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; n" [0 I) Z; p' y9 k! z' `目录: % B3 |( G5 z* N$ U8 G6 b- N5 x
一、体外培养的概念! l5 ?; o3 O# w& h' f
二、体外培养技术的发展历史
1 [1 A+ w Q% ] Q(一)体外培养技术的创立6 a& n- z3 _+ f
(二)体外培养技术的发展( W9 t! ]! D$ h# M7 U
(三)我国体外培养工作的发展情况- V1 A2 z& S0 o2 E) m
三、体外培养技术的主要类别
6 t; V0 D$ _! T# x0 ?( j/ R四、体外培养技术的应用
! m1 m, ^" @3 g; S4 P(一)在组织学与胚胎学以及细胞生物学领域的应用( E. w- J. M, F- T/ i" ?! n
(二)在肿瘤学方面的应用
2 V: T& L0 m4 a(三)在微生物学领域的应用
; T1 c# P3 h$ h9 u" R: m6 H(四)在免疫学方面的应用! i4 n, f' u! e5 X6 Z" G: o
(五)在药理学领域的应用
2 ^5 ^3 B# c! \8 L* s/ p(六)动物细胞与微生物大规模培养技术在生产实践上的应用( I3 \' G4 e; X: c4 y
(七)在现代医学领域的应用7 `1 P G# ?6 K4 s- W0 `
(八)植物组织细胞培养技术的应用6 ^3 ~* ?: p6 i: \7 L% j
五、对体外培养技术的评价( ^* z: G1 v1 ^: u
第一部分体外培养的基本原理与技术% f: q3 K; l0 r' X {% O
第一章从体内生存环境到体外生长条件) _' N% ^% v9 z; J8 Q
第一节体内细胞生存的营养条件3 ~( W# l& x6 m; H3 P
一、水2 a" `6 G$ N; _+ [
二、无机盐类% D- u: v9 R0 I; I2 v: ^# N! \& \6 }
三、葡萄糖
& L/ c0 f) Y& _/ ?: b! S5 d6 J四、维生素! B7 c' W3 A5 ^* X" j u/ w
五、氨基酸' c6 z0 N9 u/ U5 h7 y
第二节体内细胞生存的其它条件* m4 r% `) f* f2 A% S5 k/ v, D! S
一、温度- J" x0 g4 w% F5 M$ K4 }3 I5 C" W: ^
二、氧和酸碱度7 E$ K% U. F d
三、体液渗透压" w+ d! t$ N4 J8 s
四、细胞之间的相互联系
) ~6 t" n7 M) k3 [" S& ?2 p S$ E" s第三节体外生长大环境8 V- ], b: C- c
一、体外培养实验室$ g% P% f7 N1 ^* f; v& c" K6 z' Z
二、体外培养的设备和器具
) a* G0 e w* P% ^8 h(一)大型设备和仪器) J7 p% k6 V; V9 s! T: F" m" f
(二)培养器具
; d0 o1 S* Z4 q+ O5 ?2 [+ H第四节培养用液
) I" _4 Y+ t7 u7 W" }; q3 G一、水与平衡盐溶液' k, p! d3 R+ H3 |+ r! Y6 g* U- n
(一)水与缓冲液2 ` K' j# B$ {
(二)生理盐水与平衡盐溶液3 @/ k+ P, g. ^9 \/ F* Q/ _
二、培养液9 T6 u8 A# I3 L+ j8 E. d
(一)天然培养基
3 r5 s$ h: P& z/ @(二)合成培养基
1 U1 l F+ F- O) ~+ K, Z(三)无血清培养基" {0 _, P# u4 N$ D
三、体外培养的其它常用液" @. l/ w" ~6 o* N+ c
(一)其它常用液的类型
z& R1 j& N3 L; J(二)其它常用液的配制' A( Z5 A4 F8 b8 j$ B8 V6 y1 k% T
第五节细胞在体外生长的其它条件3 }5 ~9 H& }& Q& J5 F. |9 N
一、无污染的气、液相环境' P& @! M& a1 d8 t: Z5 [9 E
二、温度9 h, E( J" f4 ?+ K0 S( l* w7 _
三、生长基质 x4 z' l/ m! r% [# Z
第六节清洗和消毒: n/ J/ w# X3 c. D7 u
一、培养用具的清洗
4 V* j. b' F0 p" {. L% t(一)玻璃器皿的清洗6 o6 f+ A1 ]1 W2 S) O6 U
(二)胶塞和塑料用品的清洗
# K( T' z5 J) P! l3 L6 P* @3 b(三)清洗后物品的包装! |. _" M8 }8 j' a' ~
二、培养用品的消毒和灭菌8 Q' e; d2 V6 C% b3 i( _6 I
(一)物理方法% U0 [9 p8 h& A8 H/ U) b
(二)化学方法消毒
% j6 V7 I4 e2 p) T第二章体外培养的基本方法和过程% Q+ {2 \2 R. k& j2 h
第一节原代培养3 g; R+ m" c2 l" R: W1 x1 t+ ^
一、原代培养的过程1 ]- R: g* A5 o) f& X
(一)取材及培养材料的制备
6 F% e3 a+ n) r# t(二)分离(散)细胞的方法! H. ~* ~2 ^! I- V0 H4 C. p
(三)接种与培养过程
! O& c( N. x* y4 M' {/ r, d(四)更换培养液
4 ^3 V0 |2 v5 I) R" ^/ ?二、原代细胞培养方法的注意事项
! p: S1 P1 n2 U* k# ~第二节继代培养
- H0 F, D+ F& |一、原代培养物需要传代的指标
( R& d0 |1 F. R9 j二、传代的过程
9 l$ D0 @, m: O% h, c- k# A' o三、传代培养的注意事项, f7 f! V4 h0 o) w1 ~
第三节体外培养的基本方法和技术$ x4 X6 @( t- j
一、悬滴培养法
/ U6 Y1 }( ?# Y' Y# T0 ~(一)Maximow双盖片悬滴培养法
) W% t2 h4 o4 u. _2 Z1 s- p" t8 A(二)改良的植块悬滴培养法
8 t$ y" g9 Q$ \二、培养瓶培养法
5 [ r8 H, I& o. C# n7 F' {三、盖玻片培养法
; I9 q! b8 y: r四、旋转管培养法% _2 ?2 d% p5 X( g! r/ P
五、灌注小室培养法
" y) `8 z+ d$ s: o" o; W5 c六、培养板培养法
% B/ d/ s+ u' {( Y4 F. C% W七、二倍体细胞培养法
' v9 C/ o) R* e; {4 m4 V N八、克隆培养法
4 x g+ g/ z7 u$ b2 N6 T九、中空纤维细胞培养技术/ o0 q5 @; u5 f- A* b0 x
十、微载体细胞培养法
/ a: A" @3 h. J- c3 C" M1 Q十一、微囊培养技术
2 I& Z0 g" y: |3 S8 o第四节培养物的冻存与复苏
, }3 r7 ^1 G2 J' I9 k8 g一、培养物的冷冻保存与复苏原理
# ?' [! o# P+ ~(一)冷冻速率/ o& {( J6 ?* e! M* B. T/ C
(二)冷冻保存温度1 M5 {3 F3 G1 l* H
(三)复温速率9 g2 y- _( H u* I! b
(四)冷冻保护剂
% ?3 b: K* z r' j& z二、冷冻保存方法( ]3 h! c5 E( D- x5 J; d |1 H& n
(一)非玻璃化冻存方法
/ F7 C B- M( Y) W' ] S(二)玻璃化冻存方法3 x% \1 V; t) [$ |9 |8 B
三、冻存细胞的复苏0 w* T( M9 t9 s/ ~3 E$ {: \
(一)非玻璃化冻存细胞的复苏方法
; r, [8 D9 L; Z' U( i& a( r) _(二)玻璃化冻存细胞的复苏方法
( w, z( Z, ]: Y7 T# j9 n第五节培养物的污染+ t0 ?7 m- a3 ?1 [; W3 s: F, r( Z
一、微生物污染的判断
0 n' ]8 {1 Q' k* R(一)细菌的污染及其判断1 i V" Z8 H% F, R k, X5 O
(二)真菌的污染及其判断3 o# a) v; A* A' Q
(三)支原体的污染及其判断* |. Z4 I0 _ @ B
(四)病毒的污染及其判断
3 \& V+ K, f% K二、污染的预防( G; S( S( \9 z2 O! D0 N4 k5 e
三、污染的排除
' o) o* o6 ?# [7 N& P6 M# b( L8 C第三章体外培养物的生长生物学" H) e5 L: Y* K' b+ n; L: d% ^
第一节体外细胞培养物的生长类型
h) q5 \ T; {一、黏附型细胞
" m& p6 j$ b- m& O( \; \8 F: ?- W, @(一)上皮型细胞
' w& w% _: B- B5 u; E2 l5 r, q(二)成纤维细胞型细胞
: k; J8 b6 R. N% H$ t8 S(三)游走型细胞
1 D# I5 |% z7 V) ` ](四)多形型细胞; k9 ]: h) A- k* V+ H& p% C
二、悬浮型细胞
6 ~1 w' p: b- |$ _0 s" n0 |第二节体外培养物的细胞生物学特点! L" v7 `" R6 C3 Y/ E+ C- q* z
一、培养细胞分化状态的变化0 n" o, t( x& X* D. a/ r. ~8 z
二、培养细胞的增殖能力2 p4 M7 V% ?% @; _( z3 g
三、体外培养细胞的生长过程! m) T4 G2 i" i8 \# q, y. C: F
(一)原代培养期# F4 b6 Y; I$ J3 D, j. u: R5 _
(二)传代培养期* j* h; F6 ^8 t! c4 |
(三)衰退期 l$ C3 S, _- J4 W, s: G
四、体外培养细胞的形态学
5 C, B6 S. E% Q# |1 C2 @ X) I五、植块培养物的生长生物学
# C/ V! P6 V4 p第三节影响动物细胞体外生长的因素
8 P! R" Y( A' L/ x; C5 ]6 r5 ^一、营养成分与生长基质成分对细胞生长的影响
; e/ {- U# \2 s' |/ `# O" l+ P(一)血清的成分与作用3 j( v5 C& s" I7 S B# v# @
(二)无血清培养液的设计及应用
% P2 B* l- e2 ~! ]8 l* x(三)生长基质成分8 C9 I6 Z. ^, M) _+ \5 V# W% r" p5 Q
