. f' t+ ~ m1 F三、影响血管平滑肌细胞增殖的因素
, n/ Z2 A# S, t" o# b7 `1 ]# C第四节骨骼肌细胞的体外培养/ Q7 g0 M! J0 \7 B. S
一、骨骼肌细胞培养所需主要材料
6 w- a( m, z9 A# {% n$ ^( _二、骨骼肌细胞培养方法
$ |5 c& Q+ s* t/ R% J7 E(一)乌类骨骼肌细胞的培养5 \7 c7 W5 U# i+ [) `: a- S1 @' K
(二)啮齿类动物骨骼肌细胞原代培养方法) d0 ~! f5 Q' `6 O. A+ O" q: m
(三)从啮齿类动物肌肉中获取高纯度肌源性细胞的新方法$ H, H& }" b+ Z I1 W
三、肌源性细胞系的建立: s M1 G: ~6 T0 Z) J3 V
第十四章神经组织的体外培养
: A+ {$ ^8 _% L7 [3 H9 K9 K X第一节神经元的体外培养
" U- d/ ~7 O' }; Q+ Q' ^" E一、神经组织的植块培养法
& T3 a- D; v3 R: Z8 |$ r(一)概述# R. N, X% k7 Y6 h5 m" {) _, `
(二)灰质组织或神经节的体外培养/ q; m4 E! |/ E7 l+ U
(三)白质植块的培养
( [( p+ F) R5 @0 J( f二、神经元的分离细胞培养方法; W* i! G9 [0 X8 s4 j
(一)材料的来源( _% f2 K4 l. G6 Z1 L! V0 E
(二)神经元体外培养液- h# C) U; n4 M4 s8 ?
(三)神经元体外培养的生长基质
" |: w# ^ L; \* I( i( W+ F(四)神经元的分离细胞培养过程 R1 K3 ?9 w8 ?7 |. {' L
(五)神经元细胞的体外培养+ S3 ~& a2 r' Q1 c4 E( F+ ^
第二节神经胶质细胞的体外培养
* A2 `& }7 n5 K, E& ^7 h一、星形胶质细胞的体外培养
1 |' m$ `3 A* h0 `9 K- a(一)取材的动物年龄与部位
% v0 R+ `+ m6 J( X2 v6 f4 r. x(二)星形胶质细胞的体外培养方法
+ p1 S! q5 K) l4 t8 `0 i P(三)星形胶质细胞的无血清限定性培养液 O6 E, g2 i& @9 Y z: e y
(四)星形胶质细胞的形态学特征与化学标志物" |7 }8 S, W3 G6 w+ t1 M" |9 P% p- S
二、少突胶质细胞的体外培养
+ Z# C! [; \3 o2 y. ?) C0 p6 w' T(一)体外纯化过程6 H& E# I1 ]/ J, o* l/ G
(二)体外培养少突胶质细胞的化学限定性培养基' g" j/ f9 a5 ]
(三)少突胶质细胞的化学标志物
( x" r) y% y: q0 F7 N(四)少突胶质细胞的形态学特征
" C0 s1 c9 x, [1 p2 y三、施旺细胞的体外培养
7 J& X/ z' s: w3 s& }( ^4 `8 ~(一)施旺细胞的体外培养方法; u0 h8 |/ j, t' i- J
(二)施旺细胞的无血清限定性培养基0 J' s: ]+ N+ J2 B
(三)施旺细胞体外生长的形态学特征与化学标志物4 p( R7 T3 J$ P* D, B; J
四、小胶质细胞的体外培养1 O- a$ p/ C! Y E* m
(一)小胶质细胞的体外培养方法
6 E* Y! q1 P, q) J9 ? m4 c( A(二)小胶质细胞的形态学特征与鉴定: Z/ s- ]* y+ M3 K' X
五、其它神经胶质细胞的体外培养) G3 y4 G/ t. d
六、体外培养神经组织分离细胞的形态学特征比较; S; B: Q* N9 Q5 Q# ?
第三节各类神经组织细胞的培养方法0 x$ K2 F, H1 S x- c0 _' @
一、鸡胚背根节的体外培养4 s( p4 N0 w- w6 N6 E' Y
二、大鼠颈上神经节的体外培养
$ X# ^9 a4 w$ z8 k" H三、大鼠小脑皮质神经元的体外培养
$ s# t8 U5 C" A# ^, p0 W6 ~3 L D( ]四、大鼠星形胶质细胞的体外培养: ^4 k8 R/ H# Y8 G
(一)方法一：植块培养法
! i K6 [; R o5 C& a" m1 u(二)方法一：分离细胞培养法" d: m5 s8 o7 B2 Z& N3 J4 N# s
五、大鼠少突胶质细胞的体外培养
# p9 \0 D# U/ |, { p" ~(一)方法一：植块培养法5 V. j9 z+ z. z; b
(二)方法二：密度梯度离心法5 A) i$ p9 l1 h9 i4 y
(三)方法三：恒温摇床处理法& o8 W" }: r# F3 I* |5 ]
六、大鼠施旺细胞的体外培养
+ K. Y b! @& w: ~3 \(一)方法一：常规分离细胞培养法1 O: b! Y# L+ t; J% I& p
(二)方法二：免疫选择法
/ `8 c4 [9 j! d3 O(三)方法三：反复植块法
$ v1 ]1 Q) e4 y; q9 v2 q4 Z七、鼠脑小胶质细胞的体外培养5 [; r: x) } Z" j, F
八、脊髓神经元的体外培养
% X# B( U k& c n/ h" s(一)方法一：差速黏附处理富集脊髓神经元培养法
+ T# |! v1 m, S; [2 \(二)方法二：台面选淘富集脊髓前角运动神经元培养法; Q6 |9 f0 `1 x, f
九、鼠脑神经干细胞的体外培养- J$ j1 n: a1 z8 v& [
(一)胚胎神经干细胞的体外培养
" Y/ `( Z9 ]5 T# f(二)成年脑组织内神经干细胞的体外培养+ n' I1 H7 Q2 B# s0 m2 I
十、大鼠胚胎几种常用脑区组织体外培养的取材& t) a- u( V6 q' Z' ?
