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* Z+ Q; B+ V: m, F* f: g# U
9 k' n9 I$ G/ J4 b目录:
7 x5 ?* s" g/ K! a' |一、体外培养的概念$ y' {0 d- l, X+ f6 d7 ~1 B7 {
二、体外培养技术的发展历史
1 k; Y8 q, I- x _- k- d9 I(一)体外培养技术的创立2 \' O' M V7 A& M
(二)体外培养技术的发展7 y* r! J5 c% g* q% D' y1 R
(三)我国体外培养工作的发展情况) d- N% h/ w& d+ g* q7 Q
三、体外培养技术的主要类别* p9 ?5 }/ N# v/ W6 C# b, n. a5 h
四、体外培养技术的应用3 o. Z% H3 u r2 w% s
(一)在组织学与胚胎学以及细胞生物学领域的应用4 N# m9 ~3 z- C6 [5 O
(二)在肿瘤学方面的应用0 |# R2 r7 t8 l. D2 J
(三)在微生物学领域的应用
/ R# q8 U7 M; R% \! M& G* O7 o(四)在免疫学方面的应用
6 A: R0 J v) D% ]0 O(五)在药理学领域的应用* }2 a4 G& M/ t2 j2 V1 W
(六)动物细胞与微生物大规模培养技术在生产实践上的应用) ~+ `! Q+ S) l O2 P0 d8 G
(七)在现代医学领域的应用& G+ Y0 X7 Y+ N
(八)植物组织细胞培养技术的应用
' d! @# L# R' S5 i五、对体外培养技术的评价
6 _( x8 B( l& k. z" j6 f第一部分体外培养的基本原理与技术
3 U5 b! ^. P& u ~1 `$ G4 u第一章从体内生存环境到体外生长条件
! ?- s+ C5 y& ]( m4 @+ Z- K第一节体内细胞生存的营养条件. u$ s6 p& u5 Y9 p: r0 g# R4 q
一、水* p" G' [3 r+ _ |2 u
二、无机盐类
' K+ w! f0 j! M+ [' w三、葡萄糖
& c5 w; L# f& x, F四、维生素
7 q8 _: k9 C9 z; j五、氨基酸% d; ~6 A6 L/ n1 @) `2 V, q; O
第二节体内细胞生存的其它条件
! _( d8 \! y0 C D& h9 g5 t一、温度
9 S" F* R. ~! Y6 `, G( `. M7 J- ]# w二、氧和酸碱度
8 W/ k) U; ]( }& _7 I! j三、体液渗透压 g+ H! T$ M M% A) R" N; S8 B& c
四、细胞之间的相互联系/ R8 U' P6 ^- p- S/ l! }
第三节体外生长大环境+ `6 N. X% _# E
一、体外培养实验室5 Z4 K3 f& q( Z4 b
二、体外培养的设备和器具
; {1 @4 _( Z" h4 S3 l(一)大型设备和仪器& M4 [9 j& Y1 \( B
(二)培养器具
& |3 i8 j% ]. `9 I* N U第四节培养用液
" t8 ~( g8 N3 }. v v一、水与平衡盐溶液4 {& t6 b$ ^) V3 m; _ ]+ }
(一)水与缓冲液( q' {* J9 C; I" y+ r* e4 `
(二)生理盐水与平衡盐溶液
$ r9 N! u8 T/ X3 c y4 t+ N二、培养液
5 W! O1 K) H# Q" n6 J& v. l(一)天然培养基% h; [: A* `+ y% d6 G: x# |, ?! t
(二)合成培养基
: C# Z* O! A3 Z2 x& _(三)无血清培养基% J6 O8 ~8 s9 D9 A0 ^9 Q' h' b$ p
三、体外培养的其它常用液0 B* O) i/ m) G9 u* r1 s8 {
(一)其它常用液的类型
" r' I Q2 E7 ](二)其它常用液的配制) r' B6 X5 G6 H) z' ]$ o9 p
第五节细胞在体外生长的其它条件% ?8 D; F) u6 B+ t
一、无污染的气、液相环境; \/ ?3 J) [/ ^1 z
二、温度
, P/ |% `7 e0 q; Z" p a! H三、生长基质# G# {8 ~( A$ v/ i/ u" r9 y- k
第六节清洗和消毒' B& d9 E" q5 f0 w- V0 ]5 B
一、培养用具的清洗
$ Y- ?9 |! N+ g, Q) n1 d/ \(一)玻璃器皿的清洗, x' p: b9 n: N& b6 G; g' ^ U
(二)胶塞和塑料用品的清洗
|& S2 x! @- x6 O: t- r(三)清洗后物品的包装" Y$ o: f4 Q" p1 Q9 r B. X
二、培养用品的消毒和灭菌8 v# }1 g. m$ u! g! R, o6 H! U
(一)物理方法1 f, m- |- Z. L8 u
(二)化学方法消毒
& d8 |% P; ~% Z1 A3 V& B, q" Y第二章体外培养的基本方法和过程
; Z& l% E: \" `3 n) g4 I: Y第一节原代培养% X! P; ]7 h8 A& a u9 F
一、原代培养的过程: {# T9 t; j" f8 y- S! K% r
(一)取材及培养材料的制备' z5 A- l3 e# m0 g0 J: U
(二)分离(散)细胞的方法
! h& y2 B! v9 m' Q4 B(三)接种与培养过程
: w' Y r4 t6 f(四)更换培养液
2 ?0 h8 e4 I, j( S( z/ k( H二、原代细胞培养方法的注意事项
; A c& J) D+ M/ n s6 n第二节继代培养7 P3 E3 B) |4 k
一、原代培养物需要传代的指标
/ ]. k( ~6 k( `7 S二、传代的过程
f* ]1 ?) v$ k: r9 G% f三、传代培养的注意事项0 _- ^/ F) r, h
第三节体外培养的基本方法和技术1 f, a+ ]2 M( T" Q* r
一、悬滴培养法$ g. l0 ~8 l. s9 `, ?& G$ r- r( u
(一)Maximow双盖片悬滴培养法1 f# c/ }; R# i% M" Z. s. W
(二)改良的植块悬滴培养法
9 N* {$ H/ q8 W7 A二、培养瓶培养法1 C' @3 Q+ }' D
三、盖玻片培养法1 }; l4 T; p! j: ^
四、旋转管培养法
/ c6 r! }, p9 m" @五、灌注小室培养法0 [8 S" Y4 c4 |0 u5 i$ n
六、培养板培养法# F3 Z: {1 C7 r/ G, O
七、二倍体细胞培养法
6 J; J' w; O2 ~八、克隆培养法
6 d2 h! }0 D. U: k+ K7 [九、中空纤维细胞培养技术
2 {; j0 j$ H$ v5 [# z" z5 ~0 Z. `十、微载体细胞培养法3 ^6 N- h5 {& y$ ?
十一、微囊培养技术
2 l" s. ]+ h$ U1 K# p% F$ u第四节培养物的冻存与复苏
}. S/ F5 p, c: o+ ~一、培养物的冷冻保存与复苏原理
5 C# Y* H0 t" A5 ^(一)冷冻速率/ F3 t) V' q! w+ Y
(二)冷冻保存温度: S: w Z* A1 M7 `3 K0 X
(三)复温速率
; w9 [: V1 s* P/ A; C, r! ?% f f% K(四)冷冻保护剂3 i* ]& w4 y9 ~( }' t# e3 I$ y
二、冷冻保存方法
. h& S& ~5 f- b1 e8 ~3 V$ ](一)非玻璃化冻存方法
4 Q6 J: a I2 b1 P! E(二)玻璃化冻存方法
: R3 ?4 T3 R# `: K三、冻存细胞的复苏& I8 P3 l' Z& g4 c
(一)非玻璃化冻存细胞的复苏方法
7 c4 \4 u5 ~) }$ n; _- T(二)玻璃化冻存细胞的复苏方法
% {, k/ Z( o% n$ J3 R6 i第五节培养物的污染' L) p2 F' s/ A0 R+ p! H. v
一、微生物污染的判断
+ k, Z: T/ M# j% u/ n8 k1 R9 V& t(一)细菌的污染及其判断! |9 V9 w1 W6 J' f% z
(二)真菌的污染及其判断4 X4 ^% H r" P: i; n+ p
(三)支原体的污染及其判断
( ~$ Z$ d2 j! V0 H3 i" K1 p' j(四)病毒的污染及其判断; ?. P7 x7 g1 w3 U* z$ S* ^
二、污染的预防7 E s6 ]2 i$ {) T2 y d
三、污染的排除. E5 c$ `4 T+ { q) S8 W7 h
第三章体外培养物的生长生物学3 [( c# W$ ], p- D+ b7 J- c
第一节体外细胞培养物的生长类型: ? C. f) c: n; L C; M
一、黏附型细胞7 |$ C* a# j: T O4 T( \
(一)上皮型细胞( e, f% ~9 M, |- ]( g) R
(二)成纤维细胞型细胞6 b4 U' N, ?9 V. I+ [9 `) r
(三)游走型细胞
( q) _" _+ d; M- }7 F(四)多形型细胞
8 r1 d C! B+ w* Y; W二、悬浮型细胞
4 M p8 |4 y$ b3 @第二节体外培养物的细胞生物学特点
; k" ~ x- f& n一、培养细胞分化状态的变化& Z- Q- y. Q. [
二、培养细胞的增殖能力% A- @1 e2 z1 c! e3 E3 Q
三、体外培养细胞的生长过程
' p! C" b! H: l% h(一)原代培养期
/ j# ?3 U, X0 B# U, O( P4 N(二)传代培养期& R) T( k9 ^# N6 S
(三)衰退期
8 H0 `$ t$ }3 \% n四、体外培养细胞的形态学/ a! s8 L1 J/ M& f( n9 l! }
五、植块培养物的生长生物学# T# ] ]7 R$ Y) `
第三节影响动物细胞体外生长的因素
8 |4 l! C4 d2 i4 ]0 A一、营养成分与生长基质成分对细胞生长的影响
" c3 o$ _, g3 w2 {! @(一)血清的成分与作用5 ?1 E$ i5 R9 S! U5 H7 q8 B
(二)无血清培养液的设计及应用$ v* y8 W% T9 I) N% O
(三)生长基质成分
0 H8 A6 p- I: L D& k& t) Z) U2 F二、温度条件对细胞生长的影响* ^8 x6 @! q+ R7 a
三、气相环境对细胞生长的影响 D, m h) K: Q
四、培养液的酸碱度对细胞生长的影响
% z% w' I: {7 }% N& y五、辐射线对细胞生长的影响
2 j; q6 x+ M$ t( S# c- d, W2 X2 \六、超声波对细胞生长的影响
5 }4 Z S5 y: k2 f6 J- e七、影响细胞生长的其它因素
3 X3 m# z4 y; K第四章细胞分离与纯化
$ {1 ~( | |# h8 U% b( B. \第一节解离(散)组织制备细胞悬液过程中的细胞分离
6 ]# x/ F' S2 g' m! B; a) J第二节利用细胞体积和密度进行分离纯化的方法
3 \+ K4 d& I( b& _- {) a一、一步密度梯度离心法! l) q: u; h! ] ~. P/ `% r
(一)血细胞的分离0 ~% p6 F) o* X7 a. l: F* F! g( S
(二)玫瑰花环细胞的分离8 Q# P4 ^& @7 c5 C0 i& [9 k
二、等密度梯度离心法
7 P% y% u: X" z* o( _ l(一)连续BSA密度梯度离心法" R+ X7 ]. R! h# r( B9 K
(二)非连续BSA密度梯度离心法
) r$ o& }+ W" T+ o- l" u3 `(三)连续Percoll密度梯度离心法
, k% U# |& k v8 n. Y. f(四)非连续Percoll密度梯度离心法
6 ~1 e$ u4 w9 P8 M& |三、速度沉降法
, S& ^1 O3 W2 Z' \3 Q/ O! p- I(一)低速离心速度沉降法
+ [2 H8 U$ F1 }) ^1 R- s(二)简单策略沉降法% A! r7 B/ X5 z- I# }; _) ^* K; G