二、温度条件对细胞生长的影响
" z( b& ~3 X; c. m: v- b0 S三、气相环境对细胞生长的影响
! J- [! h$ r# h, F. y四、培养液的酸碱度对细胞生长的影响
. p0 y8 p6 d# `+ `. S" o& y* O五、辐射线对细胞生长的影响
, j, V" _1 F+ r/ f六、超声波对细胞生长的影响
5 Z$ T7 H6 C" J3 X/ ^% P* q$ k( i7 _七、影响细胞生长的其它因素
8 j$ |/ F5 U6 |4 Z- }* d第四章细胞分离与纯化6 [5 _* l6 X8 c5 X7 w8 @
第一节解离(散)组织制备细胞悬液过程中的细胞分离1 X$ |1 U7 }9 ]$ B3 s9 l$ a! |6 w
第二节利用细胞体积和密度进行分离纯化的方法7 O. \$ f6 A) H$ F E
一、一步密度梯度离心法
1 [/ @) e) `+ v4 w7 s(一)血细胞的分离
5 l# ]" p2 [( g% `0 h5 ~* r% f) a(二)玫瑰花环细胞的分离6 W( y" w- K2 ~* [( N- Z
二、等密度梯度离心法
( n1 A) C9 I; A* r7 J6 m5 h6 i(一)连续BSA密度梯度离心法
% a* U6 h. x) c5 d(二)非连续BSA密度梯度离心法& \; B2 j; @% n+ h o) X2 I
(三)连续Percoll密度梯度离心法
! A4 j: h5 N: W- ]2 ]! X(四)非连续Percoll密度梯度离心法
8 U0 J- R) ]5 o8 a- J三、速度沉降法# s5 F# q/ Z; z+ G
(一)低速离心速度沉降法5 z1 [4 \& q/ B6 U* ]
(二)简单策略沉降法# Q( ?; o+ l/ `2 f' M7 `
(三)简单重力沉降法分离白细胞与红细胞3 L& ]0 c$ h( L0 T( \8 `' t
(四)简单重力沉降法分离粒细胞
' n0 T: F N7 m% y6 P1 t6 `四、离心淘析分离技术0 F" z& e$ G) N& U9 Z
第三节根据细胞表面电荷的细胞分离方法- ? m V1 a$ a3 ?7 O* ~6 T1 w7 q
一、自由流动电泳分离技术# c% o1 o' [) f: s/ j0 `) p- q
二、密度梯度电泳分离技术; h7 l2 N' }# M. @1 }, z6 u
第四节基于不同黏附特性的细胞分离方法. H0 @; k6 d' J, x2 B
一、差速黏附处理 v# H+ C, k; I- e3 v
二、葡聚糖凝胶G10过柱法9 `4 v1 G8 K6 `' a2 n
三、羰基铁粉法" X$ u( B9 C$ \% W( g3 G/ }/ M
四、尼龙毛分离法9 ~$ H! t8 H/ H* n
第五节利用细胞表面标志分离纯化细胞的方法 b- K0 H6 O8 O6 h, T
一、免疫溶解法# q, @4 U' b. @9 @* G
二、盘化法
6 i9 j+ _( D& J1 c$ X- V(一)直接法
5 _. H/ F9 z8 _( b2 _(二)间接法7 |8 A% W) b9 u# q, v
三、凝集素凝集法
+ ^- d6 c$ V C5 H7 E, T! B% _5 O& t(一)花生凝集素凝集法分离皮、髓质胸腺细胞! M, n6 M) t% p! }3 _
(二)大豆凝集素凝集法分离T、B淋巴细胞
~0 D, `5 U# @6 Z/ W& c5 q$ P四、玫瑰花环分离法8 r$ Z- ~: B @) I8 v
(一)E玫瑰花环分离法5 \' I8 j$ t. S- B+ M* i2 F
(二)EA玫瑰花环分离法- Z+ b7 L, ^/ E
(三)EAC玫瑰花环分离法
. L8 Q1 ^3 Z, A) {9 F* j" r五、流式细胞分选术4 q7 F1 I) k, j" y/ j' ]
(一)流式细胞仪的结构和工作原理
+ F' ~2 q, B3 r" ^: P2 h(二)流式细胞术分选细胞
$ ~7 M' t) s$ Q六、免疫磁珠分离技术
' C, }3 b4 `0 ~' H/ u& b第六节利用其它细胞学特性分离纯化细胞的方法6 [9 {. W3 E7 {. V, ^, y
一、反复植块法
n. J; Z7 h7 c1 K二、有丝分裂抑制剂处理
( ?8 N1 p4 T, O- Q# A- k/ l( f5 W% x第五章细胞系(株)、细胞克隆与细胞周期同步化7 I( x; d) m6 T) @/ Q
第一节细胞系(株)的建立与鉴定
2 P3 P! H3 |2 }. ~4 c一、基本概念9 {4 o4 R3 A2 Y
二、建立细胞系(株)的档案
9 e) T! @' M, m' j$ l/ g$ @三、细胞系的鉴定% Q+ `; c3 e7 y" i2 j' @
(一)细胞系鉴定的内容
3 L3 N3 n" ?4 {% @7 e(二)细胞系形态学的鉴定方法- u: R: O: S: Y1 q6 Z0 G& V7 S
(三)细胞系的染色体数目、核型及其带谱分析 X. W* y8 u, M6 [( B& i. @+ N
(四)细胞系的同工酶酶谱检测
% j3 n' u. P9 S$ _# f) x四、细胞系(株)的保藏" E3 W/ i# d* l
五、国内部分已建立的细胞系或株名录. G! e) P; c! y* f$ w" ^
六、国内部分已建立的单克隆抗体杂交瘤系或株名录
2 Z% }' A# f0 C( y/ M七、国外部分已建立的细胞系或株名录3 e3 [. M& \7 F# q
第二节细胞克隆! e- S. Q2 i/ N( X( {
一、克隆培养技术- N) T: Z8 X5 Q( U+ p7 b
(一)稀释铺板法" o, I9 T; u& e( Q
(二)饲养层克隆法
0 q6 J6 E& `5 C4 _9 Y" n(三)胶原膜板或血纤维蛋白膜层板克隆法
5 z$ u& h) F$ W(四)琼脂克隆法) ~2 Z0 z' Y7 t6 |. J
(五)在琼脂基底上用甲基纤维素克隆化
. b* s0 O" o: [% m二、影响克隆形成率的因素3 K* C) X7 C4 x& B3 N, F9 V3 p' `
三、克隆的分离
% F7 z# W+ {+ O第三节细胞周期与细胞同步化
# K' l3 T4 s5 X" U) E8 X0 W一、细胞周期5 j4 D& E; N) ~2 B1 z5 M
二、细胞同步化4 Y' Z+ t: v: y$ F% U
(一)各期细胞的分离
' y8 ]) b; S! l: _2 h(二)细胞分裂相同步化法
( n7 m$ y; K: X! W第六章器官培养
$ |! d: M- d" b U( U# B0 J9 x第一节器官培养技术概论2 i- O9 j! h$ n. m% c
一、器官培养技术的基本要点
: W/ A" N9 ]( C; \( _7 S% F5 D二、器官培养技术的发展简史
5 g/ g! d* b5 b6 R三、器官培养的基本原则
! D6 M: v4 T/ \" ]5 q. C(一)养分的供应与取材! {9 `- H; |* W% u9 {) n1 m
(二)抑制细胞迁移
! P$ F a: }3 A; T四、对器官培养技术的评价
+ f1 y1 _: [7 D Q$ \( `; ~" N9 u五、培养器官的生存环境及影响因素
) I+ e" V6 z5 R; g! q(一)培养器官的生存条件及其影响, ~7 A& n* I; }" A
(二)培养器官的内在因素及其影响
0 I& S2 c7 |1 C第二节器官培养的基本方法
( U. _1 N. R" o3 f2 _( @一、表玻璃器官培养法
1 w }4 R4 k& Q% @; ~! k; b二、琼脂凝胶培养法(Wolff器官培养法)* h8 D/ Y+ o5 N
三、悬浮培养法/ q; p& I; E/ r* N
四、直接漂浮培养法2 O, e+ A' L5 g' x! n
五、擦镜纸培养法
) Q% a) ^. e3 z0 Y0 S六、金属格栅器官培养法
! q% }. B, Q1 D七、琼脂小岛器官培养法3 o" P/ [3 o/ l2 n% r+ H# m0 h
八、陈氏滤纸虹吸器官培养法
$ u1 {- ] W* n X2 u7 v九、灌注式器官培养法
8 W) L) k3 M" [& b9 \4 y5 L, _十、旋转管培养法! e) Z; D% f$ X% k+ p
十一、摇摆式器官培养法5 t! k3 e u1 Q. u
十二、器官灌注系统
. Z6 s1 Q7 o z' q; |十三、鸡胚尿囊绒膜培养法% b$ R+ |$ l8 S& m- Y( i
十四、早期鸡胚胚盘培养法4 E1 B" t+ q& K0 R" x
第三节器官培养各论
+ ~* h4 X1 g6 j* T4 r% |一、胚胎肢芽的器官培养- E9 C' F5 q# c& x& j( j# u
(一)胚胎肢芽的血浆凝块器官培养方法
+ O% L9 [* f5 k- X/ ?2 O8 i(二)胚胎肢芽的琼脂凝胶培养法; [+ V+ b8 x, }6 ^
二、胚胎性腺的器官培养
7 j$ ?& Z+ c0 J: f! }9 U6 N% w: e三、软骨与骨的器官培养5 y( o6 E7 s7 r) A3 }8 E5 O; M
(一)软骨的器官培养
6 Q! a- [( H7 N(二)骨的器官培养
4 \8 Z0 g' _4 F; c H四、神经组织的器官培养9 |3 ]; y3 z8 t' U/ j( P! l
五、牙胚的器官培养
2 q1 q% s- T; I7 X8 p2 m, `(一)Trowell培养法培养牙胚器官
l5 K0 a0 \' `" H8 f% \(二)悬浮培养法培养牙胚器官
& E) w- S# ~$ N( m9 a: g' S; i六、腭板的器官培养$ n8 g) N! `- x' {
(一)腭板器官的静式培养法8 I: S7 T; e) n0 I8 j
(二)腭板器官的转动培养法: t* u# `; \, d( G# y
七、毛囊的器官培养
' C/ ]8 {( u: }+ d# p, b/ F2 R- |/ B八、血管的器官培养
9 J/ x/ o. Y: L9 G$ e9 m! g(一)血管的悬浮孵育法器官培养
! M5 n1 C. t" e: e(二)血管的琼脂孔器官培养法
4 ~1 f( g& @ v# ]2 }3 u1 S九、肝脏的器官培养# M/ ]6 ]" C6 U& d2 Q
十、小梁网的器官培养
@; A& r( N; G( _; {% _* u: P十一、人胃肠黏膜的器官培养/ h$ }: ^+ W. v. K+ ?