第三部分特殊类动物细胞的体外培养' [* Z. j. K% j& O6 e
第十五章肿瘤细胞的体外培养/ I5 c* n2 D. v! F
第一节肿瘤细胞在体内和体外的生长特性概论
8 d2 i% H" P: S7 y k _ v/ D一、肿瘤细胞在体内生长的特征
$ H \4 D$ q( d1 M+ Q' o/ m二、肿瘤细胞在体外的生长生物学特性$ O6 ~9 h+ M% Z; n, c2 I
三、肿瘤细胞在体内和体外的生长特征差别0 O8 B6 t8 {$ m% b8 m3 \
四、体外培养肿瘤细胞常用的培养基
6 l& p3 V" f* z7 l& L0 p: Z第二节体外培养肿瘤组织细胞的方法和技术+ q4 ?' D; B3 i9 u# d
一、肿瘤组织细胞的原代培养0 U s4 }- }; o( v
二、肿瘤细胞的传代
0 b6 s. J9 l9 ^. @三、肿瘤细胞的克隆培养法' j9 J) N4 R) N, }
第三节肿瘤细胞体外生长的细胞生物学特征; Z* P( R6 W1 k
一、肿瘤细胞体外生长的形态学与细胞学特征$ B; C4 u* F% [+ N8 b
二、肿瘤细胞的核型和异常生长特性% L4 d3 {' `' Y% C' D' L" y; ?
(一)染色体数目及核型, _/ P( |/ Y# E! }
(二)永生性# J4 M+ _1 s# ^ O" S
(三)异质性% c; Y7 q; O9 N7 X+ ~% {$ v! f
(四)动物接种成瘤性
, R' k4 [3 l& N |9 B/ [5 n(五)非锚着生长依赖性8 x [- H% P: \6 X) ^- d
第四节已建立的肿瘤细胞系介绍" M, C# J! k0 M. N! R
一、国内已建立的人类肿瘤细胞系介绍
) ~$ m8 R7 v2 S& h二、国际上已建立的人类肿瘤细胞系
; ]" n6 p- x$ V0 c! Z* n: j& o; X第五节部分肿瘤细胞的体外培养与建系过程
* r' A; g9 B' W" x( B+ m0 P一、人鼻咽癌细胞系(CNE2)的建立
/ G# h+ k+ K, K2 d& P二、人骨肉瘤细胞系(HOS8603)的建立
4 l* Y5 s6 e9 S, s$ T6 W0 q三、大鼠肝卵圆细胞的本外培养" }. o8 ], @7 O2 H! r% s& M
四、人神经母细胞瘤细胞系的建立4 H3 L4 R- {; d. g; o
五、人肺腺癌细胞系的建立9 [2 L0 T" |0 p0 h
六、有肺巨细胞癌细胞系的建立
1 g3 Q# {# U; m$ D$ X七、人肾颗粒细胞癌细胞系的建立
: s1 ~2 }% F- a# Z八、人卵巢癌细胞系的建立9 m3 Q- a+ i* o4 y
九、人肝癌细胞系的建立% {1 s$ ?4 q9 s1 h* z- Y
十、人喉腺泡型横纹肌肉瘤细胞系的建立! k* J, R5 `* l0 e7 U# t3 U
十一、人恶性胸膜间皮瘤细胞系的建立
& c7 L4 {3 v$ C& e* C- Z$ T. C5 a十二、人乳腺癌细胞系(HATTORI)的建立
}& s/ n( p" \第六节肿瘤细胞培养的应用0 P; G4 i5 }6 @; b" h
一、肿瘤细胞对组织浸润的体外研究
) J3 y0 @# B7 F' ]% {2 m二、人恶性肿瘤细胞的动物移植瘤研究
& g! v6 e8 B; `三、培养肿瘤细胞的体外分化实验
4 W8 p. G/ {. N" W5 B四、培养肿瘤细胞的凋亡诱导研究4 d7 }8 A7 Q5 e, }
第十六章病原微生物的培养
& n+ N& G0 B+ B) U) O第一节病原微生物培养技术概论
3 F- C- |; @8 E+ E一、病原微生物培养的基本原理
0 {! K- O4 I( K$ w# X- t* p; B二、病原微生物培养的基本方法和技术1 V1 ?+ F( G2 f' {1 Y' m) J
三、病原微生物培养的应用' W7 w/ h$ {' t& W* I4 U% K
第二节细菌的培养
7 d9 M0 |; p( C( x9 h$ d% X一、细菌培养的基本条件
2 |) D0 u3 l/ D3 V. T t+ b(一)细菌培养基$ w, H- M2 X$ _: B2 W
(二)细菌生长的其它条件! Q, s6 @' w/ ^# W* T
二、细菌生长繁殖的特点
$ t9 J+ C! J [+ M三、细菌培养的基本技术
) k) w, ^! F1 y% \+ g3 H* d9 T! x4 t(一)无菌操作技术" P- H; |( a; v) v1 E
(二)细菌接种技术
% _/ b/ E) o+ _四、细菌培养的方法
/ V; V! c! z$ V" D: g(一)一般培养法
" b3 c/ W% e: }7 l(二)二氧化碳培养法6 ~. v) a, x9 W# y/ Q
(三)厌氧培养法# E5 B/ v5 Z; X
五、各别类细菌的培养
6 K/ X. P4 K9 L% C5 B(一)致病性葡萄球菌的培养9 e. i6 m; \3 t6 ^! m5 \
(二)幽门螺旋杆菌的培养
m0 N2 E5 G- q6 w2 S( A(三)结核杆菌的培养& q7 v- d& ]7 w% Q' H% r y