(三)简单重力沉降法分离白细胞与红细胞5 i! A4 ^+ m2 D/ v: S5 F
(四)简单重力沉降法分离粒细胞
- _& I6 a8 h2 v$ r四、离心淘析分离技术
4 V, T+ A+ L2 L' x2 l* j9 W9 f! w1 F第三节根据细胞表面电荷的细胞分离方法
/ B" M( Y& j1 `一、自由流动电泳分离技术. ?% ~+ X. I3 Q" e
二、密度梯度电泳分离技术* u7 l' }( S- q* |9 n% _
第四节基于不同黏附特性的细胞分离方法' X$ k$ I/ m( ~* S2 N2 N+ k/ J
一、差速黏附处理8 @% ]! l5 c$ l( N
二、葡聚糖凝胶G10过柱法
- ?9 ]( o% z& Z. ~% \, I三、羰基铁粉法' W @4 D" ^0 a
四、尼龙毛分离法
{2 z& w& Q& D. y" t第五节利用细胞表面标志分离纯化细胞的方法
- g9 k" n% V& n2 S一、免疫溶解法
+ W, i' O; c6 t二、盘化法5 H) r8 f* \; v7 g2 ~, O1 y! R
(一)直接法2 f- u6 O( L- E0 a
(二)间接法/ h+ G; {/ K( F! ?& a: l# r, U" \
三、凝集素凝集法
# Q+ z2 V; p: k. i* S/ b( Q9 x(一)花生凝集素凝集法分离皮、髓质胸腺细胞& x0 Q4 F- m. _7 Q- t% v$ L3 K
(二)大豆凝集素凝集法分离T、B淋巴细胞
; F1 \: o* P1 W5 ~9 K1 ]) ]$ a四、玫瑰花环分离法* z @" d9 |, b* y6 q$ B2 e
(一)E玫瑰花环分离法 c! D( u' Z6 E; h3 W9 Y3 o
(二)EA玫瑰花环分离法
* v+ S; A/ I" M C' P2 E0 `(三)EAC玫瑰花环分离法
) v- F: D0 y! s5 {: X五、流式细胞分选术- T3 M J0 I; d4 O
(一)流式细胞仪的结构和工作原理
. W, L0 h# I5 t( V F(二)流式细胞术分选细胞
. h2 g I; ^. _六、免疫磁珠分离技术
% h0 [% _3 ]: I9 X }, K" w第六节利用其它细胞学特性分离纯化细胞的方法, W4 Z) t& `2 Y2 r' n
一、反复植块法
+ `: a3 G' p. E4 |3 I% _二、有丝分裂抑制剂处理- c5 I/ y' @' w' d& D, t
第五章细胞系(株)、细胞克隆与细胞周期同步化9 p1 f. _/ Z4 ^( Q, W
第一节细胞系(株)的建立与鉴定
/ h1 a/ H4 `& Z' Q9 b x一、基本概念8 G8 N4 |4 l# B" B- r/ c/ d' o3 ?1 M
二、建立细胞系(株)的档案
7 I3 O/ s# |7 l- t) N k8 k4 s三、细胞系的鉴定
# M: k' s O4 ?- ^& A(一)细胞系鉴定的内容: S# ^$ I; w+ H5 q% R |1 S7 z% l: }
(二)细胞系形态学的鉴定方法* a( P: J9 I8 g0 ^# c. z" x
(三)细胞系的染色体数目、核型及其带谱分析
( m1 \8 g6 v. J' @- h) x% t! h8 o(四)细胞系的同工酶酶谱检测
& t6 A: x8 Y+ r- }5 {' ?, n四、细胞系(株)的保藏0 } S/ o4 z7 e6 S+ }. x9 C
五、国内部分已建立的细胞系或株名录7 e7 g2 g0 y+ v M, A: U. ^
六、国内部分已建立的单克隆抗体杂交瘤系或株名录
h6 u9 V4 z( F% K3 J6 S七、国外部分已建立的细胞系或株名录
0 v8 q+ u* U9 d. u4 u7 o) b第二节细胞克隆4 P* u3 l' ?# V- K* Z
一、克隆培养技术
: e" R$ n4 D0 I; X" r, M: ](一)稀释铺板法
( ^. U% S4 k% i3 n- f(二)饲养层克隆法7 o; B( G+ ?! e$ K
(三)胶原膜板或血纤维蛋白膜层板克隆法
2 H& C) j- r+ d7 Z(四)琼脂克隆法
& E# |2 A o3 B1 O- N(五)在琼脂基底上用甲基纤维素克隆化+ t0 `% n1 B4 Q# t+ F
二、影响克隆形成率的因素4 E* t$ [( R( j0 {/ z d4 _- f
三、克隆的分离" x$ S( d2 ]8 P$ X; c/ n
第三节细胞周期与细胞同步化" _# Z) b& T2 o$ a3 U$ F6 i2 v
一、细胞周期9 K% F1 \! m: H
二、细胞同步化
+ N! G, y1 W7 K4 t(一)各期细胞的分离
) s$ X% Y# R3 k+ b) A) @ {4 w(二)细胞分裂相同步化法0 k- V6 y* {3 {2 L- w
第六章器官培养4 U2 c. F6 b- e" m/ e
第一节器官培养技术概论7 W y: j2 a8 u
一、器官培养技术的基本要点0 ~/ z0 m1 v" X
二、器官培养技术的发展简史9 j: z* s$ i% B0 E3 E5 m. Y; J" C& V
三、器官培养的基本原则
+ P& D, l' E `3 Z. ](一)养分的供应与取材/ ~2 {9 N9 T8 t+ k8 c
(二)抑制细胞迁移& `+ P0 r5 N- \! g7 g/ s) J+ u
四、对器官培养技术的评价. R: b2 O9 @9 Q7 \
五、培养器官的生存环境及影响因素4 n) M/ _1 H8 C F6 S
(一)培养器官的生存条件及其影响- S- X8 l5 D U: A7 Q; T) e/ N
(二)培养器官的内在因素及其影响
: e1 Y* k+ R9 {9 r% _第二节器官培养的基本方法! v6 O+ P2 d6 S2 c
一、表玻璃器官培养法8 B- r- l2 m+ u& {/ _
二、琼脂凝胶培养法(Wolff器官培养法)
5 L: S( Z1 R4 ?# N3 a# {三、悬浮培养法
5 k- Y( L% \: T! M" C# b四、直接漂浮培养法, b; ]9 ~# M; n. [$ o* J4 ^
五、擦镜纸培养法
) ]- T' j2 _0 Q4 T六、金属格栅器官培养法
6 ~ R2 t4 f6 y. F6 k7 w ~七、琼脂小岛器官培养法9 Q1 Q2 Y% Q- a g- B0 U. C8 {
八、陈氏滤纸虹吸器官培养法. s4 C' B' U6 f. @# m# `* U8 I
九、灌注式器官培养法
+ D, D0 \7 L1 ]/ i/ W" c) k十、旋转管培养法
1 n# H" A8 Q9 g; O" a! O十一、摇摆式器官培养法
" R, {* Q& M C/ b+ q. x十二、器官灌注系统
* C- k6 O6 r& M. S* P5 x" O5 y十三、鸡胚尿囊绒膜培养法
' h7 [* j+ U, }' f5 t" K2 C3 P. e5 m十四、早期鸡胚胚盘培养法
2 X5 f, @$ s" t, @; z第三节器官培养各论, B5 k1 K. n* ` ]2 _* b [
一、胚胎肢芽的器官培养
" E6 x% G% k, ?9 G1 e j(一)胚胎肢芽的血浆凝块器官培养方法4 U% [/ [8 Y& k) x
(二)胚胎肢芽的琼脂凝胶培养法. T/ H& l5 E& P7 q
二、胚胎性腺的器官培养
1 Y; \% e3 p# u* K1 S- j, i三、软骨与骨的器官培养
) I: M3 a1 I5 B(一)软骨的器官培养; n. k: [' K7 j9 E# V' d
(二)骨的器官培养
5 @ P; W0 t3 |5 ^+ s. A, U1 q四、神经组织的器官培养& A2 M$ ^0 ^2 l4 ^1 \' E
五、牙胚的器官培养- d# h: B) F5 M9 \
(一)Trowell培养法培养牙胚器官
$ M) O/ s9 {0 l$ O1 @, w(二)悬浮培养法培养牙胚器官, `/ w# |2 N' w' d# |
六、腭板的器官培养2 s1 b, V( G2 i ]
(一)腭板器官的静式培养法
% W4 \* c" _% H. C, l6 r, e(二)腭板器官的转动培养法. M" o+ T' z6 Y( D# W
七、毛囊的器官培养
! v; ?1 C& z0 d5 ?: I& B八、血管的器官培养
" X8 t' U' |5 L0 } N2 @3 @(一)血管的悬浮孵育法器官培养% h1 j9 k1 }; p2 O8 K* o
(二)血管的琼脂孔器官培养法& e7 }0 z% E2 x8 p* O) u
九、肝脏的器官培养# I; s* g/ ], ~, g
十、小梁网的器官培养% h$ @% F6 R: o# W
十一、人胃肠黏膜的器官培养$ H' q( h% n) i0 w* k# {0 u1 q3 |5 ^5 w
十二、胚胎器官的上皮与间充质植块的联合培养$ p, o. X7 O9 i0 X' Y Q1 G
十三、肿瘤侵袭研究中的器官培养2 L8 ~* g3 H) c9 D
(一)肿瘤细胞与靶器官植块的制备9 j' @$ g) U6 _
(二)肿瘤细胞与器官植块几种联合培养模型0 s" I9 @. Y+ D2 T& J6 `
第四节全胚胎培养
$ S& z: V5 {+ A; \* h" _一、植入前胚胎培养 V4 n' I! g0 `" I6 I! A3 _ J
二、植入后胚胎培养
. S9 G" r: v0 S第五节器官培养的应用
- E- P6 `5 t+ R& w一、器官培养中的形态发生研究7 T- Z- w( I; t+ k$ X$ e! l
二、器官培养与发育分化研究/ ~/ |7 L( V0 x% ~& g
(一)外分泌腺的发育分化: [" u. ?* v) a8 t1 M
(二)内分泌腺的发育分化
0 o9 b$ @6 O2 F# D* E(三)性腺及前列腺的发育分化
, }% o0 M6 i0 C( }$ z(四)神经组织的发育分化
7 n8 y6 s; M! t! N4 i* a(五)各组织细胞间的相互作用对器官分化的影响) |8 g( p K6 u* q% }3 [2 r
三、体外培养整个胚胎的生长发育
+ O. u4 e/ C! Q8 |( T: n四、胚胎致畸作用研究& h: `! ~- I6 U0 r4 t' r
五、器官的功能及其代谢研究5 G/ e' D5 q3 Q: A
六、器官移植中的应用& u5 j1 H: _: D. L0 ~/ d/ c- C
(一)器官保存5 u: G4 ?. \, @+ M9 G
(二)降低免疫原性5 {9 c/ H3 J8 \5 P
七、器官培养与肿瘤侵袭研究& j6 J' ~: }, Q/ w* W" v
第七章培养物的观察检测方法: o% h# [1 \: Y4 Z9 t* r
第一节活细胞的观察检测方法2 f$ S# U5 O+ l/ d% Z
一、相差显微镜观察培养物的形态结构- W6 h5 k" X5 x. h3 n
(一)相差显微镜0 O) _) X5 f6 f6 C/ G5 b% G
(二)用相差显微镜观察活细胞的方法8 j u! R7 r. p$ ~
(三)活细胞的动态观察与缩时电影
2 ]" H! U4 h6 J$ `0 Y: @# x# Q二、细胞计数法
# r' {3 q, g- |三、细胞生长曲线0 `6 ^8 s' [+ l, k3 P
四、体外活体染色观察与活体染料
( n! C/ r5 v1 D3 i7 ^2 A/ ?# @- M五、活细胞的染料排除检测法' s0 @3 a5 }$ x8 Q$ [. M
六、细胞增殖活性测定的3HTdR掺入法
; t" A5 y6 i6 |4 a3 n# F七、细胞活力测定的MTT比色法
: X( I q( }+ m" D第二节普通染色观察
4 ^+ D! E# X' n; t! U9 |一、HE染色法
- h2 z. _9 l8 l% t% T二、吉姆萨染色法4 ]% H/ b" x9 @: k
三、载坡片处理方法1 E; B: t1 K7 d9 _
第三节细胞化学技术: R7 C$ l# @1 s" ~8 [4 F* ?