十二、胚胎器官的上皮与间充质植块的联合培养
, m7 q7 a3 b- N十三、肿瘤侵袭研究中的器官培养
2 R, `$ d2 ?& x9 O(一)肿瘤细胞与靶器官植块的制备
! u$ G+ L: l' L: K9 h H(二)肿瘤细胞与器官植块几种联合培养模型 u l9 K6 R7 F) @& j
第四节全胚胎培养6 v1 \! x V$ `3 N: z
一、植入前胚胎培养' Z. {1 H* W$ l# K3 c' q6 R, z
二、植入后胚胎培养+ p% h# N; h# P: |0 r. _+ \
第五节器官培养的应用, ?0 f ~- x" x0 s- C+ `
一、器官培养中的形态发生研究9 T% R" G# v) z1 }3 A9 m% q; F
二、器官培养与发育分化研究
$ @/ d+ m( g5 V8 M' V ~$ N(一)外分泌腺的发育分化
9 a7 v# c& }" | T. v(二)内分泌腺的发育分化
- @! y! U' O! V- ~(三)性腺及前列腺的发育分化
* P; I! Y, Y- D u(四)神经组织的发育分化
; {& T( u# n& A+ U(五)各组织细胞间的相互作用对器官分化的影响
p5 b8 J, X9 j: V( ]7 X' G% O三、体外培养整个胚胎的生长发育5 ]8 I: q {" ]# Y0 n2 B1 r* [/ a
四、胚胎致畸作用研究
0 e" v9 L0 J5 `$ ~0 [4 N$ i. J五、器官的功能及其代谢研究( q7 r6 D* ^5 g
六、器官移植中的应用* }% x5 m* `' r" b+ q8 E& ^# P* N
(一)器官保存$ u+ h% J5 r6 c) d. n
(二)降低免疫原性
8 z" _3 y9 \- U! G3 J七、器官培养与肿瘤侵袭研究
0 F8 o, k& C, p! o( J+ F第七章培养物的观察检测方法
8 c( t e3 }+ O* T/ L! y第一节活细胞的观察检测方法
' N- j( I9 h8 B, a: C一、相差显微镜观察培养物的形态结构. ^5 b H5 w* v7 ~* b$ R
(一)相差显微镜
% f, r% o* u4 p2 O3 S, L. g4 F(二)用相差显微镜观察活细胞的方法* h7 Q2 G+ ]/ k6 g1 n
(三)活细胞的动态观察与缩时电影* H e/ X. E1 d7 v: F
二、细胞计数法% R. A$ q$ x' \! |/ q- J: s
三、细胞生长曲线
( B7 J$ @7 H# Y1 M4 r2 y1 o8 |四、体外活体染色观察与活体染料, H; z E6 W' N0 O
五、活细胞的染料排除检测法
/ y3 m4 ^5 L& \2 [7 ]8 b" _六、细胞增殖活性测定的3HTdR掺入法5 l3 s* n$ ~2 U$ ^7 p* f2 }+ I; D; R) C
七、细胞活力测定的MTT比色法! `) O0 p2 w" k& i' l+ Q. F
第二节普通染色观察
# }0 T& G& x9 e- Q w6 t一、HE染色法
2 d- ~! }% S* Z# B* J r. p二、吉姆萨染色法 I! \/ s+ l" g; G n$ N9 ^, u/ E* y
三、载坡片处理方法
) V6 p# O( H$ h& ^; S' v第三节细胞化学技术+ `8 R% S* A! A# K
一、酸性磷酸酶
. z0 D8 V V, h# e$ ?0 K2 x) N; f二、葡萄糖6磷酸酶
8 i( M) w3 W, s( `9 g/ z8 D三、琥珀酸脱氢酶) [$ K! g/ \& U" P2 I# l( L2 b4 d) d
四、DNA与RNA的吖啶橙荧光染色法
4 ~- j. ]1 j& L# q E' w五、DNA的富尔根(Feulgen)染色法8 y3 g9 m) L7 B; [0 [; s8 H1 g
第四节免疫细胞化学技术
& k5 \6 r1 d2 k$ W T; o$ r S一、常用免疫细胞化学技术原理
" S7 i6 d& w: {+ A. p# C6 o二、常用的显色标记物
" D" i* n& i w. P) _+ J8 P, E) t(一)辣根过氧化物酶
8 w9 ^ O9 y- z; H3 I q(二)碱性磷酸酶
/ [+ U' F; |9 [4 n(三)荧光素
% U% X( V$ ]4 J7 K) q(四)胶体金与免疫金银技术! g, M7 F' [* F2 `. j* c
三、免疫细胞化学方法及标记物的选择% e8 j+ a* O$ i! q( c5 J p
四、免疫细胞化学的一般问题2 Z" A% T* K6 z, k# m- _
五、免疫细胞化学染色的典型程序
7 } w7 w* y6 \+ C1 u9 K1 [(一)免疫酶间接法
' x K" I6 p2 j/ j(二)免疫荧光LSAB法
5 i* `* l2 Q7 w; e$ e7 @9 j(三)PAP法
9 l. w: w; f! A ~( ]* R(四)SPA胶体金银法
0 F5 p9 ^+ m q0 V" ?第五节原位杂交技术
+ O1 A% `3 W; p# d; q/ O: W一、探针与标记物的选择8 h# n5 S5 ~: q
二、原位杂交技术主要实验材料* E2 a* @! g* i2 k% B
三、杂交
! F* |0 S: I3 J7 x$ n# I+ y. _四、显示标记物
9 G5 \; l2 D4 m. N五、设立对照 p% }0 I3 P1 `+ D& W; p
第六节电子显微镜技术
+ x6 E5 _4 c! }( J; Y* J* j/ v一、超薄切片技术
8 ]) N- K% [ x- `8 ] f(一)对培养物的预处理( j2 D9 i1 g! e( ^+ B, f6 h0 L
(二)标本制备
6 `! x- S" m* s7 d9 Z二、电镜免疫细胞化学技术. S5 K+ e# P4 W& y/ H: n4 r6 V
(一)显示细胞表面抗原
) U! p" i/ _7 X* ~& c0 @( [(二)显示细胞内抗原
7 I ~+ S: g# {% {4 N& C$ O三、其它电镜技术简介. ^! k! J& Y) B
(一)扫描电镜技术
0 L2 v! L: C* N(二)冷冻蚀刻复型技术
! C% d3 [4 b. |- d第二部分动物基本组织的体外培养
/ E! U1 W9 I w$ r6 j, T% Q' c" t第八章上皮组织的体外培养
- R2 C" Y. b# c2 q2 |第一节上皮组织体外培养技术概论
" t8 e' f2 J& U6 |) }5 r4 ~4 L5 X6 h一、在体生长与体外培养的上皮组织的基本特点! [7 U- A/ N4 O& W/ p2 U4 z
(一)上皮组织的形态结构
9 S" a- a8 {5 J$ Q( l6 I9 [. r(二)上皮细胞的极性
+ A: n' F2 r# w1 F; F(三)上皮细胞间的连接
% a/ J. @5 P+ v. W: r+ ]1 l二、体外培养的上皮组织细胞的生长生物学+ W% X/ h) a- A5 Y$ N( S$ |' D
(一)体外培养上皮细胞的形态结构4 l1 ?4 L5 P4 g% [' c
(二)体外培养上皮组织的生长与增殖特征" T. O6 P2 P( Y2 f
三、体外培养上皮组织细胞的观察与检测
- i6 z$ ~; s$ q(一)一般形态学观察) S: ~+ o* |) q8 G$ n0 [; h6 M
(二)组织化学与免疫组织化学观察与检测6 s$ Y) q$ N4 p3 v/ k p
第二节呼吸系统有关的上皮细胞培养+ D- V# J: e+ @! z
一、呼吸道导气部上皮细胞的体外培养
5 z) H/ M' q# K" n. i8 k4 Z二、呼吸道导气部上皮分泌细胞的悬浮培养! N6 {/ g' Q# ^7 K" @2 G x8 d
三、Ⅱ型肺泡细胞的培养
; |% e D1 v! H1 W5 K8 W四、鼻咽上皮细胞的体外培养
- T1 j Y$ `/ _$ l第三节消化系统有关的上皮细胞培养8 n# r0 e' q. A, C* T& ^2 s
一、食管黏膜上皮细胞的培养
" r2 j* F& t1 ]: l二、胃黏膜上皮细胞的培养4 e- ]" S5 d. f! w2 G M i
三、肠黏膜上皮细胞的培养4 E1 T% {# o n# A! s( ]
四、胆囊和肝外胆管上皮细胞的培养0 ` R" ?# z* [0 s
第四节腺上皮细胞的体外培养
6 }% i7 o$ s3 _一、唾液腺上皮细胞的培养6 p# ^ I0 H \$ c' ?
二、乳腺上皮细胞的培养
4 s7 y7 r* s/ I: m6 A(一)乳腺上皮细胞原代培养的建立和维持
5 }! S( C) p. O(二)乳腺上皮细胞的悬浮培养
2 l5 E) U! N& h: N% H- F' X& R(三)乳腺上皮细胞在EHS基质上的培养& p9 N0 J7 n+ M4 b4 J: e# L9 f0 i
(四)乳腺上皮细胞的其它培养方法( ?5 B4 W; U' z% b; F
(五)乳腺上皮细胞培养中的有关问题
0 s+ \- ?" g3 d+ l0 h# _1 U第五节表皮细胞的体外培养; n' \5 I; A2 B; E
一、表皮角质形成细胞的饲养层细胞培养法
: Y( I" ~ C9 O7 N' V* t二、角质形成细胞的复合培养法/ X3 q4 y$ U1 |1 x
(一)在人去表皮真皮上培养角质形成细胞
9 U# O( J- B& {& T, P. t(二)在真皮替代物上培养角质形成细胞
7 q; m+ ]" T |7 ~三、表皮黑(色)素细胞的培养
2 B }3 H8 {' t# a四、表皮郎格汉斯细胞的培养
- |2 a2 L/ a1 |( Z$ r& d! ]0 u第六节血管内皮细胞的体外培养
0 Z& \' ~& F) l, m一、猪主动脉内皮细胞的培养# U$ I0 h& M4 y$ [
二、免主动脉内皮细胞的体外培养( \ g) a3 T w
三、人脐静脉内皮细胞的培养
# S& P) Q5 f; s! x; B8 w# ~( i四、大鼠主动脉内皮细胞的培养+ A! D* s. G: j
五、滤膜培养法培养血管内皮细胞
, M; ^3 k4 h `6 F3 }( v! V六、免脑微血管内皮细胞培养
2 x) i- ?/ d. F' g W# _七、大鼠肺微血管内皮细胞的培养% I) O2 f6 l; Y8 y& `
第七节胸腺上皮细胞的体外培养
8 `+ `! u* I* s' {第九章结缔组织的体外培养
5 m5 t6 `9 h% u+ b% o第一节结缔组织细胞的生长生物学特点与基本分离技术' U% ]4 e- e5 m1 ^1 h
一、结缔组织细胞的生长生物学特点
, F6 O5 a9 r) d) _, w: c( ~7 ~二、体外培养结缔组织细胞的基本分离技术
3 K% [2 u! l. S8 Y# s( z第二节结缔组织细胞培养各论) p9 k8 u5 x' [( c- x* @2 A
一、成纤维细胞的体外培养
( B/ a- J4 s0 l4 { G6 h6 L(一)真皮成纤维细胞的体外培养8 O5 S6 A% e3 Y) n/ s, h
(二)人包皮成纤维细胞的无血清培养6 |) |. |" l) R
(三)中国仓鼠胚胎成纤维细胞的体外培养
/ F3 Y+ W# g4 W) _(四)鸡胚成纤维细胞的体外培养3 e4 f$ C8 \5 o, S9 o5 k; V
(五)人胚肺成纤维细胞的体外培养- f7 _4 B W/ V* d! | D/ X6 H
(六)小鼠肾间质成纤维细胞的体外培养
% m5 f" f9 N+ @0 n2 t! j+ H(七)眼组织成纤维细胞的体外培养2 b# `8 y1 U( e& U! {5 r+ C
二、巨噬细胞的体外培养& D. {7 Z& t) @
(一)获取肺泡巨噬细胞的方法
4 n! R! f9 r' w& S; L4 d: H(二)获取腹腔巨噬细胞的方法
# `' [! `" M0 o: p(三)巨噬细胞的纯化/ H6 i R4 ] e) h/ p
(四)巨噬细胞的接种和培养