(四)淋球菌(淋病奈瑟氏菌)的培养
/ p' n; \. E0 H第三节其它类菌的培养
" o, e& \! U! x) l一、放线菌的培养
" ^& \4 _8 O' L& c+ b% v(一)放线菌培养的一般条件
# ]8 h, F1 A+ h% v# x# m(二)放线菌培养基% T$ `% t$ B6 F" \7 F9 Z, q7 e4 v
二、真菌的培养1 e. U, K) v4 u% X2 O7 \1 R
(一)真菌培养的一般条件( @' ?# u+ J% c; b2 {$ }* ]0 B: O
(二)常见致病真菌的培养基
2 O# q6 w% R: O# E0 @三、支原体培养
6 P4 _; d: _8 u/ @% N% ^(一)支原体培养的一般条件
5 t' L6 u! h; X" F(二)常见病原支原体的培养基, H) I7 A* u0 z0 z5 B
四、立克次体的培养6 @& G+ b% \- l! r0 T% I9 ^6 w' q
(一)立克次体培养的一般条件
* H& n: p- D( S2 ~(二)常见病原立克次体的培养
( L9 v$ `+ L+ m' ^9 G五、衣原体培养# y1 |% P) K& F2 }
(一)衣原体培养的一般条件
( t* F, B/ Z& W. X8 z(二)常见的病原性衣原体的培养7 \% m7 {) r! k# J4 k0 o/ |& o, r
六、螺旋体的培养/ U. j* k. V0 p9 `1 s. H3 k8 M. _
(一)螺旋体培养的一般条件
: d/ a: d2 L4 j$ D7 v(二)钩端螺旋体培养基: M. B+ S3 F2 M! L7 q F
(三)常见病原螺旋体的培养
5 V3 _+ I+ w: {" n# h: R: h! t第四节病毒的培养
/ v7 c3 T: [' g2 T M. z一、宿主细胞培养法: |6 M/ e- a$ c0 M/ n9 J D
二、鸡胚培养法# C3 J) d( ?# h1 B0 U: O
三、各别类宿主细胞培养法
+ w+ Y& S( L. T8 m- L+ E(一)EB病毒的培养
9 k5 b' H" f( q1 m(二)脊髓灰质炎病毒的培养
! }# V" t: a4 s1 c7 ^! @3 O(三)乙型肝炎病毒DNA转染细胞系的建立和应用1 X3 g8 ~! L3 r A6 u
第十七章医学寄生虫的体外培养3 `) C; S+ _, S. W) L
第一节寄生虫的体外培养技术概论
+ B5 T& P# ?/ B一、寄生虫的营养与代谢特点
+ d5 y. Y# t3 |' o' h& I二、寄生虫的体外培养技术类别
5 ]; L: E& M3 A2 a(一)寄生虫虫体培养 B/ ]; \9 r; O3 C2 L
(二)寄生虫细胞培养8 T- v2 Q, c) ]2 u# }2 B7 r8 w7 e& E
(三)寄生虫的体外培养常用培养基
/ @0 t& V+ I. Z. \% ]三、寄生虫体外培养技术的应用! m) D1 j. N& B
(一)在生物学研究中的应用! O1 v+ a2 w$ A: }! a: E7 b
(二)在病理与免疫学研究中的应用
- Z& o( `. h- V* F(三)在药物学研究中的应用$ V# u8 S9 k" S9 Z, H" s
第二节疟原虫体外培养
! `+ q* x( t: W6 m* @- u一、疟原虫红外期体外培养" G$ ]. L3 P* }% w& P! H& X7 X3 C
(一)约氏疟原虫红外期的体外培养3 E' W6 R' @% e: p6 a
(二)人疟原虫红细胞外期体外培养
5 H5 R, u) k/ t+ C" T二、疟原虫红内期体外培养 [9 `; h+ D0 C1 f
(一)体外长期连续培养. N/ ~" H: y, c9 E. R: c
(二)同步培养法
# S& a. h' S9 M(三)疟原虫冷冻保存技术( Y! i4 z* J+ ]3 t" e% m; h# ?2 O
三、恶性疟原虫配子体的体外培养4 ]6 N, _" W3 E2 L
第三节机会性致病原虫的体外培养( u+ e/ S2 M$ z1 K: Y
一、弓形虫的体外培养
1 D( [5 U- D' P, m+ Z(一)速殖子的培养方法之一：单层贴壁细胞接种培养法- |3 ^" @5 p% O
(二)速殖子的培养方法之二：悬浮细胞的接种培养法
, \* b3 v- b6 e# v" o(三)速殖子的培养方法之三：在鸡胚中种植的培养法$ K% k# p9 ?; G7 }
(四)包囊的培养3 H5 t, Q4 e/ z- A* q( z, D1 P
(五)弓形虫的冷冻保存技术% a5 o+ O( a# R- _( Z& y: u' w G
二、卡氏肺孢子虫体外培养3 |, E2 ~+ N. A
(一)用非洲绿猴肾细胞系培养卡氏肺孢子虫
( h7 J* L/ b4 X" |, I1 o(二)用胎儿肺成纤维细胞系培养卡氏肺孢子虫0 B9 H1 x: Q; d. ^* t
三、隐孢子虫体外培养' p7 ?8 c: b6 T- v$ ?0 Q. _3 d5 \2 B
(一)在组织细胞内培养
+ t. i. F3 M! ~(二)在鸡胚中培养# x8 F6 K% h r0 I