一、酸性磷酸酶
& }% u! V- a' i; W9 n' v( {5 k二、葡萄糖6磷酸酶
4 X5 N2 ]1 h+ @$ y三、琥珀酸脱氢酶
Q4 X9 c' A! S6 x; h( |四、DNA与RNA的吖啶橙荧光染色法
: V `" \( m$ J7 u$ [! ]+ T4 k五、DNA的富尔根(Feulgen)染色法5 W: X2 x8 w j( F% [3 d9 W
第四节免疫细胞化学技术/ K1 B4 t7 H5 M( i! M- L! c
一、常用免疫细胞化学技术原理
/ d. O! }3 P' `5 f( \二、常用的显色标记物
7 _# i1 [$ m) R, C(一)辣根过氧化物酶2 G& x. ?9 Y& E+ i! Z- h* V
(二)碱性磷酸酶0 e) m' H; b2 \: F7 O
(三)荧光素: q' e& z' v9 C+ y& G
(四)胶体金与免疫金银技术
; {( G( N/ g6 x. [三、免疫细胞化学方法及标记物的选择
* [' U2 z$ p" ]5 f5 y四、免疫细胞化学的一般问题
9 K6 u- _) {0 t: x- u$ G" ?# t2 q( v五、免疫细胞化学染色的典型程序
* L7 f ~. \2 u1 s, Z3 L1 y( W(一)免疫酶间接法
4 _9 j \; ~2 f2 A1 f& J% K(二)免疫荧光LSAB法; @$ a7 a9 M9 h( h
(三)PAP法
- y( d0 i( t h7 r8 Y0 R+ s, |8 p(四)SPA胶体金银法& P1 m. V0 A$ i1 D! u. [
第五节原位杂交技术0 a0 X3 `' m. K9 F
一、探针与标记物的选择
7 m9 D, Z' r1 p- K; M3 u二、原位杂交技术主要实验材料, _" c" T: c0 h, q8 a
三、杂交7 b# L6 |* z$ x6 L& e( P$ r
四、显示标记物- P9 @1 w7 J. l5 Z) l. ^1 {1 ^
五、设立对照
! a* j7 v$ S( B& i0 G第六节电子显微镜技术
% h& k- O5 P. K0 r一、超薄切片技术% h6 r$ j6 _) \" A, w& l% |6 x
(一)对培养物的预处理3 _5 X/ k6 C$ P+ K) |6 I: I+ _ \
(二)标本制备' I7 v8 p9 O9 V' e' c. G* }
二、电镜免疫细胞化学技术
. O1 c! }2 n, d, L(一)显示细胞表面抗原: g! A& f8 t. h7 I+ V
(二)显示细胞内抗原; P7 R( x9 A! o! I: j) S+ e+ Z
三、其它电镜技术简介3 x& Z- z; ^3 ?1 S# t3 \$ C
(一)扫描电镜技术
; m$ i% b+ P& K3 _' G, J* k3 F(二)冷冻蚀刻复型技术
# k! C) ]; t0 w- E" U/ m* b第二部分动物基本组织的体外培养8 M' u! A# C7 j. _
第八章上皮组织的体外培养; R5 _8 ?+ |" O
第一节上皮组织体外培养技术概论
6 T# d( M" E Z一、在体生长与体外培养的上皮组织的基本特点
) V F4 |9 u+ t6 V$ p! f(一)上皮组织的形态结构
/ [& r7 Z. i" |' X, k% l. q(二)上皮细胞的极性
- n6 n- }% R# e9 f! c1 G9 O8 \5 E(三)上皮细胞间的连接
L+ j" J, _' D; ]; O( Z i二、体外培养的上皮组织细胞的生长生物学
o/ w% m- W4 O1 t j(一)体外培养上皮细胞的形态结构1 N2 U7 J5 u0 |
(二)体外培养上皮组织的生长与增殖特征
4 F7 o3 Y3 R3 f* A( p三、体外培养上皮组织细胞的观察与检测5 y8 w A; ?; Z: l2 X+ h
(一)一般形态学观察
9 o" n1 t/ |2 \) O; r(二)组织化学与免疫组织化学观察与检测
7 s0 a* w3 L) R2 a: I7 ]第二节呼吸系统有关的上皮细胞培养
; X/ Z, f; T: p9 d一、呼吸道导气部上皮细胞的体外培养
+ \2 X8 Z8 S; w7 m二、呼吸道导气部上皮分泌细胞的悬浮培养- A, y$ y: a2 `. j$ N% @
三、Ⅱ型肺泡细胞的培养
( B5 t+ b# W/ F9 R1 ~3 ~四、鼻咽上皮细胞的体外培养
3 I) D2 y4 B0 u, Z1 v6 F% L& E第三节消化系统有关的上皮细胞培养$ [+ P. V# w5 i* b% {3 \5 C5 T
一、食管黏膜上皮细胞的培养+ z& J; @- `4 D% Y9 b
二、胃黏膜上皮细胞的培养
! N& P) O) E r9 q, z5 A' s三、肠黏膜上皮细胞的培养& W- E5 A& v0 h/ F
四、胆囊和肝外胆管上皮细胞的培养% Z0 o, R T$ {1 n
第四节腺上皮细胞的体外培养+ \; g2 Y3 U( H: W+ v: Z
一、唾液腺上皮细胞的培养' c2 L$ D, C b3 W- {/ U& {
二、乳腺上皮细胞的培养
3 `" p A8 b. j. [% H(一)乳腺上皮细胞原代培养的建立和维持) }: X* Z" x) n: I2 W
(二)乳腺上皮细胞的悬浮培养8 |4 i% [- J/ [
(三)乳腺上皮细胞在EHS基质上的培养3 u3 C% x$ ^' W2 I0 j8 m
(四)乳腺上皮细胞的其它培养方法
( t+ t! X4 V4 w8 Q& {( `) C5 S(五)乳腺上皮细胞培养中的有关问题
0 z0 q# o+ G4 K- P( s第五节表皮细胞的体外培养
F( f) n$ Q# e: a一、表皮角质形成细胞的饲养层细胞培养法
) a h0 s9 c& I0 i6 ^+ h( A二、角质形成细胞的复合培养法3 C% S- A# c9 }: g" B3 N! |, I
(一)在人去表皮真皮上培养角质形成细胞; P5 K) C# g* X$ _+ w
(二)在真皮替代物上培养角质形成细胞
8 D9 M6 i6 E! U三、表皮黑(色)素细胞的培养, F% l9 K' S, i6 m: M2 t0 }
四、表皮郎格汉斯细胞的培养
g4 V' T4 A( s- ]第六节血管内皮细胞的体外培养) ?& w, r1 X* h( f1 K% }7 T; E' A
一、猪主动脉内皮细胞的培养. h7 N! B" r0 A, b s2 J) F
二、免主动脉内皮细胞的体外培养, ~4 n8 H2 ^6 ]
三、人脐静脉内皮细胞的培养9 f, e- x9 q0 q" s( _3 j1 V
四、大鼠主动脉内皮细胞的培养1 X. H$ I' J# X( V/ y* m
五、滤膜培养法培养血管内皮细胞
9 ^/ c7 f4 F4 Q- s# a, Y六、免脑微血管内皮细胞培养: \7 W" |4 }8 X3 M+ l! M
七、大鼠肺微血管内皮细胞的培养
! N4 U1 D1 {( u) F" S: ~1 R第七节胸腺上皮细胞的体外培养
) _; q, e, ]5 Y& q) Q" H; _, \3 c4 E第九章结缔组织的体外培养
% j. y: O; Z3 h0 X& b% e! {* Z5 J第一节结缔组织细胞的生长生物学特点与基本分离技术
+ [- t) m5 ]& \* M; r一、结缔组织细胞的生长生物学特点
4 f& a) O* T2 j) ~5 Q/ j二、体外培养结缔组织细胞的基本分离技术
2 }! X" c" C$ ~6 W$ q2 }5 H第二节结缔组织细胞培养各论/ P9 Y0 k; G f/ @: {+ r
一、成纤维细胞的体外培养
: a7 V, |$ l6 L) a$ a4 O8 y) R(一)真皮成纤维细胞的体外培养
@4 z5 g; s) z' A, U+ |(二)人包皮成纤维细胞的无血清培养
5 [% ?' ~4 z" ~$ L8 n$ h$ v* Y(三)中国仓鼠胚胎成纤维细胞的体外培养
9 B6 R7 Z ^5 v9 z8 A5 J(四)鸡胚成纤维细胞的体外培养
: v1 L( ]' }' d* L% L(五)人胚肺成纤维细胞的体外培养% u# `1 c# Z" E5 x* U. ^. |
(六)小鼠肾间质成纤维细胞的体外培养. J* p* K3 H' d9 l0 |$ R! O3 T
(七)眼组织成纤维细胞的体外培养
/ _7 K& g7 b1 L6 R; ]二、巨噬细胞的体外培养
) N' E7 g. W9 w& q(一)获取肺泡巨噬细胞的方法
E! |$ u( [/ N. }4 X- y) S7 m/ P4 F(二)获取腹腔巨噬细胞的方法4 n. a% W0 J m
(三)巨噬细胞的纯化
% h: R7 ?- \ z$ ^, [(四)巨噬细胞的接种和培养
9 ~* I! I9 a) Q, C三、脂肪细胞的体外培养 |: u- i8 J; Q7 C: M9 t
(一)大鼠前脂肪细胞的原代培养
: D6 @' e& E+ o6 \# U3 a(二)小鼠前脂肪细胞的原代培养# J6 G7 P$ L6 E6 R7 c; _ m
四、肥大细胞的体外培养
, |0 @4 N# B3 c7 e(一)肺肥大细胞的体外培养- W& ]% i E, I& L1 q
(二)肠肥大细胞的体外培养
, H: d) c4 d* a, x7 }6 W(三)皮肤肥大细胞的分离和短期培养4 |3 x9 S% Y K+ _
五、间充质干细胞的体外培养 H. i7 I. Q: D5 N% [
(一)鸡胚肢芽间充质干细胞的体外培养
d) Z2 D r+ M9 o5 `(二)大鼠骨髓间充质干细胞的体外培养; `8 b5 @! B/ r
(三)人骨髓间充质干细胞的体外培养
: V: w; a1 u/ y7 |+ h(四)兔骨髓间充质前体细胞的体外成软骨培养# A9 W- B1 v8 a S0 d
第十章几种重要脏器细胞与特殊动物细胞的体外培养4 W% m0 s1 {9 g: z: ?3 X
第一节眼组织细胞的体外培养
7 f0 z( ^+ t3 u一、角膜上皮细胞和内皮细胞的体外培养0 e# T' K$ y6 l' M) ?# Z. |
(一)角膜上皮细胞的培养
" o# j5 T) R( L) h) X! B. l( s(二)角膜内皮细胞的培养
- p9 }6 A, `& E二、小梁细胞的体外培养
/ v# H7 r. Q- n, J$ l三、视网膜色素上皮细胞的体外培养 h" U# I( Z" X5 M, `8 ]# \
四、晶状体上皮细胞的体外培养! w9 g9 G2 j% _! X/ G
五、视网膜米勒细胞的体外培养0 j F h6 Z7 d
第二节骨与软骨组织的体外培养
' h- M- S# |. G' t7 l一、成骨细胞的培养