' o& |+ j$ P1 O+ n' U三、脂肪细胞的体外培养6 e2 a& C& e5 o8 X! r/ ^
(一)大鼠前脂肪细胞的原代培养! w$ O: A4 @* [9 @- s* Z4 q' ?2 {2 Q1 c
(二)小鼠前脂肪细胞的原代培养. @1 u e0 V+ L) O9 _
四、肥大细胞的体外培养: M+ n. I& F' T9 E5 p
(一)肺肥大细胞的体外培养* C9 d, @' L* }$ F) d
(二)肠肥大细胞的体外培养$ l0 a* E4 ^; M4 {8 y
(三)皮肤肥大细胞的分离和短期培养, N+ _2 G2 n* E3 s
五、间充质干细胞的体外培养9 {! V) m9 q. p5 Z; T9 |) l9 G
(一)鸡胚肢芽间充质干细胞的体外培养
) h: B* L: A8 a(二)大鼠骨髓间充质干细胞的体外培养
- j! e# d: L* K$ I5 y; Y(三)人骨髓间充质干细胞的体外培养$ y# _2 B2 b3 x) l
(四)兔骨髓间充质前体细胞的体外成软骨培养
& P K0 b1 E: n9 T |) K7 ~! f! H第十章几种重要脏器细胞与特殊动物细胞的体外培养! s. D9 g1 A: i2 q: Z
第一节眼组织细胞的体外培养
$ O7 R7 `1 F2 x1 y一、角膜上皮细胞和内皮细胞的体外培养, Q1 e* P) f/ g; D
(一)角膜上皮细胞的培养8 S0 M3 u; v: Y. |% r
(二)角膜内皮细胞的培养
6 S8 P/ u" L. `% h& {9 ^二、小梁细胞的体外培养
' W0 A' l$ [) [1 e三、视网膜色素上皮细胞的体外培养
% Z1 x6 b- ^, |/ C: K+ w$ x+ [四、晶状体上皮细胞的体外培养
1 d. {# k7 N& l! F0 |; u五、视网膜米勒细胞的体外培养2 s$ J s! e, k7 Z
第二节骨与软骨组织的体外培养' h2 `. A. G u" T! A9 E
一、成骨细胞的培养( Q: }2 K3 `$ h2 ~ y1 P" C
(一)骨内成骨细胞的培养
/ N7 Y- D5 v( B2 Z(二)骨膜内成骨细胞培养
$ I- O$ s9 `! K# ~% `% g二、破骨细胞的培养
( F8 d# ?; N2 u# c$ E(一)成熟破骨细胞分离细胞培养法
: [0 E6 j# `/ H0 U(二)骨髓长时间培养诱导分仑形成破骨细胞法 B. k3 v) h; V( |; y8 f: F
三、滑膜细胞的培养
" J8 f, A- ^1 a* m/ B- G5 q(一)滑膜植块培养法
4 y% _* O) K0 N. u* r(二)分离的滑膜细胞培养法
$ o3 ^3 v* r- ^四、软骨细胞的培养/ M' J& Q1 w7 M' n! h G$ P
(一)关节软骨细胞的短期培养8 b. X5 g! t* K, `' ~0 z" P
(二)人关节软骨细胞的长期培养法/ }5 E) z9 W: u
第三节泌尿生殖系统有关的几种细胞培养7 w% f i& O3 k
一、生精细胞的体外培养% v" R# J- D8 G
二、睾丸支持细胞的培养
1 w& v5 h. y5 F% V c( ` w三、睾丸间质细胞的培养
9 c% N: C8 {4 t2 [四、肾小管上皮细胞的培养+ x5 T$ X6 ^4 ^
五、肾小球系膜细胞的培养6 q% ?9 ~" n, B) ]2 W; O9 z
第四节几种内分泌细胞的体外培养+ {, ^' V) s- |6 c
一、胰岛细胞的体外培养1 z5 ^7 X6 C" }& }1 p4 r
二、人垂体腺瘤细胞培养
i i( s$ O+ |9 i U& @三、甲状腺细胞的体外培养. d% c0 T& F2 S3 V* f+ ~+ B
第五节羊水细胞的体外培养. O5 O% c; m3 g! ?) s
一、羊水细胞的体外培养基本方法
$ b( x! P& p; {5 a* x0 I2 E, R二、羊水细胞的富集培养法2 n/ {: \/ r, r) t3 S0 C
第六节胚胎干细胞的体外培养6 J5 B$ p# u" L5 e" _2 a/ [# G
一、体外培养胚胎干细胞的技术原理
/ |+ J5 V8 z( O% n' W二、体外培养胚胎干细胞的基本过程
( b( Y0 c. A7 R$ r" h% j0 P" s6 ~(一)饲养层细胞的培养2 X2 Z% |& X `# M
(二)饲养单层的制备 g- m$ B4 D# D/ b b( V" B
(三)用于培养胚胎干细胞的条件培养基的制备
- U) k6 D7 s4 D( D(四)胚胎干细胞的分离与培养; b' [- J& z* G" n% p; ^; L* [2 Z
(五)胚胎干细胞的冻存与复苏
0 C$ @5 X6 m- i三、胚胎干细胞的鉴定
7 F) r4 W/ O1 f" ?3 X0 `9 ]: Q(一)碱性磷酸酶检测
* T; F$ r8 @1 c/ X4 K(二)核型的鉴定, d E% s) r# z5 |# B3 _- Z
(三)体外分化能力观察
: H& I. J7 } J5 K+ K! t(四)体内分化能力的观察
$ n) G T" Y6 D$ Q(五)嵌合能力的测定
# s* z" C& k0 `% k) n8 H* D7 q- z第十一章造血干细胞的检测与造血祖细胞的体外培养% l8 I4 r0 Q. M4 F! Q
第一节概论
: `8 e. t7 u0 V) a+ j. k5 u一、造血干细胞的生物学特征+ V' [ U# e* Y
(一)造血干细胞的基本特性/ ?4 d' q+ m. n3 S$ a/ j: m
(二)对造血干细胞的识别1 P/ g% u4 J, T* ]# c3 {! U1 C- a, d' N
(三)造血干细胞的胞龄结构, V8 h; G% M* P& d/ S, `8 W
(四)造血干细胞的动力学9 @; ^% U7 j5 c! ?
二、造血祖细胞3 ^. Q3 D! p3 j. K! y# D
第二节造血干细胞的测定技术% ^+ w0 ]9 D. }' W2 b
一、CFUS的检测技术" T0 L9 x* T- o/ l7 R' H4 r) l3 I
二、以标记染色体测定脾结节的形成
2 p t% Q- [+ S& e% P* F8 L: R; Y三、脾结节移植法测定脾结节CFUS* O0 a, }$ N! ^" T& _* ?
第三节体外培养造血祖细胞的特殊实验材料
|4 X( m) S* K( O一、培养用液
; A: s+ B% z! g3 H二、特异性刺激因子的制备3 `6 I+ ~5 v9 q6 d( i
(一)横纹肌条件培养液的制备
$ A9 a( h7 s2 V: |4 z+ k) d(二)白细胞条件培养液8 R* p- q) b5 e V- @8 y5 s
(三)脾细胞条件培养液
1 [5 d: i6 k9 Z7 K4 `(四)再障病人血清的制备# ~6 _; w2 r- Y; k. f" s
(五)胎肝细胞裂解液的制备
5 H- R& M/ A+ r. B" z; c( E2 D0 d第四节造血祖细胞的体外富集与培养
/ b; X3 v- R! G7 Z- D一、造血祖细胞的富集5 k/ N8 k/ t5 w+ d9 p/ C4 S
(一)单个核细胞的分离+ C: ]7 |+ u+ s# s* K7 @
(二)CD34+细胞及其分离方法
& Y# ?- l* E3 A+ @8 K- C+ n# g2 w(三)CD34+细胞的MACS免疫磁性分离方法7 U @- L9 e+ J, b- s' d/ j
二、造血祖细胞的体外培养9 }# Q/ f4 m: T' i& E) ^6 a
三、各类造血祖细胞的培养技术% k! Q0 g% \$ i- a, c, m0 P+ J% O% V( ?
(一)CFUGM的培养
) f3 D& Q* j0 n, f& |) B(二)红系造血祖细胞的培养
/ V2 K N0 b: H Q* D(三)巨核造血祖细胞的培养
. J- \# q# C1 O$ }2 V(四)混合细胞集落的培养
+ f8 G* Q/ z+ s+ i(五)白血病细胞的培养
/ n6 i9 Q5 ?: M ^0 E3 ^4 r(六)无血细胞体内扩散匣培养技术
6 a6 A# S, I; o* K. O" Y1 G7 y第五节造血祖细胞培养技术的实际应用3 ]$ W6 S8 e u; m' j+ W! W
一、正常人骨髓内各种造血祖细胞的含量测定
: s2 U6 K2 v: r2 v) i二、某些血液疾病的细胞病理学& C8 g/ I0 K8 x2 f# B7 y: J8 E
三、药物对造血细胞的作用研究
1 o( }5 `" T" q' x3 V2 A四、再生障碍性贫血的发病机制和预后以及造血干细胞移植治疗% t0 G3 N* u1 \! t
五、体外测定造血祖细胞辐射敏感性与全身放射敏感性反应的关系 G! A! h5 s: K$ D
第十二章血淋巴细胞的体外培养8 \! N) w! j* p- Y1 y; p9 X
第一节各类淋巴细胞的主要特征
0 P `0 O( T! J, ?4 z一、T淋巴细胞
+ i: I1 \* Q2 E5 g/ H(一)T细胞的表面标志" ^! S6 g0 [" Z2 @/ Q* u
(二)T细胞亚群及其功能, V$ ` B: f$ i+ P( z4 X" D
二、B淋巴细胞
7 [& d( q, L K! z6 L5 k/ d0 m( R(一)B细胞的表面标志2 {' N) G/ ^7 C5 ?4 y5 [" l7 s
(二)B细胞的亚群
9 h2 Y) B4 }% w x4 r: \- A三、大颗粒淋巴细胞. T. \% V* r* S0 {
(一)NK细胞8 x4 n4 ]5 T$ O* K7 E
(二)K细胞. {3 b" _# t2 }" x/ m- M6 f% L
第二节血淋巴细胞的分离
# Q5 F1 H0 t5 w. {6 r一、单个核细胞的分离" d0 f6 s& o9 y, u
二、纯淋巴细胞的制备
4 B+ [+ C5 I7 x: N9 v7 Z0 B& p(一)玻璃黏附法" p; @2 d9 [) u$ J! V' g
(二)羰基铁粉法3 h& x. f, m% ?" E* L1 J- A
三、T细胞和B细胞的分离
$ f' O. r; x5 N5 v(一)T细胞花环沉降法) a' D9 e& z" Q9 N2 y& N3 o
(二)尼龙毛柱分离法
k) m, u+ k9 Z' {" r2 |四、大颗粒淋巴细胞的分离
* V: |* i9 d- t- i# A五、荧光激活细胞分离仪分离淋巴细胞及其亚群
; G1 r6 ?6 n' t" _# E六、免疫磁珠法分离各种淋巴细胞及其亚群
" ]$ K* {; @* ]第三节血淋巴细胞的体外培养方法和应用
8 p# }) T& ~6 }" ]一、淋巴细胞转化试验
5 K+ x9 I2 i m2 s二、B细胞产生免疫球蛋白的检查
- m/ B7 b( J' Y P1 w: i( {三、T细胞介导的细胞毒试验
0 Q% o+ \( a. }4 z. {四、NK细胞毒性试验. G& L ]) P' F; s7 v1 ?" ~2 s
五、K细胞毒性试验
$ o+ H" ^$ c0 R. f( C1 |( T# x六、LAK细胞的制备! l8 j3 _* ~1 S* a7 |
七、淋巴细胞的体外长期培养
8 \6 e0 {. J1 w' r' P0 Q(一)用IL2建立T淋巴细胞克隆% V2 C9 R" ~1 ^; y6 i9 {, z
(二)用EB病毒转化B淋巴细胞$ ^% g, S5 [8 f' Q! o, {
(三)用B细胞生长因子建立B淋巴细胞株
* i. N1 E" v( N/ n第十三章肌肉组织的体外培养
5 P, g* }' R7 z9 R* S第一节肌肉组织体外培养技术概论
: K1 t+ o/ |1 e& B5 N+ _一、肌肉组织体外培养技术的发展简史" T6 N5 `/ A; X6 ^" X
二、肌肉组织细胞培养的意义与评价5 b- \8 X3 W) x" N6 V x' b" `
第二节心肌细胞的体外培养
, M8 e) h0 n8 |4 ?一、心肌细胞培养的基本原理# ^1 B- D3 A. g$ ?