第四节日本血吸虫体外培养
8 Y8 f8 a f0 D/ {" X% R一、培养基及培养条件# j* ?" s8 }7 D2 J
(一)培养基的种类
% A% V9 ~: P- K0 Q! O: a6 ~/ ^1 Z$ x(二)培养条件- Q5 @; w+ N' q( T
二、各期培养方法
/ G2 }7 w* z) ], u- d' O3 u; X(一)尾蚴人工转变童虫体外培养. T) k: J. t, ^' K0 o# _
(二)肺期童虫体外培养
; B5 L( c6 B7 D+ g8 D* Y(三)成虫体外培养
6 M* d' z& ~& E$ ](四)虫卵的体外培养& J; G! L# j G$ ^( |0 k
(五)毛蚴至母胞蚴的体外培养
- F5 E6 T n2 y/ Q(六)子胞蚴和尾蚴的体外培养! h/ h: q, |8 s- J4 C' ]
(七)血吸虫成虫和童虫细胞的培养% K1 s' F; T; o$ ?& U
第五节棘球绦虫体外培养
1 H; L" T c# ^一、细粒棘球绦虫的体外培养
' V. U. ?+ {0 G( v* r2 d(一)囊型发育
, ~2 Q; X7 p! s: r( n+ X4 ^5 g(二)链体发育
4 F' A7 K& C7 |9 B5 v3 }, z0 \(三)成虫体外培养
0 L9 K9 a9 }; V# d: M(四)细胞培养. B3 f9 L. x6 Z, j- n) o5 X* {
二、多房棘球绦虫体外培养7 B8 F3 q9 ~# ~' M" q+ g) w
(一)多房棘球绦虫虫体培养
/ q" s: b2 O5 K" `9 C$ h(二)多房棘球绦虫细胞培养
1 R: S% b0 o3 V4 n8 C) n! B第十八章无脊椎动物组织的体外培养
+ Y2 D: T, `/ y/ o9 A# h7 G第一节无脊椎动物细胞培养的基本方法和技术/ f1 `, ~: n$ u
一、体外培养无脊椎动物细胞的基本条件
" V8 B5 r$ n$ U5 Z2 \(一)无脊椎动物细胞培养基
% Y& i$ U# z6 E* W# M# R$ C(二)无脊椎动物细胞常用培养基的配方
" O: q1 T2 Y% h. A(三)昆虫组织培养基的配制
4 T& }' x3 Q( f! y0 Y: v& u(四)体外培养无脊椎动物细胞的其它条件
8 h! B$ m1 E5 e& }9 ?二、无脊椎动物细胞的原代培养
) x0 f. s) g2 C$ s& a. i三、无脊椎动物细胞的传代培养% p: F2 Q; x/ W. v9 G
四、无脊椎动物细胞的悬浮培养
' q& I6 L7 t' X+ `) G+ ]五、培养细胞的低温保存和冷冻保存- ?) } d( b, @% s! T
第二节无脊椎动物的器官培养
+ k0 P. A4 l3 E* Y( S一、软体动物器官的体外培养* `( P! b! n4 p8 k2 d
二、蠊翅目昆虫的体外器官培养/ {7 x' Z0 R2 ~* M, Y0 w8 \
第三节无脊椎动物细胞系(株)的建立/ B9 h6 w- c# {' m" Q
一、昆虫细胞系的建立
@: {* u) s) U- f(一)鳞翅目7 b. g- S$ G; {2 G3 T
(二)双翅目6 Z/ @/ L' x; b g3 w( d
(三)蠊翅目" n5 x5 q M* n- [0 b* N
二、昆虫缺陷型细胞株的建立
F' c; O2 E5 H1 u4 Y5 O: e三、软体动物细胞系的建立8 H0 r8 B k- R4 M
(一)蜗牛细胞系的建立
/ u& J: [: U7 ] U% Y1 g(二)牡蛎细胞的离体培养) T" F$ L. y6 r* D+ A3 Q
四、蜱螨(扁虱)细胞系的建立
/ q/ \8 ^" S; Z% _五、建立细胞系的注意事项
, f0 C9 G3 m; S7 Q7 A第四节无脊椎动物细胞的大规模培养) k3 |3 @' }3 p
一、大规模悬浮细胞培养的添加剂7 C4 N' v( F# l% U1 h$ J. ]
二、低剪切力连续生物反应器
6 K! S9 ]/ R8 j# S) }6 L三、有血清培养基扩大规模培养昆虫细胞技术
+ |" {' t F, l: t. U/ {, U! C# [# f(一)扩大规模培养的主要材料5 V0 D6 }& J) ?& p9 t1 r
(二)扩大规模培养方法
3 A8 b( u4 b- M0 ^6 C6 N# f四、无血清培养基扩大规模培养昆虫细胞技术- v, _2 Q$ ]$ ^0 l& U" Q) v& ]& \
第四部分体外培养技术的应用
: `5 _" K. j' w( H9 D3 D第十九章体外培养的应用技术8 o* ^+ b; b% V0 g& z. {1 I+ D5 o
第一节细胞分化与体外诱导分化
8 ^$ H* f' @' u" e: w一、正常细胞分化
& r" J+ M6 `# v U" |# V二、EC、ES和EG细胞系
" M2 M( l" E& f- ]三、ES和EG细胞培养和建系的基本技术) E; e, t" u# x8 M, y
(一)饲养层细胞
) P; u1 ~ w$ |1 m(二)胚胎细胞来源