1 w# @$ D- `. w* R* W(一)骨内成骨细胞的培养4 X B" [' y& Z7 n2 D0 g) ~! w4 }& t# v) I
(二)骨膜内成骨细胞培养
9 Q6 n, K# @* `) a: E( U! T" P二、破骨细胞的培养# M! N, M A: ]# ?6 p
(一)成熟破骨细胞分离细胞培养法4 M6 M4 f3 r2 @; I' W, ^5 u
(二)骨髓长时间培养诱导分仑形成破骨细胞法/ N: q$ J& Z+ q/ \0 x
三、滑膜细胞的培养. U" R; f7 i" @- S3 m
(一)滑膜植块培养法9 S- X4 A9 E8 ^- ]% A2 f
(二)分离的滑膜细胞培养法
- u: L5 L9 F) l- e四、软骨细胞的培养
: n7 M, z! U5 a; [/ _9 G. @; ^7 f(一)关节软骨细胞的短期培养8 j& K- M8 d/ @" R" k% G; X s% |
(二)人关节软骨细胞的长期培养法" G1 ]0 U |* s) {+ d4 C3 K: {
第三节泌尿生殖系统有关的几种细胞培养
( @2 J( {! g2 L) b9 W ]9 b3 h一、生精细胞的体外培养
$ _7 a% Z' g4 V! V' i; ?二、睾丸支持细胞的培养
2 H# b% i2 t, ^+ q$ p三、睾丸间质细胞的培养. W* ]9 o- o( @$ Q1 D8 i, H. L
四、肾小管上皮细胞的培养9 ^* L+ T W$ L; d
五、肾小球系膜细胞的培养6 l' k: |2 Y$ i3 W7 y M) C
第四节几种内分泌细胞的体外培养) c9 A' b' `! g1 J% w
一、胰岛细胞的体外培养, I: n0 I; F8 E* W$ m0 S
二、人垂体腺瘤细胞培养( }" n2 G1 p4 V* l' [$ T: {4 O
三、甲状腺细胞的体外培养
; B+ @/ S' ]7 ?第五节羊水细胞的体外培养9 s! N, c7 h5 N8 ?8 A3 N* p
一、羊水细胞的体外培养基本方法
4 U6 w5 x- b) M" o% f二、羊水细胞的富集培养法
, h+ K! o% N; `. U. y1 S7 X第六节胚胎干细胞的体外培养; ?% D! q" y( Q4 m. e! U
一、体外培养胚胎干细胞的技术原理/ [7 D! b6 e8 J; K" P' \3 X
二、体外培养胚胎干细胞的基本过程! Y% o2 Q- T! E' s1 {
(一)饲养层细胞的培养" q5 x" I6 q/ t! q t
(二)饲养单层的制备2 E* m* d/ J+ P' @ y
(三)用于培养胚胎干细胞的条件培养基的制备
* }* v% F2 N- l# ]8 R$ A(四)胚胎干细胞的分离与培养* b& K. Z; I' E) L+ Z( N/ q5 J
(五)胚胎干细胞的冻存与复苏: Q0 n8 h# X+ n
三、胚胎干细胞的鉴定0 z! L9 m1 X. }" ^- R8 k7 J
(一)碱性磷酸酶检测
% o. t% n# O# x(二)核型的鉴定
, k; @ Z. ^5 R(三)体外分化能力观察
* U# s# s; h5 W& M(四)体内分化能力的观察: l: ~$ |: [7 X" R: c" {
(五)嵌合能力的测定* O3 l" d7 ^6 t- x3 c& i
第十一章造血干细胞的检测与造血祖细胞的体外培养% A/ X5 ]4 Z+ d4 G. v
第一节概论
3 S8 o, s4 O3 S( N' u5 Z一、造血干细胞的生物学特征
; X9 h4 O* q6 @5 Q( _3 R8 P(一)造血干细胞的基本特性
2 Z3 U7 w$ ^; s; S5 ^1 E$ T(二)对造血干细胞的识别
& j( U0 z* H0 |& {(三)造血干细胞的胞龄结构
/ h6 K4 u) O" q0 g/ [( D* K(四)造血干细胞的动力学
5 y; q" W& i6 ]( u; g5 U4 X+ V二、造血祖细胞; J m! C2 ~/ v" l6 ~
第二节造血干细胞的测定技术
" |2 q7 |( E+ N8 B. d一、CFUS的检测技术8 C+ _: V# X* m/ A/ {
二、以标记染色体测定脾结节的形成, [; A9 R) B, y0 P: k8 A
三、脾结节移植法测定脾结节CFUS6 U. M% @2 E9 a
第三节体外培养造血祖细胞的特殊实验材料5 z6 N0 i) y) o# B8 _- C. X1 d
一、培养用液3 ^2 m6 Y1 @( _7 _
二、特异性刺激因子的制备' z% @: F+ g9 S
(一)横纹肌条件培养液的制备8 ^3 |8 x4 `/ R
(二)白细胞条件培养液
* g/ ~; ]& J$ z' b1 V$ M(三)脾细胞条件培养液/ @+ b1 j( k7 e5 M* Z1 s1 f
(四)再障病人血清的制备
& J8 Z# v4 I9 N) R2 {4 D" `(五)胎肝细胞裂解液的制备5 j1 _: w2 Q& A. t* t% @6 j
第四节造血祖细胞的体外富集与培养
- C& S. L# O% X一、造血祖细胞的富集
) s: Y6 V. r$ _(一)单个核细胞的分离
2 | \2 z: q& Q1 \2 ^6 ^* A7 F a8 `(二)CD34+细胞及其分离方法- l$ @0 k' X6 b
(三)CD34+细胞的MACS免疫磁性分离方法
+ {4 ?- a# x% {6 c二、造血祖细胞的体外培养+ h( e: M# I" T" ~
三、各类造血祖细胞的培养技术
5 F& C4 R; `& f& d( C(一)CFUGM的培养6 p1 N9 _. ?: S( [
(二)红系造血祖细胞的培养4 A4 w3 s1 u8 h" A. @# Q, a
(三)巨核造血祖细胞的培养4 q8 n7 V- u; J
(四)混合细胞集落的培养
' v. X0 W2 C. C# N(五)白血病细胞的培养
# q/ i; c, D$ G0 T& n(六)无血细胞体内扩散匣培养技术% k9 @( z/ i$ J* q b
第五节造血祖细胞培养技术的实际应用3 K' x- s9 k7 u, n; V! e" E
一、正常人骨髓内各种造血祖细胞的含量测定
. _* _- ]- H0 a4 o二、某些血液疾病的细胞病理学, m7 V! I s M# H( S
三、药物对造血细胞的作用研究
8 ^( O0 A2 W/ u四、再生障碍性贫血的发病机制和预后以及造血干细胞移植治疗4 h' s+ U$ x+ M7 ]$ m% w& Q
五、体外测定造血祖细胞辐射敏感性与全身放射敏感性反应的关系
3 E+ x, N8 ^- Y- V) W第十二章血淋巴细胞的体外培养
3 `1 H# C! L' e6 p y第一节各类淋巴细胞的主要特征
# }1 S7 | S4 j一、T淋巴细胞* U ]& n8 E0 K' F
(一)T细胞的表面标志
0 ^" c ]; X4 _9 S# A2 c. }(二)T细胞亚群及其功能' |) H) R9 D( g, }2 n
二、B淋巴细胞
: { O/ |9 B5 ]$ a(一)B细胞的表面标志* G8 B6 F j) i; e+ G! f
(二)B细胞的亚群0 R: l8 i8 w x' e# ~
三、大颗粒淋巴细胞
! J2 ^2 {# M; q6 q+ a7 F(一)NK细胞5 | Y+ x0 r% Y. s# f E) H7 q1 K
(二)K细胞
& j2 l: Q. B8 F* C+ F2 B! r, L' C第二节血淋巴细胞的分离) i4 K+ K S5 F
一、单个核细胞的分离2 U. E) G% f4 p7 ]9 Y* q, N
二、纯淋巴细胞的制备" T4 \8 Y, R3 D* j% k5 A0 F
(一)玻璃黏附法
0 z6 b# E, Q: i C% D2 V2 I1 X(二)羰基铁粉法! Q7 \/ J3 H8 e% k8 d* L; Q0 Y
三、T细胞和B细胞的分离: b5 ?! q4 U; T# ^& Z* m y
(一)T细胞花环沉降法7 o g# Z# x$ A" p$ J1 A
(二)尼龙毛柱分离法 Y$ K7 t7 v+ N! Q7 a$ H
四、大颗粒淋巴细胞的分离- ]0 N# z! S2 A0 j6 g
五、荧光激活细胞分离仪分离淋巴细胞及其亚群
' l0 y/ O; U( v* y% D六、免疫磁珠法分离各种淋巴细胞及其亚群
5 H0 d, P0 z* O第三节血淋巴细胞的体外培养方法和应用
$ x, m, q4 R. D一、淋巴细胞转化试验
+ i. |0 Z) }* Z' m) o二、B细胞产生免疫球蛋白的检查; x: C- V: q- D4 }0 p( c! o& ], I
三、T细胞介导的细胞毒试验
" x; l E8 T9 n& M! O* a( @4 W四、NK细胞毒性试验! I# L8 Q) G8 O5 @8 u' G; {8 d6 @: {
五、K细胞毒性试验- K1 W" L) g' \1 E
六、LAK细胞的制备. ~, v' D1 |% [. H% o5 w. L
七、淋巴细胞的体外长期培养% J; e& W3 t8 l% C
(一)用IL2建立T淋巴细胞克隆
* e7 |0 ]) Q3 E0 i) L$ j(二)用EB病毒转化B淋巴细胞
. v0 m% @$ `5 D }) j. ~(三)用B细胞生长因子建立B淋巴细胞株" ^7 {6 I/ d/ f- z& i
第十三章肌肉组织的体外培养9 y) k1 }2 e0 @6 A2 E% ~
第一节肌肉组织体外培养技术概论
- c2 W2 T% K; b5 q1 r! C6 [( q一、肌肉组织体外培养技术的发展简史0 y1 J! b- U Q9 B" _
二、肌肉组织细胞培养的意义与评价
, f6 h/ I5 Y7 v+ s6 O5 u3 c" a第二节心肌细胞的体外培养# t1 e$ R- Y. w3 J/ k5 z0 ^0 Q
一、心肌细胞培养的基本原理
( K$ r) z2 K$ x5 T! A& U+ e二、心肌细胞培养用液) Q3 n1 N/ x5 e" H( w* N+ P
(一)常用平衡盐溶液
9 N, u2 f! h7 W: `. _- ]5 k7 \( q(二)心肌细胞培养液3 _5 N) T7 U5 u' L7 u3 C
(三)其它培养用液
S- V7 M" v( v x; U7 W; f8 q三、心肌细胞的培养方法6 t0 x- i6 J) C- Q2 ~3 K
(一)心肌细胞的原代培养
9 e& Z4 v+ m) W6 |9 q(二)成年动物的搏动心肌细胞的制备
' R. U- H. Z- z8 g! s(三)心肌细胞培养方法的某些发展
- D7 L$ m( F6 k' T- F四、心肌细胞培养的基本结果与观测方法