二、心肌细胞培养用液
) l" k" W+ x/ m$ K8 l" o(一)常用平衡盐溶液9 t9 E7 E3 j6 e# a8 m! I$ f
(二)心肌细胞培养液# h, _4 N7 M, J6 T/ [ s! t6 \5 x& A
(三)其它培养用液
% _& [; o) U9 k6 r' k三、心肌细胞的培养方法* [( v6 C O9 O# ]/ x
(一)心肌细胞的原代培养
1 p1 m' [% ?# T2 x/ N% `& Q' F(二)成年动物的搏动心肌细胞的制备
2 I5 O$ F, J" b' O ~(三)心肌细胞培养方法的某些发展1 v m9 |1 V" l9 `- h( Y
四、心肌细胞培养的基本结果与观测方法
* s. p7 S" C/ @9 E' l; X0 l1 C(一)一般观察# t+ `% `! j7 j/ s$ E2 J% _# u( V
(二)培养心肌细胞的形态学观察
% {2 D) Y3 S: U f8 `3 W8 a(三)心肌细胞搏动的观察
# H4 e, ^" c& G& B$ m) ?. D五、培养心肌细胞的某些电生理特性
- R* L6 x' A( G% L: v U+ ~& V/ {六、培养心肌细胞代谢的某些特点
L/ S5 j1 o& J4 a9 S% I* r第三节平滑肌细胞的体外培养
4 ?3 z0 H7 E2 J4 ^9 V一、平滑肌细胞体外培养方法9 ?/ m. M0 s; @( Z
二、培养平滑肌细胞的结果与鉴定
# I. ?1 w. B# |6 C/ d0 t! f Q三、影响血管平滑肌细胞增殖的因素
6 O. y1 B) D+ [" C第四节骨骼肌细胞的体外培养; \8 _( k4 z: t. P X9 d5 b! U
一、骨骼肌细胞培养所需主要材料/ Y8 o: u. O/ K. k/ l' f# y
二、骨骼肌细胞培养方法" S0 R' D- m- J4 E
(一)乌类骨骼肌细胞的培养7 E/ B% i9 ] H
(二)啮齿类动物骨骼肌细胞原代培养方法
0 ~. Y3 v# _- e6 ~: d. C$ c; _3 x( }(三)从啮齿类动物肌肉中获取高纯度肌源性细胞的新方法
0 p+ ]; i$ V5 k2 N+ H, Q三、肌源性细胞系的建立
! |% N7 I! [/ k0 |第十四章神经组织的体外培养
3 j, G) k8 R" w; ^$ A4 ~第一节神经元的体外培养4 H! n/ ^ l) K+ k$ g, a
一、神经组织的植块培养法
: q# c2 K6 G0 \0 L(一)概述
P. a5 c7 U8 n: t" ~- [, v(二)灰质组织或神经节的体外培养) w" u- R6 l! n0 W6 B2 o
(三)白质植块的培养
- G2 ?; |3 x U# T/ y7 _" u; J二、神经元的分离细胞培养方法
8 R, S; G7 ?/ V! t/ z8 t(一)材料的来源
9 r4 G7 x/ m0 k6 S# h' ^0 p; u(二)神经元体外培养液0 C+ z% I. `4 r& k" X
(三)神经元体外培养的生长基质
# \* m& L" V! j3 ^(四)神经元的分离细胞培养过程
8 O* X# d5 L; h( ~4 a(五)神经元细胞的体外培养
5 X6 I* U! h U/ K" p第二节神经胶质细胞的体外培养
" h: c) M/ j: Y: |3 v一、星形胶质细胞的体外培养7 T, E; \) ^& q. i3 c% s
(一)取材的动物年龄与部位
1 |. S% }' `- ?' |: c(二)星形胶质细胞的体外培养方法$ {3 X4 M: e% Z) P, q& J9 D5 E" R
(三)星形胶质细胞的无血清限定性培养液
. \' A; C/ G6 d* {' T(四)星形胶质细胞的形态学特征与化学标志物/ l: e5 |" G- Y& R1 t; i, J6 a
二、少突胶质细胞的体外培养2 n4 j' d1 g4 \% a- F
(一)体外纯化过程
% m% N2 n% j4 @1 {) K5 @( {(二)体外培养少突胶质细胞的化学限定性培养基$ U3 w3 d5 n" b( Y' L; y
(三)少突胶质细胞的化学标志物
+ ^6 x. H Y9 n" Y(四)少突胶质细胞的形态学特征; @4 x4 k! H$ m$ g) [7 g; {
三、施旺细胞的体外培养8 F `( T+ P6 ?8 J
(一)施旺细胞的体外培养方法
3 i' E9 B! V$ D# ~( D. s0 ](二)施旺细胞的无血清限定性培养基2 M+ @1 t( H1 G" o
(三)施旺细胞体外生长的形态学特征与化学标志物
0 L3 F) \3 i( T+ |四、小胶质细胞的体外培养
+ d ^. M& |+ H& D$ E: H* v(一)小胶质细胞的体外培养方法
# O# C& ~- ?5 h, T(二)小胶质细胞的形态学特征与鉴定 M: j# p- g- J1 y6 t {; m
五、其它神经胶质细胞的体外培养- d E: Q, B! i2 h. r+ K
六、体外培养神经组织分离细胞的形态学特征比较
/ B( g, E% p0 e) D第三节各类神经组织细胞的培养方法2 n, @( c0 w1 U+ U- N% g' U
一、鸡胚背根节的体外培养" q1 G# S m* @+ G
二、大鼠颈上神经节的体外培养
) a6 R4 [$ H7 E% Z) Q8 Z4 g三、大鼠小脑皮质神经元的体外培养2 f% ^: p' T+ r- W
四、大鼠星形胶质细胞的体外培养
' N: {" g: S2 F, u9 Y$ y(一)方法一：植块培养法. Q8 u! l; s- v/ ], [+ }& v j' h$ `
(二)方法一：分离细胞培养法 l+ i& u' q2 q m- c
五、大鼠少突胶质细胞的体外培养
4 _5 N$ j8 h0 f$ b4 [: c(一)方法一：植块培养法
_; o* R- [& |+ N(二)方法二：密度梯度离心法% l2 E# i( L/ H( w
(三)方法三：恒温摇床处理法
* Z3 h. I1 j) Y六、大鼠施旺细胞的体外培养
& E3 ^4 p1 U) m) n0 D(一)方法一：常规分离细胞培养法
2 t5 L9 }( k+ P1 \+ F! n(二)方法二：免疫选择法
) K9 B$ @+ U( T7 ~0 o8 ^(三)方法三：反复植块法
. X1 ?# {& _2 ^8 b# ?5 p七、鼠脑小胶质细胞的体外培养; \, c7 P+ D2 W( I6 t7 o. E
八、脊髓神经元的体外培养/ I! N7 F4 T! u5 G7 m
(一)方法一：差速黏附处理富集脊髓神经元培养法
9 w6 h1 P/ l u r. J, v( ~(二)方法二：台面选淘富集脊髓前角运动神经元培养法& M$ L# X8 M8 g7 [
九、鼠脑神经干细胞的体外培养3 T% z! |5 b+ c- q4 \6 ~+ S s
(一)胚胎神经干细胞的体外培养
5 D. @" m, V. ]; o- f. O F4 Z1 C(二)成年脑组织内神经干细胞的体外培养' Q7 w8 }. b; b9 q0 r7 ?
十、大鼠胚胎几种常用脑区组织体外培养的取材
5 K. h) M$ K. f% f) Y8 ]6 L第三部分特殊类动物细胞的体外培养 z! m! ~% n T; a; M0 _" [
第十五章肿瘤细胞的体外培养5 H( X$ x! R5 r' w. O! }& I
第一节肿瘤细胞在体内和体外的生长特性概论 c/ r; |0 [1 n; s' [, B
一、肿瘤细胞在体内生长的特征+ b. i, u; \) c6 k$ s; I; O
二、肿瘤细胞在体外的生长生物学特性
2 b' M& W' a' R4 O* ~- h( L三、肿瘤细胞在体内和体外的生长特征差别7 S: T Y5 y, z$ [! w" T# {, l
四、体外培养肿瘤细胞常用的培养基
6 t; \- `# }9 A7 U2 l/ C第二节体外培养肿瘤组织细胞的方法和技术' i6 V3 r/ q$ ~$ D" g' E& H! x7 i
一、肿瘤组织细胞的原代培养
7 d! y9 y! y& J7 r二、肿瘤细胞的传代2 K5 N) N) S; c, V* H& r2 p
三、肿瘤细胞的克隆培养法/ o) T8 M& z, w5 K
第三节肿瘤细胞体外生长的细胞生物学特征
! @! I+ k; [1 V- l0 y6 y# f& w* c一、肿瘤细胞体外生长的形态学与细胞学特征, O' l) A; J; H) o8 e
二、肿瘤细胞的核型和异常生长特性
$ ^& [6 s& X- C' k(一)染色体数目及核型9 d, A- @2 k. a2 ?' G
(二)永生性
+ y8 m( J& c2 f( n7 h3 v(三)异质性$ d; a- ~$ W( ]; k3 p& U4 r" S/ y
(四)动物接种成瘤性
. f( G) N) }0 M(五)非锚着生长依赖性
; _3 K0 [" A* a7 Y w第四节已建立的肿瘤细胞系介绍# n8 P/ N5 T# i& ~$ S+ w, C$ H
一、国内已建立的人类肿瘤细胞系介绍/ |3 V2 D$ e1 X' ~; {
二、国际上已建立的人类肿瘤细胞系
1 a: P* V) J, R& T- s第五节部分肿瘤细胞的体外培养与建系过程3 c; m0 |, _7 e( \$ |2 L
一、人鼻咽癌细胞系(CNE2)的建立
4 ^+ P* Q- h$ t# E* t. y1 B0 C二、人骨肉瘤细胞系(HOS8603)的建立/ F: L9 }. b3 K& E2 i$ [
三、大鼠肝卵圆细胞的本外培养, h6 K( O$ w! o: @$ V8 v
四、人神经母细胞瘤细胞系的建立
q+ ?& | u- r; c! X* A五、人肺腺癌细胞系的建立3 ]/ E; V7 d2 |& g7 r; j# ?8 \7 [; d
六、有肺巨细胞癌细胞系的建立
6 n$ {( P5 p& O七、人肾颗粒细胞癌细胞系的建立
+ ?, I* j/ k' S2 A八、人卵巢癌细胞系的建立* w3 L! R# h8 r1 v
九、人肝癌细胞系的建立% H N. ]5 X, c5 m6 b. Z. h' Q* J
十、人喉腺泡型横纹肌肉瘤细胞系的建立
0 r! S: z7 J: K十一、人恶性胸膜间皮瘤细胞系的建立
8 F; b9 `, g- m+ W7 L( O/ X2 n十二、人乳腺癌细胞系(HATTORI)的建立9 T K/ D: H7 c
第六节肿瘤细胞培养的应用
' Z) c% Z# L/ b4 {一、肿瘤细胞对组织浸润的体外研究- p3 L5 }# ^( G; Y7 v
二、人恶性肿瘤细胞的动物移植瘤研究7 o4 K+ C/ \. Z2 D6 u% i; f- k: g& n
三、培养肿瘤细胞的体外分化实验
8 ?1 K" K- @. [# {& s7 s; W9 Z四、培养肿瘤细胞的凋亡诱导研究
4 p' G" M% |! P: J6 L- k第十六章病原微生物的培养1 `0 W' C! b) p8 l! U
第一节病原微生物培养技术概论) H2 T! c' l2 H6 N. n# @- Q* F" z7 `
一、病原微生物培养的基本原理* \; J s- r& k4 Z# |: y8 t, l( B
二、病原微生物培养的基本方法和技术
# o1 j* w! T! ~3 n6 |6 |三、病原微生物培养的应用
! D( \+ e/ }( l) C- F$ h1 \% f第二节细菌的培养1 \ t$ H0 x4 Y9 R
一、细菌培养的基本条件
, n, f1 A! q; J9 y! ^. a' u(一)细菌培养基
4 h3 Y* S9 ~$ v6 ?(二)细菌生长的其它条件, h* J A4 o$ O8 v
二、细菌生长繁殖的特点( r& D; \! E' B8 T7 Z0 L