7 j! Z( o* s- s- w0 U( z(三)ES和EG细胞的培养过程 B# g& A( R9 a% A1 w3 L
(四)ES和EG细胞系特性和鉴定: d7 R: ?$ C& {# e
四、ES细胞体外诱导分化
) j* y3 g9 p* ?) C A, [(一)ES细胞体外诱导分化的意义7 U! \+ ]& M# x, r' e
(二)ES细胞体外诱导分化的基本原理- ~; V6 R$ `* \3 j' E
(三)ES细胞体外诱导分化的基本方法7 Z& G5 c' I! M' \% r9 R/ I
(四)ES细胞体外分化的细胞类型' u9 I6 Z, R# a
五、诱导分化细胞的永生化
, N' {# H |8 z4 P第二节细胞融合技术3 ]/ T" P8 Z% Y% U& h9 Q) T' b
一、病毒融合法/ h% D% ?3 L$ D$ G5 J* `9 J) W
二、聚乙二醇诱导细胞融合法7 ?9 ~1 A' X7 k7 [( y T
三、电诱导细胞融合法
( ~! J" b( F S/ J第三节体外受精技术# B0 e& M; A' r% X
一、体外受精的基本实验条件
' H# r$ \; Z) c" `# ]/ G(一)体外受精所需的主要仪器设备和消耗用品' {2 k/ B4 F) Z8 N
(二)体外受精与胚胎培养环境的设备和管理
9 A: Y* p# q2 d! K& t9 W4 X(三)胚胎培养液& ]2 i& G& }0 |! g$ E% j
二、胚胎的体外培养
+ c, }" y! @) H, J$ y- N(一)卵母细胞的收集- {' J% y) H( B; b7 ]9 |; F
(二)精子的体外获能
- x( @8 k/ J) c; }9 }' z; }: v(三)体外受精
4 E, J# }5 ^" ~4 Q. U( E2 E$ _6 {(四)卵裂观察及胚胎评分% D& k k; q$ Q/ p, @% N
三、胚胎移植 l J f8 v9 h7 v
第四节基因转染技术与体外细胞转化
3 }! E/ S- p7 ?, m' [/ o一、基因转染技术, F! `0 i# U8 j. ]( e s1 ]: A' P4 h
(一)待转染细胞的准备5 I0 h6 {6 o4 \# m! k
(二)质粒DNA的纯化
" }8 Y9 B) }6 ^( K, M4 D7 h) y' E(三)基因转染的方法
- L7 w7 [5 G! P# b' Q9 g(四)转染细胞的筛选
* @1 L1 [9 z( d2 v! u二、体外细胞转化7 }6 p# |+ w. K. X
(一)细胞转化的概念与细胞转化的过程
. C- n; h( O- K4 v(三)诱变因素诱发培养细胞转化的程序
: E- Q A S/ d6 k! V8 a3 G% F三、转基因动物; Y' x% R$ N3 w4 F/ i0 f& s
第五节杂交瘤技术与单克隆抗体制备技术
3 h3 g% b( G N* X) g8 O2 m一、杂交瘤技术
3 a$ \2 {" {0 n, D/ m7 J(一)B淋巴细胞杂交瘤技术的实验流程4 p. y1 L4 Z3 j
(二)应用于杂交瘤技术中的培养用液
9 m1 [ s7 J$ ?$ p7 e(三)杂交瘤细胞的染色体分析
- u( T0 ]" [* t2 b2 [% s- C6 h2 @二、单克隆抗体
9 m" Y; o; o: N g# }/ Z* \2 R$ C1 f+ S(一)单克隆抗体的概念* k. k& U" ~1 g
(二)单克隆抗体的鉴定0 y, v3 U- C% k2 T. s
(三)单克隆抗体的生产和提纯
! ^3 |) D6 f8 `(四)单克隆抗体技术的发展6 U _& T; H+ l. N2 A# I
第二十章动物细胞大规模培养0 x/ F5 ?7 D' M; i
第一节动物细胞培养有关的特性6 w5 e9 Q" y. C$ U/ q+ ~
一、动物与微生物细胞的差别
5 N/ H, |, U' D0 B4 x H; q2 b二、动物细胞生长特性
9 D% }5 z( R4 I# Q/ @第二节发酵
% Q3 M2 X% }! e; i4 r一、培养方法
/ x3 ~( W7 H( H0 q$ v" t(一)贴壁培养
# i0 u5 [9 F4 M) S$ ]. y9 n; X(二)悬浮培养: f4 T ^7 ]( f( q9 b
(三)固定化培养
- \! F7 v. ^5 }* `% K二、动物细胞培养的发酵工艺1 j' G1 Q4 O' ?3 m' J. O
(一)分批式培养% x2 ^+ Q7 x: }# F' {
(二)流加式培养
! t( `: z3 w" R3 j(三)半连续式培养) S( ^) v, a: F) M8 t" O% H
(四)连续式培养5 } {' V0 f! l J0 N0 R
(五)灌注培养/ a5 c- g8 k" q$ I% ~% @; ~6 l( L
三、发酵工艺条件及其控制
. P3 N. d# h6 [4 q1 A' c H(一)培养基' Q7 m! s* v' }+ _1 x
(二)培养温度的调节控制
- d7 L* D) |/ r(三)培养液酸碱度的调节控制
6 J# g# {$ ~/ n(四)溶解氧的调节控制