! ^2 D" B3 [0 {+ b3 K8 E. n& i(一)一般观察
# u; c; z: _% ?7 t(二)培养心肌细胞的形态学观察
9 q5 d7 J; y( ^8 s* i4 C6 G0 v8 N0 g(三)心肌细胞搏动的观察- r0 t$ u, D) I4 ]+ \/ e
五、培养心肌细胞的某些电生理特性0 V5 l3 S( ]5 v8 _* |' D# J* _
六、培养心肌细胞代谢的某些特点
7 S; f5 d# `7 q: ^第三节平滑肌细胞的体外培养
, |5 E' e9 W9 ^8 w0 n一、平滑肌细胞体外培养方法4 C5 e& I8 V9 A# Q6 g6 r, X* X! d
二、培养平滑肌细胞的结果与鉴定
! @1 D# V; W3 [$ _三、影响血管平滑肌细胞增殖的因素
4 _- F* T! w' V2 I第四节骨骼肌细胞的体外培养
0 Y( h$ d P1 m K6 W+ `一、骨骼肌细胞培养所需主要材料9 L2 `# }# z+ V$ H6 l
二、骨骼肌细胞培养方法
; \7 N4 x' H* f: v' b( u( H1 M(一)乌类骨骼肌细胞的培养4 V6 ~. k' Z0 M, a! e
(二)啮齿类动物骨骼肌细胞原代培养方法6 L$ y1 C2 ]3 H0 o* Q3 c+ r
(三)从啮齿类动物肌肉中获取高纯度肌源性细胞的新方法+ {# n" G9 l0 m" I! y$ P: v
三、肌源性细胞系的建立
$ Q, V F2 u0 f, a6 _& W3 O第十四章神经组织的体外培养% z; h( _0 {; X$ v) s# O
第一节神经元的体外培养
% ~2 |1 `" |& w1 M! `7 W0 m一、神经组织的植块培养法; B' `: M3 U+ j0 E; S. D) w, ^
(一)概述
8 S2 }! K# L/ Y/ J; o(二)灰质组织或神经节的体外培养
9 p; V4 M) E* F) t, E- x+ A(三)白质植块的培养. S5 ^+ e, ^4 m
二、神经元的分离细胞培养方法5 R2 S4 b" G7 ~9 }/ G5 [9 T' j1 q
(一)材料的来源
# P- K% M _* b7 }6 r% D(二)神经元体外培养液
& i0 f5 B( V* j& S ^0 \(三)神经元体外培养的生长基质/ R' c; i! _/ L2 J8 G
(四)神经元的分离细胞培养过程
6 W# M8 \6 x6 O(五)神经元细胞的体外培养: @4 A4 H# D Q* [
第二节神经胶质细胞的体外培养5 Z3 Z2 X( c+ }/ N; w/ x
一、星形胶质细胞的体外培养' R7 q$ z$ Z$ n, R$ X# z% i$ z( W
(一)取材的动物年龄与部位) C" J! h! m1 i* @$ S( Y5 t4 n# b1 Q7 \
(二)星形胶质细胞的体外培养方法: z8 h1 w \7 {( ~! S7 Z3 u% \
(三)星形胶质细胞的无血清限定性培养液
( R+ T: w' c4 m5 a& ?7 V: N(四)星形胶质细胞的形态学特征与化学标志物! \: Y4 M) B" o- }( U
二、少突胶质细胞的体外培养; u$ ^. R8 ?9 d. [2 P
(一)体外纯化过程/ ]( r. X; s) [0 M+ U$ l
(二)体外培养少突胶质细胞的化学限定性培养基) @5 y I' ~1 t' I
(三)少突胶质细胞的化学标志物" O$ K7 ~) `* }2 N7 t! a7 m
(四)少突胶质细胞的形态学特征
' ]; J9 w `# d2 G三、施旺细胞的体外培养
$ x. z7 o5 L# @( V; g5 k2 V+ {(一)施旺细胞的体外培养方法
8 X6 ]6 e, Z% F9 Q Q(二)施旺细胞的无血清限定性培养基) P7 t) A B+ X5 h( E$ h `
(三)施旺细胞体外生长的形态学特征与化学标志物 @0 ^( _# h) z" O. y6 g2 D( k# R9 A
四、小胶质细胞的体外培养2 Q. r; K; D# X# K9 J4 B, [$ O
(一)小胶质细胞的体外培养方法
' r( M% r# [8 J' |" p8 r(二)小胶质细胞的形态学特征与鉴定
. l2 B( m, P* D0 t0 O( Z五、其它神经胶质细胞的体外培养2 |. z. F* O% }: ?' a
六、体外培养神经组织分离细胞的形态学特征比较2 V/ J& G4 ^9 P+ U
第三节各类神经组织细胞的培养方法( q. e9 J1 L9 q' I+ R0 {
一、鸡胚背根节的体外培养6 r0 d% ] c1 J6 ]- n
二、大鼠颈上神经节的体外培养
# P p! ]1 | e* a+ k三、大鼠小脑皮质神经元的体外培养; M% I+ w1 w/ {" l
四、大鼠星形胶质细胞的体外培养
: ?! D% ?& x" @" v(一)方法一：植块培养法
/ r% s8 D' m0 E(二)方法一：分离细胞培养法" c1 m% t3 x$ h
五、大鼠少突胶质细胞的体外培养
x, }( X# ^: [3 ^& q(一)方法一：植块培养法
, b- R4 f& r. Q' ~(二)方法二：密度梯度离心法5 R% Y* h6 w! K* @8 R) O
(三)方法三：恒温摇床处理法) k5 z0 h/ S ~
六、大鼠施旺细胞的体外培养
+ {, h" H" U1 O(一)方法一：常规分离细胞培养法) ?: H0 d6 \$ v0 f: _
(二)方法二：免疫选择法
$ j$ n2 I1 D1 a' j# r3 L(三)方法三：反复植块法- U7 { p* Y5 E. |
七、鼠脑小胶质细胞的体外培养2 E" K/ s& L8 ~8 V
八、脊髓神经元的体外培养) l' p1 H, q) C2 @
(一)方法一：差速黏附处理富集脊髓神经元培养法
6 n d6 s0 _3 k! Z5 Z* @(二)方法二：台面选淘富集脊髓前角运动神经元培养法
9 H1 d5 s) w$ a# U; J九、鼠脑神经干细胞的体外培养/ T$ C( l4 N+ K4 w% c
(一)胚胎神经干细胞的体外培养
0 Q. w* V7 A# R/ G3 N7 {$ ~(二)成年脑组织内神经干细胞的体外培养8 P& y3 _( y1 e6 S: o) B
十、大鼠胚胎几种常用脑区组织体外培养的取材
5 E. w8 n/ |' g第三部分特殊类动物细胞的体外培养
. X: ~) ^- X4 k) z7 d5 W第十五章肿瘤细胞的体外培养( \3 ~/ |8 X) I0 \
第一节肿瘤细胞在体内和体外的生长特性概论! r$ ~8 v! H% l( h& M
一、肿瘤细胞在体内生长的特征
. O/ ]2 {2 ^, ?% q' Q二、肿瘤细胞在体外的生长生物学特性* R+ n. R* L1 n* O5 V6 m
三、肿瘤细胞在体内和体外的生长特征差别( C3 U. _ y4 y) n% l6 u( F
四、体外培养肿瘤细胞常用的培养基
& M2 e6 h7 t( g' R0 i1 Y第二节体外培养肿瘤组织细胞的方法和技术5 j4 X+ g0 Z0 C! Y
一、肿瘤组织细胞的原代培养
6 P; \! C- R" e8 a* |* M7 V二、肿瘤细胞的传代2 M ^' O3 i( `1 c \: R
三、肿瘤细胞的克隆培养法
/ N9 d" E- I& \! X5 h第三节肿瘤细胞体外生长的细胞生物学特征
: {, D' T7 q# f {2 Z一、肿瘤细胞体外生长的形态学与细胞学特征+ e: i, g# c+ B
二、肿瘤细胞的核型和异常生长特性4 z- C5 z* i! x7 R: I
(一)染色体数目及核型
B; }: N+ F& Z(二)永生性
8 }( Y* J3 T" o6 x. g3 K(三)异质性& a$ U" b& O: D* T
(四)动物接种成瘤性
4 O/ B2 y7 O# }(五)非锚着生长依赖性5 N6 ?; p# H& b: Q) T
第四节已建立的肿瘤细胞系介绍- y9 v4 D6 R- }3 [
一、国内已建立的人类肿瘤细胞系介绍
. z) u+ A K4 O/ ^7 F二、国际上已建立的人类肿瘤细胞系6 m3 M0 Y1 Z& l' z
第五节部分肿瘤细胞的体外培养与建系过程
' K. Q2 j5 v9 K3 q) D* P7 F一、人鼻咽癌细胞系(CNE2)的建立
/ Z E( d5 e+ x/ [5 i* g/ f6 N二、人骨肉瘤细胞系(HOS8603)的建立
; Y6 D( W/ j+ ]9 F( `三、大鼠肝卵圆细胞的本外培养
% o' k( p# R. p" w Q. W0 V四、人神经母细胞瘤细胞系的建立
, j& [$ ^6 \% Y! x! l五、人肺腺癌细胞系的建立$ }; _; T+ u- V3 A, F
六、有肺巨细胞癌细胞系的建立* e: T' }5 e+ A6 O2 N' J9 R
七、人肾颗粒细胞癌细胞系的建立
/ s5 u# U3 Q5 L+ v" m0 }; D9 Z, d八、人卵巢癌细胞系的建立
6 S: P/ H) @0 b6 n* ^+ T- A% W3 F九、人肝癌细胞系的建立
4 q1 _9 S f. `, L! w3 H& [ [十、人喉腺泡型横纹肌肉瘤细胞系的建立
3 m0 S4 @! M& }4 P$ B十一、人恶性胸膜间皮瘤细胞系的建立
3 k6 D& Z# D4 h5 s6 o' Y6 S十二、人乳腺癌细胞系(HATTORI)的建立
' \6 ?) ~ G$ ?6 w, f1 {9 d+ R第六节肿瘤细胞培养的应用
4 D$ @" D! W$ v- E7 a一、肿瘤细胞对组织浸润的体外研究3 c! P+ E; p/ v$ M" C
二、人恶性肿瘤细胞的动物移植瘤研究
. w! O" G6 }: d0 ~! O, W- ]. x三、培养肿瘤细胞的体外分化实验
( K3 @. Q8 T. y# H# i四、培养肿瘤细胞的凋亡诱导研究
) k, T r! v/ i第十六章病原微生物的培养
0 l& I- L% r& F4 B第一节病原微生物培养技术概论1 a' _) b* E. D* t+ s$ }% t# e1 A
一、病原微生物培养的基本原理
; C' J- j2 |! _8 @, A8 x二、病原微生物培养的基本方法和技术+ \: B6 v7 h- P: M3 b4 k
三、病原微生物培养的应用' }, q% K' `4 @7 c
第二节细菌的培养* j- N h; A3 t$ u% I- _) I
一、细菌培养的基本条件9 X/ e$ u$ `5 H/ n1 ^3 Z* x# S
(一)细菌培养基7 I! v) ?% {6 j8 d" A' c
(二)细菌生长的其它条件) @3 {5 ?) _( ]0 H4 |