三、细菌培养的基本技术+ t' c- i1 m n
(一)无菌操作技术3 p( }2 \$ M; H- a- m3 |8 [
(二)细菌接种技术
" w2 O: \+ W( ^( i四、细菌培养的方法
9 [0 ]0 S9 y |% J) B9 h" ](一)一般培养法
0 D @ d9 N/ _% F9 U(二)二氧化碳培养法
( H3 w. D9 s" h. [3 l(三)厌氧培养法* q4 ]$ B4 k+ T e; z" A0 G; R
五、各别类细菌的培养# x/ f6 C8 f3 j# C2 n
(一)致病性葡萄球菌的培养" v& q+ m% t4 J( ]
(二)幽门螺旋杆菌的培养( @: Q& m5 ~# n( h4 H- Q
(三)结核杆菌的培养
+ T8 @/ V) X) I2 `8 @3 ~ p8 ?8 V(四)淋球菌(淋病奈瑟氏菌)的培养( U' T! H I' t) z! K: L
第三节其它类菌的培养
- ` G1 l# \: A ~# S! y B一、放线菌的培养8 |: X N$ }! f+ N
(一)放线菌培养的一般条件" H* t1 s D; {) a' Y
(二)放线菌培养基
: ^ m9 u' y1 { n: q8 K二、真菌的培养& c1 \! f5 E7 h7 N. {
(一)真菌培养的一般条件
3 c* O! J' x. @+ o- J(二)常见致病真菌的培养基
0 _$ e2 [) ]7 z/ T; q1 Z0 t三、支原体培养9 W3 v5 W' b; a1 j/ v M+ o* W
(一)支原体培养的一般条件' h* i m: K2 { u. u4 a+ S
(二)常见病原支原体的培养基- _4 m+ @5 g/ R \# N
四、立克次体的培养) E8 u0 C4 v. G1 G. D
(一)立克次体培养的一般条件# _: d$ a# k- g- ~) K
(二)常见病原立克次体的培养# _ R; {' v. D5 `/ B! y, m
五、衣原体培养
9 I% W; {7 K. R* M* t- W8 J(一)衣原体培养的一般条件
: l, C R1 q4 U! _7 ?' Q @9 E(二)常见的病原性衣原体的培养9 ^. _+ t$ z2 \/ Z5 y
六、螺旋体的培养
7 u+ y3 H) G( F- I(一)螺旋体培养的一般条件; h$ \/ }- L8 c V& e
(二)钩端螺旋体培养基- s2 m& P1 ^4 t& _9 z& Y
(三)常见病原螺旋体的培养) o Q- f* e+ `" M3 U
第四节病毒的培养
* A$ p" q* G6 O2 a) A一、宿主细胞培养法( j5 u$ i8 k+ h4 s" o) p
二、鸡胚培养法
+ B& o$ y* B7 k/ l. F* H& w三、各别类宿主细胞培养法2 v. Q/ q a$ C& ]
(一)EB病毒的培养! `! k. B3 s H) D# H5 T7 O7 A% f
(二)脊髓灰质炎病毒的培养
7 O( O2 p. f3 T7 D(三)乙型肝炎病毒DNA转染细胞系的建立和应用
& ]3 ]+ i6 H0 ?# M, P第十七章医学寄生虫的体外培养) f- [2 u+ N& ^
第一节寄生虫的体外培养技术概论
# F8 D# m; }+ O6 t5 M' D8 |一、寄生虫的营养与代谢特点
T+ \9 Q z U/ y二、寄生虫的体外培养技术类别
. l) s; [* `; S7 D, R(一)寄生虫虫体培养0 i4 y% k( F2 Y9 j1 e5 L
(二)寄生虫细胞培养; l3 R2 v | u8 v+ B, D7 a
(三)寄生虫的体外培养常用培养基8 E y! O; H+ g7 z: B8 m# }, c
三、寄生虫体外培养技术的应用
" M p& i, p9 o(一)在生物学研究中的应用1 K7 S; [% n& m1 Z
(二)在病理与免疫学研究中的应用/ r1 M3 U: r# J( v" F& ]
(三)在药物学研究中的应用
8 M o6 l5 S6 Q* ~第二节疟原虫体外培养
! K0 c0 ~) I) ^2 [一、疟原虫红外期体外培养: J: Q6 p0 j7 N6 A
(一)约氏疟原虫红外期的体外培养
0 X4 e5 U, u7 p(二)人疟原虫红细胞外期体外培养/ g% S# H2 S2 F. c7 W( K
二、疟原虫红内期体外培养' U4 j; F. q! S
(一)体外长期连续培养
8 b9 o" T0 H2 j6 ^. j V, ^. y(二)同步培养法
1 P. o3 }& o/ T! y) a( Z) B% w(三)疟原虫冷冻保存技术* z; o* _( F2 c* R/ W- v
三、恶性疟原虫配子体的体外培养% E, L! F4 W; e) o* z" F! C; `
第三节机会性致病原虫的体外培养
( c5 K7 J' A. O9 }) v一、弓形虫的体外培养. @" \0 B' ~2 f6 a( j6 [3 b
(一)速殖子的培养方法之一：单层贴壁细胞接种培养法; S- Q" a' s. n/ h
(二)速殖子的培养方法之二：悬浮细胞的接种培养法
9 @4 ^5 A, W+ R' X$ r& S6 |# r; X(三)速殖子的培养方法之三：在鸡胚中种植的培养法
5 b+ M, r; y* ^/ p7 @* G' l( F1 n(四)包囊的培养
- t9 h2 C. `+ F `; K1 w) s* y(五)弓形虫的冷冻保存技术
5 c3 I7 j* @6 x% X3 t9 t+ N2 ?二、卡氏肺孢子虫体外培养
; m' h( D& L7 L(一)用非洲绿猴肾细胞系培养卡氏肺孢子虫) N" \ f: m" x* I, E* |5 Z
(二)用胎儿肺成纤维细胞系培养卡氏肺孢子虫
' W8 u. T# C l5 a( L三、隐孢子虫体外培养% w- k* ^4 ~2 W1 H
(一)在组织细胞内培养
7 x c2 H$ p% U. ^(二)在鸡胚中培养; B# Z) K7 Y5 V* \+ h* k! ~
第四节日本血吸虫体外培养
8 ~0 T8 g! L4 l6 J一、培养基及培养条件: M: G+ X5 b) R. W7 w" L! c7 ~ A
(一)培养基的种类
3 @+ T) c. }3 j3 H(二)培养条件
$ j( i0 b- ~6 P }, U二、各期培养方法4 M$ M. ^1 r+ I9 x& ^& T5 [
(一)尾蚴人工转变童虫体外培养
: \& G6 n9 M2 u5 X(二)肺期童虫体外培养 T9 ?8 L$ T+ ^* G1 M+ b2 i
(三)成虫体外培养
" p g) n" B3 z# I1 S(四)虫卵的体外培养6 R" Z) F) N; @; @3 G
(五)毛蚴至母胞蚴的体外培养, D3 p& n! }5 p- ^, `, U
(六)子胞蚴和尾蚴的体外培养
$ u& R* N- T) ^(七)血吸虫成虫和童虫细胞的培养
2 o4 I6 n9 t& M' c% d9 p, W第五节棘球绦虫体外培养
4 N7 _8 B' ~* i4 X! F一、细粒棘球绦虫的体外培养 t0 h$ [- b1 T( o/ D% f
(一)囊型发育
]+ C( p: J6 U# {- L" x0 m(二)链体发育5 H+ n" x# u8 h: |3 Y2 `
(三)成虫体外培养
, X& J$ \0 w, N: g( u(四)细胞培养
3 @4 s$ Y1 j6 ~& G* b二、多房棘球绦虫体外培养8 N+ c L( t4 l( D( A
(一)多房棘球绦虫虫体培养: ^( `: |3 D7 r" |) s
(二)多房棘球绦虫细胞培养
' s) k" G5 l4 B3 ?' i0 W9 Z第十八章无脊椎动物组织的体外培养- U& [% {7 q9 l L4 k# u4 U: X
第一节无脊椎动物细胞培养的基本方法和技术9 e6 h1 x1 C8 H. H- U- c G
一、体外培养无脊椎动物细胞的基本条件
% P, \. \1 }0 M, X(一)无脊椎动物细胞培养基# d, m5 w) @* y) S0 W y
(二)无脊椎动物细胞常用培养基的配方
$ |: o1 f( M' M |+ u' Z(三)昆虫组织培养基的配制# a4 `% L% I% I5 u. ~8 X2 r
(四)体外培养无脊椎动物细胞的其它条件9 `' a: |+ ?7 v; ?) A0 R2 u
二、无脊椎动物细胞的原代培养+ _3 t4 r4 b( Z* b& M( E$ L/ O" R
三、无脊椎动物细胞的传代培养/ n2 C' ^/ W2 |- K s* k
四、无脊椎动物细胞的悬浮培养& n3 e, D) N1 }7 T* H: B8 }
五、培养细胞的低温保存和冷冻保存; @# c m1 f' |5 q& [, P/ Z
第二节无脊椎动物的器官培养
/ j, T" }4 j. K3 X一、软体动物器官的体外培养
9 p! P. J% b% a二、蠊翅目昆虫的体外器官培养- [" @% F7 k, S- e3 E! v6 }
第三节无脊椎动物细胞系(株)的建立
9 y$ p2 L# ^% R- L9 {一、昆虫细胞系的建立 i# `, e# m; V f0 c
(一)鳞翅目
t$ }1 {4 f0 T# U* X(二)双翅目
) z1 M, p) P) e) n7 E6 S& g(三)蠊翅目
) w+ q4 Y5 |: h/ V* ?, Q二、昆虫缺陷型细胞株的建立
- Z( _; S, v- r2 D' N3 J三、软体动物细胞系的建立! m. E9 F- v9 a% t! f+ n
(一)蜗牛细胞系的建立+ R# d; G8 f6 b7 G( B6 y0 |, x
(二)牡蛎细胞的离体培养
5 a' f5 q( A4 t' {四、蜱螨(扁虱)细胞系的建立/ S R. l/ E' }1 R) X; u4 {
五、建立细胞系的注意事项
* c2 z, s2 H& R9 A/ S第四节无脊椎动物细胞的大规模培养
, U3 u m- c9 ^: p& l2 G一、大规模悬浮细胞培养的添加剂
5 g& A h: _% w6 x9 Q二、低剪切力连续生物反应器
" h6 ]7 S* D3 t, k, z( ~三、有血清培养基扩大规模培养昆虫细胞技术
1 f% R. Z4 M1 [- A6 H; t, t(一)扩大规模培养的主要材料
! P! o% |' |, J% r9 }8 z: b(二)扩大规模培养方法
9 n* ^: W7 T6 Q$ h; p* r" v8 P四、无血清培养基扩大规模培养昆虫细胞技术
' v2 K7 o) M& U' ]! V$ s7 Z, N8 P第四部分体外培养技术的应用
) C1 U. K8 C% C5 M3 f! `第十九章体外培养的应用技术! m7 p% {# v8 G) F6 W# r$ K1 w
第一节细胞分化与体外诱导分化' P" \7 {$ ^+ x) `) n; v
一、正常细胞分化
( k- h8 L( Y8 h* m二、EC、ES和EG细胞系
2 }8 p3 k( f8 d+ G7 i, i三、ES和EG细胞培养和建系的基本技术- R3 Q6 P( L$ M8 F: _2 {6 n" g! L
(一)饲养层细胞, {$ o6 x" p5 B* s% L1 u7 {
(二)胚胎细胞来源
( T8 }' n7 K' z(三)ES和EG细胞的培养过程
' R/ f0 w7 k6 K(四)ES和EG细胞系特性和鉴定) t6 |# ?# J. o, X
四、ES细胞体外诱导分化
( a- u, N2 Z) ^; |/ s% \6 I(一)ES细胞体外诱导分化的意义
9 }; `- H7 n3 |4 n: c(二)ES细胞体外诱导分化的基本原理
+ t4 t0 m4 c: o% l+ w0 N! d(三)ES细胞体外诱导分化的基本方法( L3 Z# d8 y0 G: H
(四)ES细胞体外分化的细胞类型0 O$ K5 k: ~, |1 N