4 d# ?' F% E* i- g$ _% h0 i四、动物细胞大规模培养用生物反应器
: h7 K5 ], p; y" a' @(一)搅拌罐生物反应器
0 I9 X$ r$ g& [4 \(二)气升式生物反应器
& Y! F' \8 d7 _- N0 X- K(三)鼓泡式生物反应器
d* z& T+ c" U5 Q! k(四)中空纤维生物反应器
( M9 G2 k* j/ m9 \. J第三节动物细胞微载体培养技术 Z7 x' x7 V- w! g9 S; R" r! L
一、动物细胞在微载体表面的贴壁生长机制
0 v0 O3 u) Z0 Y+ @6 a二、微载体的主要特性
; i6 J1 p+ ~! L1 Z三、微载体的种类及其性质8 L/ m1 l4 u8 z B- S; t- l. L5 g& |4 L
(一)交联葡聚糖为基质的微载体- l# S5 D; B4 y( z# ^4 Y" b
(二)塑料为基质的微载体
" {* p' E O* v/ ^(三)明胶/变性胶原微载体
% A) d! l! t6 h% ?(四)玻璃为基质的微载体) L% }9 B# T8 L1 T% d. _
(五)纤维素为基质微载体
2 L4 M4 z0 A7 ]$ B' e! }- g9 ~(六)液膜微载体- }# l* i$ d; J3 q2 a; s6 @
(七)大孔微载体3 G' F/ w2 p0 k) M( H: u u
四、微载体的选择
2 r |3 i/ T/ R. f5 m第四节动物细胞大规模培养技术的应用
* Q5 i+ V" q& l$ _" `+ o) S一、在疫苗生产上的应用
! i% ~! O5 O2 s* K9 }6 I二、在干扰素生产上的应用+ ?2 ]% e* q! s0 g9 v
三、在单克隆抗体生产上的应用- |5 z, o3 B1 c6 M* j
四、在其它基因重组产品生产上的应用
6 J8 M, Y3 D5 ?8 M. E$ o$ o第五部分植物组织细胞的培养5 [' O! |. j+ M$ ~
第二十一章植物组织细胞培养的基本原理与技术( H! J0 d- D9 J
第一节植物组织细胞培养技术的概念和类别# D' g+ `4 a% x1 X5 n% B
一、植物组织细胞培养的基本概念' ^% C8 m+ ?8 B. `
二、植物组织细胞培养技术的类别7 X( B# o0 J& I7 e0 d
第二节植物组织培养技术的发展简史
: t3 j$ S5 }( x, U! ^一、植物组织细胞培养技术的创立阶段
6 d2 K7 Q% G p: y+ R/ `! o7 ?! l& ~二、植物组织细胞培养技术的发展阶段
" e) ]1 n6 k6 [/ z1 E* p+ z! s三、植物组织细胞培养技术的应用研究阶段6 h6 P9 L3 f3 D6 h- K
第三节植物组织细胞培养技术概述5 I' c6 S. d3 x$ ?" S
一、植物组织细胞培养的基本条件
3 s1 O8 Z- }& h3 i8 E9 \) }: m2 `(一)植物组织细胞培养的营养条件
, r; H& I9 w/ j$ q1 b! {( D(二)植物组织细胞培养的环境条件
! O7 p. n# b7 y& r9 G& v5 i二、植物组织细胞培养的基本方法和技术
6 e3 O- [; P6 P0 }6 J(一)植物组织细胞培养的基本方法
8 X- {) F; s Z# a(二)植物组织细胞培养的基本技术6 i6 Q- |- @: D$ b4 s
三、植物组织细胞培养的基本程序9 _4 e" |" }5 T
四、植物组织细胞培养物离体生长的基本方式
4 J) L! O, U3 Q! a. P5 i3 [(一)直接芽分化的方式
/ g' y* N7 I' m3 E! Q(二)通过愈伤组织形成的方式
; s; O# t9 @5 |2 |" a" R6 D(三)胚状体形成的方式
2 T8 q/ O% }& d五、植物组织细胞培养物的鉴定
9 z) T% @. g1 {# i% |6 z(一)植物组织培养物的组织学观察
* K0 ?+ `* U( l! X. R; A1 _, n(二)植物组织培养物的染色体观察
6 M' g( v7 ?: E8 U8 j1 l. t# B六、植物组织培养技术与动物组织培养技术的异同5 B, ^$ t/ Y0 P9 |4 D! V$ x. T5 t
第四节植物组织细胞离体培养时的生物学特征
3 b1 v& X) I8 _ S' F# `一、植物组织细胞离体培养条件下的全能性- J/ R: n) f$ G. W. I
(一)植物组织细胞的全能性具有普遍性. \* O9 r: i, t: ]0 Y! g
(二)植物组织细胞全能性实现的途径
3 k8 s8 Z- a c2 i二、植物组织细胞离体培养条件下的突变性
0 n( g( L u5 R0 z9 {(一)植物组织细胞的变异性具有广泛性
! V4 W8 F7 }% a: l2 _' B(二)离体培养的植物组织细胞变异机制, d8 w7 }8 Q8 q( i
三、植物组织细胞离体培养条件下的类减数分裂现象
4 B# D( g: c. [2 }9 N2 `(一)植物组织细胞类减数分裂现象的存在