二、细菌生长繁殖的特点# Y5 T0 e4 [- h6 P4 X& N
三、细菌培养的基本技术
: ?( q7 h" u4 y/ C/ e(一)无菌操作技术9 S& Q6 e6 K0 N& U: c3 s& d
(二)细菌接种技术
- @+ I" ]/ X; ^3 F% V$ x四、细菌培养的方法
1 |) J# a$ Q( r, f) ]5 O! f(一)一般培养法" a- V4 P( O/ m) V/ z- d) ]3 q# k6 f
(二)二氧化碳培养法
# y: b: V" e" h6 q( @: q(三)厌氧培养法: o, e/ Z/ v7 x
五、各别类细菌的培养
& w" J. s% E% r* E+ h: B(一)致病性葡萄球菌的培养
) a: H) Y4 t2 Q3 v2 y/ N(二)幽门螺旋杆菌的培养8 X# t8 A# I0 P" e5 F8 a4 A
(三)结核杆菌的培养
- X/ k9 T; \! C5 a$ F+ A$ k; W5 @# S(四)淋球菌(淋病奈瑟氏菌)的培养
5 O4 R( d3 ] i8 [第三节其它类菌的培养6 O% n' h" {7 j6 R v7 O
一、放线菌的培养) k6 X8 j, `# c/ J# U2 T! Y
(一)放线菌培养的一般条件
~& a1 W8 ^5 |5 F1 N8 O0 q(二)放线菌培养基
( ~7 U; _$ T4 J1 s z2 D二、真菌的培养
0 a P- y* O1 A3 T/ U; A% t(一)真菌培养的一般条件
% J/ i$ z# \: \) J' {' v( l/ @(二)常见致病真菌的培养基: J/ Q7 c# ~, p
三、支原体培养
2 m3 f7 X3 }4 |7 I" f(一)支原体培养的一般条件6 A# O/ i2 _5 X! c1 x! \
(二)常见病原支原体的培养基
) r* e0 o4 ~5 d2 @1 \9 j四、立克次体的培养
2 q' x" y% A1 c% a. B( a9 f(一)立克次体培养的一般条件: q6 N! I+ Z4 j# D0 R
(二)常见病原立克次体的培养
# j- N; I) S+ N# r y+ t8 O五、衣原体培养
7 O/ Q9 ~( P* p(一)衣原体培养的一般条件# z( V' j. i$ b7 }9 }6 H: t
(二)常见的病原性衣原体的培养, X$ @: Y3 j6 w2 J
六、螺旋体的培养; b, I! u$ L4 p& i+ ` D5 z
(一)螺旋体培养的一般条件
. e6 Z6 x- f8 Y& u9 U(二)钩端螺旋体培养基
( J* `; y4 N* Q D* u: W9 p(三)常见病原螺旋体的培养, c; P7 j4 E( p2 X3 r) ?& o. p( O
第四节病毒的培养
: ^. X- t* u* T! G/ j2 D \, o一、宿主细胞培养法6 k5 ?0 G9 g" k3 z) b6 L. a7 h
二、鸡胚培养法
$ J) p4 z7 O, r# L6 u1 Y, K三、各别类宿主细胞培养法
: v# Q$ t% { o5 p2 \(一)EB病毒的培养
# E( R7 \- c9 C. X( p" p(二)脊髓灰质炎病毒的培养
6 y, t8 @( I) r. W(三)乙型肝炎病毒DNA转染细胞系的建立和应用
2 Q: L T- _# i. H5 Y1 i4 o( O( B+ E第十七章医学寄生虫的体外培养
+ _4 h2 ?9 n q! ?2 j+ u第一节寄生虫的体外培养技术概论0 _" L- |6 q7 O, p
一、寄生虫的营养与代谢特点
7 }0 [( s k2 v" ] w2 b二、寄生虫的体外培养技术类别
# S8 T! L: s$ d4 m5 H; k(一)寄生虫虫体培养
" d9 i$ |% A t(二)寄生虫细胞培养
1 T; J' L( C% f- R- `: M4 F. |) A- }(三)寄生虫的体外培养常用培养基
& Y" |: S7 s! `9 m三、寄生虫体外培养技术的应用
' ^* N9 n+ V% w4 w(一)在生物学研究中的应用' [2 t% _6 Q |. w- k5 T) ~
(二)在病理与免疫学研究中的应用0 K& [8 J0 r. C& {) f& H
(三)在药物学研究中的应用
# B0 q* y9 ` R( {4 t5 W) D: ` r第二节疟原虫体外培养
: D- ]8 R* r# _6 g8 V一、疟原虫红外期体外培养% H! I9 z7 ~1 v2 ^/ i
(一)约氏疟原虫红外期的体外培养
* z( s A' t) v _7 a, I& B(二)人疟原虫红细胞外期体外培养' y9 J3 d, m( n5 O' Z+ g& B! h
二、疟原虫红内期体外培养
) e5 |, p @ m& g$ J9 j/ c' Q: ^(一)体外长期连续培养
, ]4 k/ x- K+ u$ K(二)同步培养法
$ z( J4 x) q) `; O(三)疟原虫冷冻保存技术: w* u2 w. a( G& \8 h3 o
三、恶性疟原虫配子体的体外培养
. K1 L/ p; T* C/ t e+ E第三节机会性致病原虫的体外培养' V& U) m0 S8 d
一、弓形虫的体外培养& I# j* u1 G' w4 i. B. {) q: g2 a8 [
(一)速殖子的培养方法之一：单层贴壁细胞接种培养法: @0 j9 r& S/ }- Y
(二)速殖子的培养方法之二：悬浮细胞的接种培养法% @+ h! \2 k8 G& h
(三)速殖子的培养方法之三：在鸡胚中种植的培养法
% s8 _* G$ ~" \% e' |' d8 f(四)包囊的培养0 Y. t8 ], B3 @+ v
(五)弓形虫的冷冻保存技术6 A( }4 V+ ]! @ p! L2 N
二、卡氏肺孢子虫体外培养
' m) }# [) z/ J2 r! ^# _" o(一)用非洲绿猴肾细胞系培养卡氏肺孢子虫- `( X. E* x4 e _
(二)用胎儿肺成纤维细胞系培养卡氏肺孢子虫1 K. x5 O7 Q) ]/ G$ P) L
三、隐孢子虫体外培养; l4 j/ D/ r' h" Z
(一)在组织细胞内培养# k7 B9 g2 H) `0 Z
(二)在鸡胚中培养
( M- Q y9 w u! W1 U, t, G第四节日本血吸虫体外培养
4 w/ Z |: R3 c. j6 s6 b0 Q( \, }/ a一、培养基及培养条件% d" |% ^) J2 G) X
(一)培养基的种类
) I9 F2 m/ }& \( n6 P! C5 j9 s# x(二)培养条件- n; D( J4 u! r: w
二、各期培养方法
; h6 r7 K% Y6 u. K(一)尾蚴人工转变童虫体外培养" I7 {6 p' g. X" q0 d+ P. u+ D( C
(二)肺期童虫体外培养4 Q* x3 Y- ~; B- [
(三)成虫体外培养! B1 h/ G+ V: ^; }
(四)虫卵的体外培养. ?7 a. k0 u, \8 K6 E
(五)毛蚴至母胞蚴的体外培养
( j& m: ~3 q. W4 P0 L( O* {(六)子胞蚴和尾蚴的体外培养
& _, C2 f% Y9 J$ ] B(七)血吸虫成虫和童虫细胞的培养
6 H% f3 `5 K l5 X第五节棘球绦虫体外培养) ^$ I8 A! r A
一、细粒棘球绦虫的体外培养+ j S( |4 K, F4 f
(一)囊型发育
1 b1 x3 m( a: ?9 ~. c(二)链体发育
& N2 g1 R9 @" g% H" l g7 L8 ^; N(三)成虫体外培养
* W @8 `8 G6 O/ }8 o9 S; v(四)细胞培养
3 U& V& D" j) m4 g* T6 a" b二、多房棘球绦虫体外培养: z* i% s) d4 f& b& T2 w% R
(一)多房棘球绦虫虫体培养% P3 { k3 m R' J; S
(二)多房棘球绦虫细胞培养$ \4 ^7 C9 w3 V
第十八章无脊椎动物组织的体外培养
9 Y9 S% C1 u9 j, ~" k第一节无脊椎动物细胞培养的基本方法和技术
4 E( B: I! Q) \! k0 d) r一、体外培养无脊椎动物细胞的基本条件$ R% U+ B* k: T
(一)无脊椎动物细胞培养基
$ ?3 q" M1 _8 H8 t- S, \(二)无脊椎动物细胞常用培养基的配方3 X' x1 v. d# C ]9 ~9 [6 V J0 ^4 `9 K
(三)昆虫组织培养基的配制
; m5 Y* P" A, h4 S(四)体外培养无脊椎动物细胞的其它条件6 ^/ l# _' B9 H0 u! I
二、无脊椎动物细胞的原代培养$ E% o7 x# t1 {1 Z8 ]8 B
三、无脊椎动物细胞的传代培养
) Q( O: |! Z- k" R6 K* N四、无脊椎动物细胞的悬浮培养5 j/ ]# e+ c( W0 @1 y
五、培养细胞的低温保存和冷冻保存
, P* {% Q' d. Z5 I. u( i第二节无脊椎动物的器官培养
& G t! n6 g5 ?" ?一、软体动物器官的体外培养
( _1 q; e3 C# m$ {9 S二、蠊翅目昆虫的体外器官培养! f, m( ^$ U W+ _
第三节无脊椎动物细胞系(株)的建立
% R1 H8 p( \7 v% f j# F P一、昆虫细胞系的建立
7 K6 r4 [$ _$ `2 _$ y! g(一)鳞翅目
) P; \4 x) j; w, u' _4 L8 F(二)双翅目
0 E2 G7 T7 E; c9 |; ~(三)蠊翅目$ A+ I/ A7 a6 N- d2 K& }
二、昆虫缺陷型细胞株的建立
# M* O" s i. Q" }* c三、软体动物细胞系的建立. C, i2 F( W% t
(一)蜗牛细胞系的建立) {& m: G! Z6 k( z
(二)牡蛎细胞的离体培养
5 P+ G+ Z- J A) }8 g: M四、蜱螨(扁虱)细胞系的建立2 s0 I8 G- z4 S8 p( V) R- Z
五、建立细胞系的注意事项
3 m7 ]" G1 d# f+ ^第四节无脊椎动物细胞的大规模培养
" k: g( X+ Z0 W) J1 w' U4 Z, n- Z一、大规模悬浮细胞培养的添加剂
3 U. g# z- Y" ^) Z二、低剪切力连续生物反应器0 Q& K; i# U: N2 z
三、有血清培养基扩大规模培养昆虫细胞技术! s5 L/ A$ Q. o9 p x1 r
(一)扩大规模培养的主要材料4 O: w' Y* { l- H( j$ s& Z, q
(二)扩大规模培养方法4 L5 y& [& Z2 z/ S5 V
四、无血清培养基扩大规模培养昆虫细胞技术
; |' I# b0 s( r& B9 D+ B" ^2 ]第四部分体外培养技术的应用