五、诱导分化细胞的永生化
: q4 Q3 _ N7 V第二节细胞融合技术
: X2 X# I& r" M/ A2 f3 U# P一、病毒融合法3 Q5 g4 h* M* V' S4 ~5 o! _" h
二、聚乙二醇诱导细胞融合法& E2 I: u4 ^+ H! ^ y0 e
三、电诱导细胞融合法
* ^- Q$ i, E# U0 S; ~; i第三节体外受精技术
0 k, P! m& Z2 s0 [3 P9 S一、体外受精的基本实验条件( W S, m2 _* k1 k% ~* u8 `
(一)体外受精所需的主要仪器设备和消耗用品
9 j" z8 S9 G3 z# V(二)体外受精与胚胎培养环境的设备和管理
6 n6 N1 s V0 O( a K3 w(三)胚胎培养液; Y, q) j) A" }1 x5 i' _( M
二、胚胎的体外培养
" G7 n( n( m( i$ a( U; p+ ](一)卵母细胞的收集
! \0 B& g: \! o: y1 ](二)精子的体外获能+ S1 A, i9 m' B" u; x. J
(三)体外受精
`! W' R6 k1 L! x(四)卵裂观察及胚胎评分! e8 [ S* s* _7 \. I9 s
三、胚胎移植$ ]: B, J2 d6 F- w
第四节基因转染技术与体外细胞转化9 y- N3 Z& A: L; c. O9 W3 y
一、基因转染技术2 n! _$ C$ }0 P$ T/ w% ^
(一)待转染细胞的准备- m2 W4 U. H4 |. F+ O, w1 \0 i
(二)质粒DNA的纯化
0 O8 c4 }( u' ?1 c# W(三)基因转染的方法8 N% r3 K& h! h! B5 ~2 _; ~
(四)转染细胞的筛选2 }% m5 [- ]; r! X5 e+ A
二、体外细胞转化0 j) U- w) b1 ?3 p2 `; ~
(一)细胞转化的概念与细胞转化的过程4 \; ~8 w _ C: A- C) O; ~
(三)诱变因素诱发培养细胞转化的程序* o- b4 _% ^$ S( g
三、转基因动物/ i$ E$ z/ h: U8 k7 B8 e
第五节杂交瘤技术与单克隆抗体制备技术5 n; S8 J1 d$ B D, W
一、杂交瘤技术2 x) v' R6 n( q; X$ j6 [+ O
(一)B淋巴细胞杂交瘤技术的实验流程
4 E1 D9 Q% C4 o, `# ^(二)应用于杂交瘤技术中的培养用液' X. c' p+ b( z) l/ e! p' M4 p
(三)杂交瘤细胞的染色体分析
/ ^1 A: y% w1 n1 r6 D" c K二、单克隆抗体& o2 g4 j# s% B! r; v. N. c: }
(一)单克隆抗体的概念) }# ^8 \% w9 Y& @0 w
(二)单克隆抗体的鉴定
( n% H6 }3 W1 t$ l/ z(三)单克隆抗体的生产和提纯
) G$ O; y9 i9 ?6 Y! N. K(四)单克隆抗体技术的发展 k# h+ z0 H6 O
第二十章动物细胞大规模培养0 Q' p6 N; Z* q1 X9 r
第一节动物细胞培养有关的特性4 l$ Q- _4 ?; c5 s! q5 P* @$ @
一、动物与微生物细胞的差别: A8 K/ E4 e1 j2 ?0 B0 }: I
二、动物细胞生长特性
6 Q) J9 ^' _8 E1 C4 d第二节发酵% `/ c, Y& y4 q. B6 i( J
一、培养方法
- q: b; ~0 ~3 X7 x$ ^5 p9 i3 ^(一)贴壁培养
% {' w% ^% s2 ?" Z8 g: Q(二)悬浮培养0 B' ?5 R; p' f J7 V5 }' ?, j
(三)固定化培养0 M" C% y1 g! \6 n4 J# L/ o, y
二、动物细胞培养的发酵工艺
9 @7 |1 I, r0 s. r; [2 {" p4 W# \(一)分批式培养- x ^; B( ]: X4 u8 v5 g7 y( K
(二)流加式培养$ c/ S2 e, t$ `7 y7 p
(三)半连续式培养
, |; j) J; C, f7 z" p+ {(四)连续式培养
, c' G3 }( t' [4 P(五)灌注培养3 W, L1 m) i# W+ v7 ~
三、发酵工艺条件及其控制9 j$ U# |, Z( n: J7 s- [
(一)培养基4 J* v- {! k! Y; T% L3 H
(二)培养温度的调节控制
. m; R8 C0 g, Z, M" q(三)培养液酸碱度的调节控制
7 m( O; I0 @' O9 G% y" |(四)溶解氧的调节控制6 R$ x# I0 L5 E/ z, v0 {# D: k
四、动物细胞大规模培养用生物反应器2 z3 ?& [( B9 i& i+ g0 F5 e
(一)搅拌罐生物反应器
) N% L5 y9 L- s3 e9 F(二)气升式生物反应器
8 g% X; p. N4 U! g5 X(三)鼓泡式生物反应器
, O) o0 O0 C; R8 w(四)中空纤维生物反应器
6 S6 _4 L" W- q0 ^! n第三节动物细胞微载体培养技术
6 R; p- q0 I3 }: C* t' g# Y一、动物细胞在微载体表面的贴壁生长机制
3 n; V. I# |; t0 I* V( J- P8 i二、微载体的主要特性4 }$ M! @2 G& I+ Y R: C% Y! a
三、微载体的种类及其性质
3 ]2 c0 w: F* Z(一)交联葡聚糖为基质的微载体9 F1 _& I6 Q6 x: [$ _
(二)塑料为基质的微载体
3 L/ r4 w- G" F7 ]- Z7 B(三)明胶/变性胶原微载体# D1 W- |* w9 e2 l1 `8 e9 N
(四)玻璃为基质的微载体
8 g( g3 n7 @$ c$ D( ~(五)纤维素为基质微载体1 ]" w+ f; V: F, N) I5 `0 [
(六)液膜微载体' L- ^) }6 y( \: l! g) [
(七)大孔微载体: m- H$ j/ A8 U5 z
四、微载体的选择- C- _$ g& D$ Q& z" K3 c
第四节动物细胞大规模培养技术的应用# x) a! e2 I8 m1 w/ I& S6 s
一、在疫苗生产上的应用
! M! C$ d8 D# Q# W" K4 e二、在干扰素生产上的应用( u$ m2 f# ^! l' z" F0 j6 D, L2 S
三、在单克隆抗体生产上的应用
& c! z& q/ H, u& [9 J4 _8 D四、在其它基因重组产品生产上的应用: T/ l' u2 W- O( l, A
第五部分植物组织细胞的培养7 x7 L- U, F3 y- u$ W" N
第二十一章植物组织细胞培养的基本原理与技术
x& a2 U/ {2 J" d7 G/ U7 F第一节植物组织细胞培养技术的概念和类别
3 d! V8 Q! w1 Z9 g9 o4 g) H) N7 b0 a一、植物组织细胞培养的基本概念6 _' k2 x' N" B7 n
二、植物组织细胞培养技术的类别* {; b, \; K5 ~
第二节植物组织培养技术的发展简史
: u v* n0 D% ?9 q& V一、植物组织细胞培养技术的创立阶段9 k1 q ?. n* v1 N
二、植物组织细胞培养技术的发展阶段- Z( N) c$ ?& O$ V* g; D. e
三、植物组织细胞培养技术的应用研究阶段& J2 v7 [3 L# |. D, F; d
第三节植物组织细胞培养技术概述
$ H: N* l5 Q' H ?' @一、植物组织细胞培养的基本条件) Q2 l0 k1 y2 H! o( P, |1 x
(一)植物组织细胞培养的营养条件
1 y0 r; v, ?/ \4 f: l8 s1 }3 ?7 R7 W(二)植物组织细胞培养的环境条件
4 W8 Q: K* I( E v5 R二、植物组织细胞培养的基本方法和技术
5 G( N0 x5 a- }" Z; U9 Q1 s5 F0 C$ u(一)植物组织细胞培养的基本方法
: x/ _( e3 ]( ?% m5 e7 r(二)植物组织细胞培养的基本技术
5 m* E' z; X% F t4 l三、植物组织细胞培养的基本程序
, ]7 [! Z7 t' u四、植物组织细胞培养物离体生长的基本方式
# {+ e+ V* o5 a(一)直接芽分化的方式
+ G' K& y9 }( U, c! Y0 {3 W(二)通过愈伤组织形成的方式; f+ k4 ^- F% ]$ _, ~
(三)胚状体形成的方式
+ `: q, L, O( T$ P9 v2 i" O五、植物组织细胞培养物的鉴定
2 m& ^9 p2 M) Q+ R(一)植物组织培养物的组织学观察& ~- b2 Y4 ?% J& L9 ]
(二)植物组织培养物的染色体观察
; t8 e$ O# F1 ]+ \. ?3 d六、植物组织培养技术与动物组织培养技术的异同
+ m1 T: F6 N( O% }第四节植物组织细胞离体培养时的生物学特征$ f% p! s( P2 a0 H7 L2 \
一、植物组织细胞离体培养条件下的全能性) j$ q1 s7 H. n
(一)植物组织细胞的全能性具有普遍性
# ]/ D* U7 O& |" y1 f% [) a# S+ H(二)植物组织细胞全能性实现的途径
- Q' S% u. p( X- W L二、植物组织细胞离体培养条件下的突变性
7 L, H- E7 X- b& h, @! ]4 u1 l+ k(一)植物组织细胞的变异性具有广泛性; ]9 X/ S( Y/ M3 \9 x% c
(二)离体培养的植物组织细胞变异机制1 F3 o, b4 i+ A! ^
三、植物组织细胞离体培养条件下的类减数分裂现象
; [0 U& g1 h0 h1 @) L! v, ?(一)植物组织细胞类减数分裂现象的存在. E( [' g4 E! l* }2 t
(二)体细胞类减数分裂发生的机制& F; v" M" f: B% q" ^# v, y. z
第二十二章植物组织细胞培养各论
1 `- j, F$ A3 P! |; e6 ?6 x第一节植物的胚胎培养$ z, o+ G. a" k- N; [ ?3 d3 o- N
一、植物胚胎培养的概念
6 c" q; ?* b# |& d3 y二、植物的幼胚培养
& R# J- G2 V7 X. k" Z(一)幼胚培养的基本过程
% d7 N0 V+ D& s& j1 S(二)植物幼胚培养的实例
/ \9 ^7 n# j$ B1 i* } N, _三、植物的成熟胚培养
* G0 f& W& i; M* u# t2 l四、植物的胚珠培养
/ S0 _4 x6 k, E(一)胚珠培养的基本过程
* n+ K1 ~$ p; l* P- \! [1 Y' C2 L(二)胚珠培养的实例" b2 n5 O: k! y/ Q; v
五、子房的培养
# i+ _: g8 }( L* P' Y(一)子房培养的基本过程
5 o" n6 k& Z E6 Z; G(二)植物子房培养实例
1 a) e8 U% I5 e六、植物的胚乳培养5 }8 |' G* `! D4 k9 o+ y
(一)胚乳培养的基本过程
8 s" z' I" S' R1 ^% @(二)植物的胚乳培养实例
6 F1 |! L6 g( c I第二节植物的器官培养
2 c4 W9 [& m4 ?! N一、植物器官培养的概念
& Q' ]7 U$ Z. h9 B8 [ u二、离体根培养! q& b9 C. s# H7 @! ~5 ]- j! O4 l# g
(二)根培养的基本过程
: ^- Z7 P; @& q- I(二)植物离体根的培养实例
5 b/ D8 {. X9 W三、离体茎培养9 f0 L& Y: k& J
(一)离体茎培养的基本过程
4 i6 k Z& O9 d(二)植物茎尖培养的实例- U' a W3 d u0 R! x- u4 B' ?