3 `8 N- \2 B( j" j- s d& X4 C2 h(二)体细胞类减数分裂发生的机制0 }* D& f/ r5 Y/ |3 l8 F
第二十二章植物组织细胞培养各论, I5 V# N6 j: O, p/ C# |
第一节植物的胚胎培养
, J- a; D; L% j9 I一、植物胚胎培养的概念
: c6 a/ t! y! A# x/ n5 c二、植物的幼胚培养
, \: W) E( S4 \. [9 H(一)幼胚培养的基本过程
$ q$ k, m2 n4 _6 q3 v9 ^(二)植物幼胚培养的实例. @' _3 e3 p$ g2 ]1 K" L
三、植物的成熟胚培养+ i9 x' E. j' f ]% n* C5 w
四、植物的胚珠培养
8 l7 O7 z3 M' T5 y, V! _# W(一)胚珠培养的基本过程
3 A6 v4 y) Q+ y/ K$ q' K, Z% ?' v* q(二)胚珠培养的实例8 u0 Z+ o4 E1 h0 k# R6 K
五、子房的培养
" t4 P- i$ b- A8 W3 O: h4 R3 p(一)子房培养的基本过程& m G! N a8 U$ n4 A+ ]
(二)植物子房培养实例0 Z: z3 s9 }. f1 x1 y
六、植物的胚乳培养
( B1 V- O: h' P& P/ s(一)胚乳培养的基本过程
w0 N5 t( ^9 J(二)植物的胚乳培养实例3 x* K1 Q: |" h, p- P
第二节植物的器官培养
3 c# Q) Y Q' u9 w+ @" }一、植物器官培养的概念1 } C7 q8 l( V
二、离体根培养
* K1 g! a9 V7 y- V# }6 v(二)根培养的基本过程
: Q) m8 X. x! Z4 R2 I2 V" P(二)植物离体根的培养实例% ^8 Y9 q1 ? t G. S
三、离体茎培养& W/ w3 j5 g/ E0 F
(一)离体茎培养的基本过程) O7 x. V, r- R6 |2 o' s5 K
(二)植物茎尖培养的实例
- l; r" t: s2 |: B( a四、离体叶培养
! D' c7 i9 Y+ v" |* o(一)叶培养的基本过程
7 j2 z7 p# `5 e(二)叶器官培养的实例/ w3 c5 [" F! x7 o. C" k: ?
五、植物花器官的培养
# d. o6 ^( u7 M" X" @9 w. i(一)花培养的基本过程
& C' R$ ?! ]" C9 L(二)花器官培养的实例
% O2 ^: a3 K- g3 N- Z5 p: v六、植物种子和果实培养
9 e6 s5 T0 w6 N" `7 H v(一)种子和果实培养的基本过程* z4 i& X T0 ]3 d3 x
(二)植物种子和果实培养的实例
. ~* \: k$ P$ _. G0 w! L第三节植物的组织培养2 A- ~: Q3 C( k( B; J
一、植物的组织培养概念; I1 Q1 Y/ K; C) e
二、植物愈伤组织的培养
* \2 Z& j \0 c9 Z7 A& U$ ~# z三、植物胚性愈伤组织的培养* T: j; n/ y3 T1 j
(一)植物胚性愈伤组织培养的基本过程
$ m$ G+ t( |/ y$ ^& @. h8 |(二)植物愈伤组织培养及植株再生实例
" \! u* n7 s+ l$ E' \第四节植物的细胞培养& I2 A/ M3 M2 ~: X
一、植物细胞培养的概念
! @( s, N1 Z' N二、植物细胞悬浮培养- S: G* F9 r8 ]" b
(一)植物细胞悬浮培养的基本过程
' i- }% q* b& P: ^(二)悬浮细胞的培养实例
+ G2 w1 {8 [+ ?: [三、植物的单细胞培养7 B4 s, ?$ ^8 f* F& \* k
(一)植物单细胞培养的基本过程& w4 d; ^8 c" f _" d7 a
(二)植物单细胞培养实例* ?' f6 X% e5 H v; H! A: ^1 B7 S g! d
第五节植物的花药与花粉培养2 ?" } |" m9 Z7 `. M% o: a# Q3 Q
一、植物花药与花粉培养的概念, _6 ]# q/ [0 L) D, }( n7 J
二、植物的花药培养- Y6 I" I' W, H |
(一)花药培养的基本过程
7 V; H, K- d$ ]" t/ v- F' t3 ~9 R1 M7 e(二)植物花药培养实例
( j$ |! B( B/ N& p9 n" S1 X三、植物的花粉培养/ C- q+ K/ W1 X% o+ A9 D
(一)花粉培养的基本过程+ _7 s' N3 K! B: J' Z
(二)植物花粉培养实例
w/ r3 v( m2 ^; a1 l第六节植物的原生质体培养- i! F1 B$ M: M1 _# n7 Z4 m! u
一、原生质体培养的概念8 d/ Q; h0 [* `/ E% U$ } ?. R
二、原生质体的培养
; D& u+ i+ \% r. g, `# {/ |(一)原生质体培养的基本过程
2 u3 R, l9 b4 U1 G" f f D- C(二)原生质体培养实例
t) s( h. A% R+ L4 p" g第二十三章植物组织细胞培养的应用 K- ~% M5 U( p5 X( t% d( M5 S