3 _4 E' _' m, R: }1 S+ ~5 L第十九章体外培养的应用技术/ n& s7 X( B2 ]8 L
第一节细胞分化与体外诱导分化
5 o0 o* e8 `% N' c% V& \一、正常细胞分化
7 O( V/ F! R) N/ E- O; D, y+ R0 i二、EC、ES和EG细胞系9 l, A( f q8 X$ @
三、ES和EG细胞培养和建系的基本技术3 {7 D$ c" T( t* r
(一)饲养层细胞7 z9 O& h, j4 T* W
(二)胚胎细胞来源4 r B1 A$ j: B6 \: |$ L
(三)ES和EG细胞的培养过程
6 N T) Y# W# S* q(四)ES和EG细胞系特性和鉴定
# h8 k+ s ? T2 G8 j四、ES细胞体外诱导分化; u7 }. X0 U, T9 @& | I
(一)ES细胞体外诱导分化的意义) B1 P3 y8 u3 ` O" r
(二)ES细胞体外诱导分化的基本原理3 T6 z$ i8 h8 o0 Y
(三)ES细胞体外诱导分化的基本方法7 i8 O' J5 B; M& Z# l# y% H4 H
(四)ES细胞体外分化的细胞类型; F8 I8 c; Z V+ @: d3 M
五、诱导分化细胞的永生化; R- M8 Q* k3 F/ b0 J
第二节细胞融合技术
* z% T: U1 W0 I一、病毒融合法
$ e2 I6 L3 U6 A" l2 }$ c; c二、聚乙二醇诱导细胞融合法: ^1 o, R i1 _) A3 k" t( D
三、电诱导细胞融合法
0 D1 M& W& G/ n% t第三节体外受精技术
. z& {2 j7 {2 `6 m一、体外受精的基本实验条件& d* M7 D' k j0 Q0 _
(一)体外受精所需的主要仪器设备和消耗用品
$ h4 K" ~1 B9 Z" v! q. V" Z/ V" ^(二)体外受精与胚胎培养环境的设备和管理2 W/ r" ^/ s3 e; Q+ D
(三)胚胎培养液
4 p0 M. {3 S+ T& Q8 T二、胚胎的体外培养& L/ C6 o/ A5 k1 {# q
(一)卵母细胞的收集: l4 u# r' N: r! W; i* E; C( h& `
(二)精子的体外获能
, P% r% ^: M& h5 h( J) J D(三)体外受精
: ^% f% i- `3 N# E" X4 m0 p(四)卵裂观察及胚胎评分
7 ^3 y" [ r, a" g: y7 t三、胚胎移植
/ b, ~: _, I( C1 s- h第四节基因转染技术与体外细胞转化
+ N h+ F- q* o; W/ y一、基因转染技术% X+ B9 F" S( J3 x* G
(一)待转染细胞的准备7 q; U( S( i/ K' D1 y( j+ \* |9 e0 L7 ^
(二)质粒DNA的纯化
7 W- @; ~. }& d9 D/ ]$ d5 d% [5 h(三)基因转染的方法
7 I8 |0 b7 D* [" a! n(四)转染细胞的筛选
9 M3 G1 f2 H% R7 Y6 M& F二、体外细胞转化
; S4 Q9 |. o u& } [9 ~' i- j( G(一)细胞转化的概念与细胞转化的过程
# v* X L* e2 X" q(三)诱变因素诱发培养细胞转化的程序
: X4 c0 j, u2 s# B三、转基因动物: p" U# J2 ?6 B& a; w, ~) l2 e$ M! n
第五节杂交瘤技术与单克隆抗体制备技术$ ]; V9 k9 w/ Z2 \
一、杂交瘤技术
, t) u# _9 w p" n- p8 U# v* _(一)B淋巴细胞杂交瘤技术的实验流程/ f+ X5 N7 E- U1 ]* ?) i* W# L! [) G7 `
(二)应用于杂交瘤技术中的培养用液
* L: r" m; f7 m2 b! p# b- R. k(三)杂交瘤细胞的染色体分析/ e! Y1 L! } |6 Z1 k
二、单克隆抗体, Z: R2 G) Q$ ]4 [9 Q5 j' |
(一)单克隆抗体的概念
5 ~) `' r. M1 l' Y! O: |0 m(二)单克隆抗体的鉴定
1 N; M9 H( N4 z/ r; n* n5 d& l, A! x(三)单克隆抗体的生产和提纯: N, o) P7 s; l5 y/ u6 [. G
(四)单克隆抗体技术的发展( }2 _3 J* _% ]1 V/ l# J0 y( |# \4 Q- f
第二十章动物细胞大规模培养 L7 [4 n! m/ Y1 o
第一节动物细胞培养有关的特性& E0 f; e6 f2 I4 Q" R
一、动物与微生物细胞的差别9 v W+ y; L+ j& F9 `# `6 r p! O
二、动物细胞生长特性
+ w9 b! A B" S& ?5 n1 j. }/ w第二节发酵
' o% }# J( [: Q \+ E5 r/ J一、培养方法
5 U) I9 l5 x) {' k' M(一)贴壁培养
4 p3 y. T$ B8 p2 Q7 ^/ Z; z/ D' E(二)悬浮培养/ H% `& }/ f+ \& J
(三)固定化培养3 T7 Y2 a3 `9 @& L* A
二、动物细胞培养的发酵工艺! _/ x4 R0 T# D9 F( Y! f! R$ I- e
(一)分批式培养
# ~ x& c+ S2 J(二)流加式培养1 G5 T- }9 ~) s9 M& G
(三)半连续式培养
5 ]5 V# P( h6 L1 B(四)连续式培养
# Z; {7 ~8 j$ U7 Y8 R(五)灌注培养+ i. `+ {* c' R: x3 P% z
三、发酵工艺条件及其控制
+ T( j; b% g9 S) s" W! R* E" f(一)培养基2 m% o/ E3 v. e! T9 A
(二)培养温度的调节控制
$ u$ r) K. p0 b3 ^(三)培养液酸碱度的调节控制
1 {4 P2 ]3 G2 G(四)溶解氧的调节控制
$ N, W6 `* ]5 L o$ l四、动物细胞大规模培养用生物反应器+ b7 ]5 l2 O- ~" _* w: W
(一)搅拌罐生物反应器: d/ y" c' W% Q, T* Z6 A
(二)气升式生物反应器
K2 u1 a, s$ L: E& d( e7 N(三)鼓泡式生物反应器
7 @9 i1 S8 V( \2 L(四)中空纤维生物反应器0 X8 t2 j9 B% h) ]
第三节动物细胞微载体培养技术3 J0 p9 a$ T% R. ^2 j
一、动物细胞在微载体表面的贴壁生长机制
$ O3 z9 U p& I) _" ^二、微载体的主要特性
$ v' S `6 Y W; T4 C! k& H( ^三、微载体的种类及其性质
& c$ G: P$ r+ t2 B. p8 g0 B(一)交联葡聚糖为基质的微载体& \2 u# |: d3 D3 b9 K3 H
(二)塑料为基质的微载体+ B( {) k7 M0 p4 L; v( q/ n
(三)明胶/变性胶原微载体
' e1 B3 ~" H( z1 [, Y2 J(四)玻璃为基质的微载体
3 j0 _, K% d" R/ t3 ^+ f(五)纤维素为基质微载体
# m- o& X: X1 T& X# X( J g(六)液膜微载体: E7 {, Z: p: ` r' B
(七)大孔微载体
" }" _2 s/ S/ i* G! M1 R四、微载体的选择9 K4 _' X) k2 V% k: w% [
第四节动物细胞大规模培养技术的应用# j* L! @1 x6 S, @, ^
一、在疫苗生产上的应用) Y/ j% f7 L7 ]: R$ }
二、在干扰素生产上的应用
% T$ M7 @9 D" [( ]) D2 C三、在单克隆抗体生产上的应用* |# h" G1 H* y+ ~! D
四、在其它基因重组产品生产上的应用1 f) A6 W$ [# ~1 _6 Y7 Z
第五部分植物组织细胞的培养* T7 P# O$ ]% g' c( u
第二十一章植物组织细胞培养的基本原理与技术
" \4 ~8 v. g& v& R- }! [% m/ M第一节植物组织细胞培养技术的概念和类别; q: P5 s! `. y A* H0 ~, a' L
一、植物组织细胞培养的基本概念
: C+ ]) h% s0 A1 |2 n& g, c二、植物组织细胞培养技术的类别& r U& |6 i( M0 F4 ^9 d0 C
第二节植物组织培养技术的发展简史2 g& Z) U5 ~4 A3 c
一、植物组织细胞培养技术的创立阶段6 A! `5 M2 X( R- w* ~
二、植物组织细胞培养技术的发展阶段$ A m9 x9 J' K; I' m( k' }& B
三、植物组织细胞培养技术的应用研究阶段. |+ F& H9 g5 `0 f. \
第三节植物组织细胞培养技术概述3 a3 [5 U, U+ g$ w
一、植物组织细胞培养的基本条件/ a3 [1 L+ R5 G' d
(一)植物组织细胞培养的营养条件
" V) E# P6 B0 r" ~; M% ~' y: s(二)植物组织细胞培养的环境条件4 o S8 X6 m, x& a- n% o- z
二、植物组织细胞培养的基本方法和技术
2 x+ u) M- [2 E6 Q(一)植物组织细胞培养的基本方法
4 e# t! c& S# o$ `: {, C: V(二)植物组织细胞培养的基本技术
4 m4 {* f. K6 V% \/ O. d# Y1 G% D三、植物组织细胞培养的基本程序
7 i' C. l8 y" K; P0 @. x5 I* P9 u四、植物组织细胞培养物离体生长的基本方式
, ^8 S1 L4 C& V8 c+ E( ~2 B) K1 X9 u(一)直接芽分化的方式
5 o# B. [: K3 o/ T% b8 ?3 W(二)通过愈伤组织形成的方式0 g- J. a9 U5 @- ]+ J' O; Z
(三)胚状体形成的方式' y( K6 }7 f( v
五、植物组织细胞培养物的鉴定! V- s4 r" a! A" I4 u
(一)植物组织培养物的组织学观察
' U5 S2 v) W4 G/ ]* J/ K) C7 f(二)植物组织培养物的染色体观察. z; r) |6 B1 s: k- ^
六、植物组织培养技术与动物组织培养技术的异同% M8 m* C7 ^4 N7 t) e
第四节植物组织细胞离体培养时的生物学特征) Z+ V3 }8 R5 `- w. _7 }( p* z
一、植物组织细胞离体培养条件下的全能性
9 `; f T* @ `) k7 Y z(一)植物组织细胞的全能性具有普遍性7 {4 d u! ~' H Y
(二)植物组织细胞全能性实现的途径" p1 ~$ T6 A0 B) g c