四、离体叶培养: {; ?3 B0 m& P9 P% A
(一)叶培养的基本过程
6 R& ~$ d7 u9 Y( T3 x# a(二)叶器官培养的实例
3 Z3 N$ y+ D8 q: q. E6 p) G) ]8 F6 c# @五、植物花器官的培养! p: y& o+ R+ g
(一)花培养的基本过程
' A$ X$ f1 F0 F6 ]+ l(二)花器官培养的实例
& Y! e; s9 h9 E% X. i六、植物种子和果实培养1 T; y; @+ Z* Y
(一)种子和果实培养的基本过程0 _1 o% I& S: B) I s/ L7 g( z
(二)植物种子和果实培养的实例2 O% j2 p P3 r- P- c
第三节植物的组织培养
9 V4 z8 d2 c, q+ Q/ e& c3 j$ h一、植物的组织培养概念
" I/ p5 k, a" C% i b! h3 V2 f$ u+ n二、植物愈伤组织的培养4 X0 S& r3 P6 @; M
三、植物胚性愈伤组织的培养
) [1 q# k. n- g* p2 _* T0 h* v' \(一)植物胚性愈伤组织培养的基本过程
* n6 P" s3 n6 n% D! U* j/ u. L(二)植物愈伤组织培养及植株再生实例
* t0 w) @+ d) S( Z7 V第四节植物的细胞培养
/ \) _) M/ I x! K一、植物细胞培养的概念
8 x5 G) d- |1 M& r" ^3 {二、植物细胞悬浮培养
$ k$ d7 o% g% w+ Z(一)植物细胞悬浮培养的基本过程' L' Z# A; E. g4 |' }1 d; V
(二)悬浮细胞的培养实例+ q% u$ t$ p& d& Z. k; b- i& k# V
三、植物的单细胞培养+ L: C* w2 V, F5 h5 e
(一)植物单细胞培养的基本过程
( `" d8 x8 v Z% P$ _% L(二)植物单细胞培养实例
6 u; l3 m8 g+ U9 H6 T第五节植物的花药与花粉培养
% R5 P. X% ~( ?' m一、植物花药与花粉培养的概念! d5 a: \- e3 @/ _" M
二、植物的花药培养
! P/ k6 o8 f' f; J, f1 V(一)花药培养的基本过程
[1 O- V% X: \% u1 f: K4 X(二)植物花药培养实例
+ r3 k1 C$ s, Y三、植物的花粉培养
' p/ N& @" e4 Q2 A% u(一)花粉培养的基本过程, r+ K5 q7 F. R. T7 }( t
(二)植物花粉培养实例
: d. G; |5 P8 P# \: `: }4 u$ W第六节植物的原生质体培养
2 @! ]0 l3 n: p- E3 D1 U0 d" x5 G一、原生质体培养的概念
* F9 M; {/ F0 M6 t二、原生质体的培养
( L) T& x9 b) z/ Y/ o6 v& J(一)原生质体培养的基本过程
" r9 F* o% ?! a4 I9 N(二)原生质体培养实例
, X7 o. o; k3 [# ^第二十三章植物组织细胞培养的应用
; F" {2 @1 y. d第一节植物组织细胞培养的应用技术6 P* z( h1 ~% R4 H$ J2 Z8 q! c; ~
一、植物基因转移技术
' O) s$ Y0 i4 R(一)植物基因的获取
! I# ?/ |, z2 X1 p. B(二)植物基因的载体3 J* `0 M ^+ f# V8 q: `1 E% ]: B. J
(三)植物基因的转移方法3 d, B. v/ f9 }' c0 o
(四)转基因植物的检测
" Q$ k' W/ ~9 H* t(五)植物基因转移实例 r1 x& z0 p1 V7 C. p' O' ]
二、植物体细胞融合技术
6 Q6 y4 _# }/ z$ u(一)原生质体融合的基本方法9 X# @6 o3 |( ]+ @ ^6 d
(二)原生质融合体的生长发育" [6 d5 D, ~' L
(三)原生质体融合实例$ g! [; D/ h* A' h
三、植物体外受精技术
" h( E* B# D. B7 W4 `( P四、快速繁殖植物技术- d5 X g) c2 n" `) ^
第二节植物组织细胞培养在农业上的应用
5 l$ f: c- x5 ^. ~. y一、利用植物组织培养技术改良植物品质
7 {2 D' F/ c2 B8 j0 D+ ?% G, @) \(一)利用植物组织培养技术进行倍性育种7 D& i7 N4 X; G8 e; c; z
(二)利用植物组织培养技术进行远缘杂交育种
# m6 O- u5 u; s0 u. v5 ?1 a% ~6 O(三)利用植物细胞培养技术进行突变育种
9 X- N$ C. ^* [4 o. x* a二、利用植物组织培养技术培育脱毒植物* N+ b/ p. Q8 \/ E
(一)利用茎尖培养技术进行植物脱毒3 v- V4 U4 f; N. T* h
(二)利用植物组织培养技术进行植株脱毒( G0 f- o0 w+ {. G
(三)利用植物组织培养技术快速繁殖植物
0 e2 U8 k' m; R三、利用植物组织培养技术保存植物种质+ T: S8 h# ~5 k! D! D
(一)植物组织细胞超低温保存的优点
6 J( y$ t- G' p(二)植物组织细胞超低温保存技术9 \3 E% K9 w9 O
(三)植物超低温种质保存实例
2 w b: z3 F) Y2 u$ Q, D# X四、利用植物组织培养技术合成人工种子$ v K) d) `% O! K W
(一)人工种子的特点7 `) P( W; V) y \3 Z- m3 [% _4 a* L
(二)人工种子的应用前景
) L9 M) A7 T1 H8 w& H(三)人工种子制作的基本技术& y0 K, o U8 c/ q4 Z( r
(四)人工种子制作实例
4 ^7 x6 R! d$ S+ {8 t, Y# h4 K" ?第三节植物组织细胞培养技术与植物产品生产
6 @4 K$ `' r4 R: Q) |& [% L一、利用植物组织细胞培养技术工厂化生产试管苗
% B4 d- L+ p. v7 J" W3 L: ~(一)用植物组织细胞培养技术建立植物的无性系
' }: b3 Y$ h8 r: _' I(二)试管苗工厂化生产实例/ x1 c' ~. z& w& N
二、利用植物细胞大量培养技术生产植物产品
9 F2 s8 e, D2 a: M0 U6 K7 [( Z(一)培养的植物组织细胞积累次生代谢物的特点
+ y) m5 K; Y# m* C( J6 B. z4 B(二)培养的植物组织细胞积累的次生代谢物之类别
1 H( j% P6 {5 @ \4 b/ V( F2 M(三)利用植物组织细胞培养技术生产次生代谢物的方法
( g( j3 F" c7 A; }* e$ A* S(四)利用植物组织细胞培养生产次生代谢物的实例 V! M5 n" q4 h, S) F
第四节利用植物细胞培养技术生产植物药
( H7 i9 H1 L$ ^4 ?5 V一、利用植物细胞培养技术生产植物药的优势和不足
8 d* }" D* M. I' j二、利用植物组织培养技术生产的植物药的类别+ O9 p1 W/ [9 @
三、植物药物生产的主要技术" L0 _1 T7 R1 A, K7 P
(一)发状根培养技术
& i2 Y7 v% l: r1 }0 [4 y2 i1 _# C(二)两相培养技术3 x& H& x9 g6 J8 p" C8 ~0 I& `
(三)反义技术
% @0 u# k. N( E; d) k* z- {9 f$ Z四、利用植物组织细胞技术生产植物药的实例
: H# i* W, c7 u% [+ N五、植物药工业化生产实例
& \0 u# e9 s: g0 J1 @; j' k) u附录
9 O- H3 B( y6 R, N2 T2 M6 a附录Ⅰ无血清培养基及添加剂供应商一览表
9 ?+ i% P2 g. c2 S附录Ⅱ水合物的等量值表# T3 M! [: u+ w; C N) W! J! u$ r) i
附录Ⅲt界值表' j# v- a' Z% g8 Q4 p9 a% x i
附录Ⅳ离心机转速(r/min)与相对离心力(RCF)的列线图
* Z+ l% }8 \* H+ ] |
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发表于 2011-3-20 08:51
发表于 2011-3-21 11:20