第一节植物组织细胞培养的应用技术& I# S7 P! b7 W9 s7 m, E
一、植物基因转移技术* T) E( t7 @: d# z! [
(一)植物基因的获取
! k2 a0 ?/ U9 v a' s(二)植物基因的载体1 S. ?5 |6 G3 z3 a7 F
(三)植物基因的转移方法
* v) l/ F4 t8 q% s1 F- {2 f" p g# w(四)转基因植物的检测% |2 [+ O$ L K1 u% a2 n$ F
(五)植物基因转移实例
) O7 M/ W% O6 f8 c8 ~二、植物体细胞融合技术# `1 j. A+ o; r( v3 v
(一)原生质体融合的基本方法
- r1 G6 Z; _2 R# x% @) I) a(二)原生质融合体的生长发育
: |0 G, S y% h# U$ q# \* y/ E(三)原生质体融合实例( t/ v& O; E- C, u. T% s
三、植物体外受精技术2 n4 b8 r/ R: j$ @2 d8 c0 s7 S
四、快速繁殖植物技术; ?6 Q. Y: [, z J( G& }
第二节植物组织细胞培养在农业上的应用
, W7 V# O8 z- ^* U, q: b% z# U- \$ v一、利用植物组织培养技术改良植物品质
/ v. Q& ^/ N: K/ y2 P, \& ~(一)利用植物组织培养技术进行倍性育种
2 H5 @$ G0 p- B) P0 p(二)利用植物组织培养技术进行远缘杂交育种7 }+ @- ~5 w: m6 _6 c* I" o4 |+ O
(三)利用植物细胞培养技术进行突变育种1 o0 E$ p$ }1 T9 [0 o
二、利用植物组织培养技术培育脱毒植物
4 o' s' v _" n6 Z(一)利用茎尖培养技术进行植物脱毒
1 V! ^! x7 W3 D, | U- O4 D(二)利用植物组织培养技术进行植株脱毒
4 V" |) U- ~; v- i% s- d(三)利用植物组织培养技术快速繁殖植物
$ k, @5 j7 ~" a三、利用植物组织培养技术保存植物种质! q5 @) O9 u! v# F1 C
(一)植物组织细胞超低温保存的优点
# j6 Z$ A% Y+ p6 o(二)植物组织细胞超低温保存技术
8 a% j: s/ P( W+ v& n(三)植物超低温种质保存实例
k* U8 L5 O5 K/ @2 x四、利用植物组织培养技术合成人工种子" P: I7 [! y' i7 N, B
(一)人工种子的特点
# z* T: R; Q* O- R5 h8 W$ L(二)人工种子的应用前景- Y* Y6 w+ ]3 E
(三)人工种子制作的基本技术
2 c w0 G1 g3 ~9 e(四)人工种子制作实例( H+ U4 ?( ]: A& K& v
第三节植物组织细胞培养技术与植物产品生产
" F- y* V" }& D0 o9 r; \# m一、利用植物组织细胞培养技术工厂化生产试管苗0 f3 u9 z3 c2 t; Q, C: D
(一)用植物组织细胞培养技术建立植物的无性系
4 @# k/ W% W$ [(二)试管苗工厂化生产实例: E& h' h [: U; Z
二、利用植物细胞大量培养技术生产植物产品, u& O- p1 A" P6 a, Y
(一)培养的植物组织细胞积累次生代谢物的特点
! H% I- ?. s; H7 N6 o7 {, J% s(二)培养的植物组织细胞积累的次生代谢物之类别4 O; @/ n+ N7 L y
(三)利用植物组织细胞培养技术生产次生代谢物的方法7 ^! ?5 B5 O! |
(四)利用植物组织细胞培养生产次生代谢物的实例! H1 o& G) x: X- p4 I
第四节利用植物细胞培养技术生产植物药/ z* c8 @. K( I6 s$ V6 W. I
一、利用植物细胞培养技术生产植物药的优势和不足+ w' U+ _0 U W5 u' e0 h( S W
二、利用植物组织培养技术生产的植物药的类别
/ G& O( D/ g$ ~6 w+ Z! W三、植物药物生产的主要技术" c% u3 E: P! r# }
(一)发状根培养技术
0 S' G+ ^4 q6 D! P( X(二)两相培养技术
; U0 Y) f* G6 z! r# _(三)反义技术7 Y; a' s G' H! A( H# u( ]( J) _
四、利用植物组织细胞技术生产植物药的实例; Y5 p5 a1 a+ q+ n; C1 i) v
五、植物药工业化生产实例% Y; n4 l& B; y5 k7 l; H) C8 a/ e
附录; I, T. D1 p8 m& {3 T; h2 k# y
附录Ⅰ无血清培养基及添加剂供应商一览表
4 D Q9 q/ k+ `附录Ⅱ水合物的等量值表: u& o% I; b0 T8 z
附录Ⅲt界值表5 {7 n* _# p4 g9 [
附录Ⅳ离心机转速(r/min)与相对离心力(RCF)的列线图7 ?& G7 ]7 {( f, I& k' g2 s
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发表于 2011-3-20 08:51
发表于 2011-3-21 11:20