二、植物组织细胞离体培养条件下的突变性
2 r# n7 U* C3 K(一)植物组织细胞的变异性具有广泛性2 o: M) w/ ? |3 D2 ~1 U
(二)离体培养的植物组织细胞变异机制
& F5 c- o: d. ]三、植物组织细胞离体培养条件下的类减数分裂现象
$ n$ U* s" `! q% B0 t Y1 ~(一)植物组织细胞类减数分裂现象的存在
6 c% H2 j9 y4 N7 K' B(二)体细胞类减数分裂发生的机制3 t! d `0 Y5 F( d4 e1 v
第二十二章植物组织细胞培养各论( G$ ?4 ?9 r! d- w+ t1 {5 x
第一节植物的胚胎培养- }( A: A4 w8 y# O2 J
一、植物胚胎培养的概念 g( h6 P+ _4 \; |& U" v4 _
二、植物的幼胚培养1 C& u% V: n7 v' M/ J
(一)幼胚培养的基本过程
3 J! n! `- M, D7 z: w0 |(二)植物幼胚培养的实例
, Q' H% h4 Y. ~8 ~9 x三、植物的成熟胚培养+ t% Z1 n M% C) g' T' X0 K
四、植物的胚珠培养 F( |& m% o" G a7 O
(一)胚珠培养的基本过程
6 b" F/ l' O4 f% w(二)胚珠培养的实例+ q/ _9 z. u% D0 Q( @" m3 x
五、子房的培养/ s+ ?/ C* w8 C
(一)子房培养的基本过程& M) S' D9 n- Z: z
(二)植物子房培养实例
, N6 p% y5 f) q2 Y六、植物的胚乳培养
' v% j4 y& C. ?) V& |3 K% o(一)胚乳培养的基本过程
& U# |" z: y6 _5 l+ v% m* I(二)植物的胚乳培养实例3 \2 L1 P+ s: d. x5 n3 |
第二节植物的器官培养. x, k" ]- ?- |' j
一、植物器官培养的概念
$ @- Y# r- l T二、离体根培养4 _( F1 D I8 {+ M( k
(二)根培养的基本过程9 h3 {" c) N4 z! L5 D) l9 Q
(二)植物离体根的培养实例
" H. x: q8 i; U三、离体茎培养
2 l) f. r f" o, h' g1 p(一)离体茎培养的基本过程
% F" u; Y; a% M& @(二)植物茎尖培养的实例4 G/ s' Z, @, ` E% Q
四、离体叶培养5 R3 y/ X% z7 m' P) v) c! j
(一)叶培养的基本过程/ e2 e" O( p& S
(二)叶器官培养的实例
+ l! U4 l# L- j3 O: {- q6 `0 M五、植物花器官的培养
$ G5 K$ `( L9 ]. h9 I$ X" u(一)花培养的基本过程# N0 ~' S- X) |- P
(二)花器官培养的实例: l. Q8 P0 B! }9 W3 }
六、植物种子和果实培养4 R$ O1 N" z7 Q+ U% X+ u& C
(一)种子和果实培养的基本过程2 x3 @% c8 C( }2 P
(二)植物种子和果实培养的实例4 ?. C1 ?2 w4 y1 S; o
第三节植物的组织培养
( r1 t; i1 _6 j6 N3 f/ e一、植物的组织培养概念% s9 ~& |5 s$ ]4 V) j$ ?8 w9 G4 A
二、植物愈伤组织的培养
1 I" ^* I2 p: J& q三、植物胚性愈伤组织的培养
: }( g% K$ k6 X; M3 q5 G3 o6 F" {" z(一)植物胚性愈伤组织培养的基本过程' h$ i; l* N' e5 C! X3 n' F
(二)植物愈伤组织培养及植株再生实例
1 ^2 {. |7 n- }/ C第四节植物的细胞培养
2 @( l E- ^/ |/ m- T一、植物细胞培养的概念0 l) l- t; C! R4 N
二、植物细胞悬浮培养
. b& }$ s2 o8 n7 F/ L(一)植物细胞悬浮培养的基本过程# Z+ v2 t6 |2 N6 e: A: ^5 R0 O
(二)悬浮细胞的培养实例
4 W2 S) B; @" Z三、植物的单细胞培养
* L" R! y6 E' |* f4 v V(一)植物单细胞培养的基本过程
5 L5 h' x4 o; j: l# K" J(二)植物单细胞培养实例2 O0 d0 ~1 \1 N( s, H/ H
第五节植物的花药与花粉培养. o( m! D9 ]8 Y
一、植物花药与花粉培养的概念
) W. \- T* r& Y' ?6 E# I2 L) u二、植物的花药培养
6 I& H' @( ^5 s- g) e6 X8 j(一)花药培养的基本过程
z4 _" f* A; t3 U: w$ `. y(二)植物花药培养实例7 [0 n# h4 r" o$ s
三、植物的花粉培养
3 ]2 V) r0 _) L0 d1 X(一)花粉培养的基本过程
& R8 M* z; R0 s6 W3 T5 `% O3 G(二)植物花粉培养实例
# E r* W. U2 k0 z: W% x第六节植物的原生质体培养! o5 S. R( D) z, E7 X
一、原生质体培养的概念3 G$ z: x9 b. ?/ x1 s
二、原生质体的培养3 P6 i: V# ~, V7 E
(一)原生质体培养的基本过程/ `! j! E3 K* k8 s, t, i
(二)原生质体培养实例1 h) {& z( n9 @ Q3 \8 ?# U
第二十三章植物组织细胞培养的应用
# K! Z& E$ r# t% ^ n) V/ u第一节植物组织细胞培养的应用技术* ]9 I+ q) Q) `" i
一、植物基因转移技术
; A$ f7 L% Y1 ]7 G6 M(一)植物基因的获取
9 r4 e1 N2 i; ]! @4 c+ ` f(二)植物基因的载体- ]$ P& J6 [, F' ~. s. o1 i, G; @
(三)植物基因的转移方法
( P; W8 V# B v4 ~. d(四)转基因植物的检测7 L ]5 V, e# V
(五)植物基因转移实例
; k9 L+ |# n" G; [' T+ v% A二、植物体细胞融合技术' ]1 G2 B4 I1 q2 }: s: L
(一)原生质体融合的基本方法
" j2 G: o/ |( Z6 n1 c. r2 y& x(二)原生质融合体的生长发育1 J, _6 ]0 H! I- |! g1 u* B
(三)原生质体融合实例9 y" e3 T" D+ w0 P9 ~ V; V# ]; s
三、植物体外受精技术
- `. {5 g; |8 i2 x6 n* A- U5 `8 b2 f四、快速繁殖植物技术
4 E0 A0 A1 Q j9 r4 G, j第二节植物组织细胞培养在农业上的应用
$ V- l$ U1 i. q& f一、利用植物组织培养技术改良植物品质3 S j0 ?8 Y4 o/ \1 j' |
(一)利用植物组织培养技术进行倍性育种% ^& ]1 V8 I# Q+ E% x
(二)利用植物组织培养技术进行远缘杂交育种
! V" s& I1 E# H; e(三)利用植物细胞培养技术进行突变育种# F* g/ G w2 F2 g+ c$ f) i
二、利用植物组织培养技术培育脱毒植物1 L: `. ^! Z1 x" w
(一)利用茎尖培养技术进行植物脱毒5 b w3 n. a. C, w! W0 E. f
(二)利用植物组织培养技术进行植株脱毒
, u/ k6 @. S: m2 ^6 a! u2 C(三)利用植物组织培养技术快速繁殖植物' ~$ i4 Q0 T* ~0 Y8 l8 ^% V) q
三、利用植物组织培养技术保存植物种质
, ]0 J+ U; S7 j. C8 C2 ]$ A(一)植物组织细胞超低温保存的优点* M+ q4 y, `) a# y4 {4 v' W
(二)植物组织细胞超低温保存技术
v& Y1 P6 P. h(三)植物超低温种质保存实例8 S" \7 `) b' u
四、利用植物组织培养技术合成人工种子
% B, Y" P, i0 y% N(一)人工种子的特点
) x! @, q3 h/ ?' ^/ x1 a(二)人工种子的应用前景 I0 e, T+ ?9 s, f C
(三)人工种子制作的基本技术; p/ A2 _# t+ R% M- @
(四)人工种子制作实例# }" Z/ u9 n8 w5 U% H
第三节植物组织细胞培养技术与植物产品生产
. S+ {" t" f/ E9 H$ k一、利用植物组织细胞培养技术工厂化生产试管苗. M6 \- U2 E3 u) ]5 N' o% h/ y' R- S
(一)用植物组织细胞培养技术建立植物的无性系- ~/ H5 v0 E% O3 V8 R: }: P
(二)试管苗工厂化生产实例5 z% ?" Z! D7 e$ e9 i* f/ R
二、利用植物细胞大量培养技术生产植物产品
7 b& w7 @% E) @. n8 A- q. K, {(一)培养的植物组织细胞积累次生代谢物的特点# i0 b' Y |& l& B8 _
(二)培养的植物组织细胞积累的次生代谢物之类别
$ j6 T' j" ?8 w5 m2 t(三)利用植物组织细胞培养技术生产次生代谢物的方法7 L4 J8 E2 R k( @7 W6 s
(四)利用植物组织细胞培养生产次生代谢物的实例
8 k: Z8 b" Q4 I4 ]1 U9 _* V第四节利用植物细胞培养技术生产植物药
$ Q) ?8 l1 s% j4 e% U9 B" T一、利用植物细胞培养技术生产植物药的优势和不足+ N6 J. E/ U9 B' R- E
二、利用植物组织培养技术生产的植物药的类别4 m2 t) Z& n k8 V6 h
三、植物药物生产的主要技术3 o M. O5 ^6 O# p% g- _9 X7 E% v
(一)发状根培养技术1 s& Z2 X' d6 ~' M2 i3 r
(二)两相培养技术
/ T# z# {: C& |, f% c/ N(三)反义技术
9 m* i: @+ v& p四、利用植物组织细胞技术生产植物药的实例
- w# Q- x/ b& E' w. U, i五、植物药工业化生产实例5 J; n2 a' r) G9 j2 M" D$ N
附录
9 H5 s7 Y) `! X# Y附录Ⅰ无血清培养基及添加剂供应商一览表3 R: [+ O, q5 q, `" P; @3 h
附录Ⅱ水合物的等量值表
* t% M; U+ ^( i附录Ⅲt界值表
" }0 T- T4 P0 d3 N$ p' W/ o, h附录Ⅳ离心机转速(r/min)与相对离心力(RCF)的列线图/ f: s8 M5 q( Y3 X
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发表于 2011-3-20 08:51
发表于 2011-3-21 11:20
